摘要：背景:外周血单核细胞预激活是动脉粥样硬化形成的重要早期事件和促进因素之一,丹参酮是从传统中药丹参中提取的一种脂溶性成分,具有确切的抗动脉粥样硬化作用。目的:通过检测外周血单核细胞的黏附活性与分泌活性,分析原发性高血压患者病程早期是否存在外周血单核细胞预激活,并探讨丹参酮对体外培养条件下外周血单核细胞激活的抑制作用。设计:病例对照分析。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科与中医药研究室。对象:选取2003-01/2004-10华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科收治的未经治疗或已停用降压药物2周以上的原发性高血压患者30例,男16例,女14例;平均年龄(44.6±7.4)岁;体质量指数(26.2±4.5)kg/m2;平均病程(38.5±16.9)个月;对本实验均知情同意。根据1999年WHO/ISH的高血压诊断标准,均为高血压Ⅰ～Ⅱ级。排除继发性高血压、器质性心脏病、高脂血症、糖尿病、肝肾功能障碍、感染等临床情况以及高血压所致的心、脑、肾、血管等靶器官损害。另选择30例血压正常的健康体检者作为正常对照组。人脐静脉内皮细胞(武汉大学物种保存中心);丹参酮注射液(雅安三九药业有限公司,批号020724)。方法:①入选者均抽取静脉血4.0～5.0mL,采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法和塑料吸附法分离单个核细胞,37℃孵育40～60min后收集贴壁细胞即为外周血单核细胞。瑞氏染色后镜下观察细胞形态符合单核细胞特征,锥虫蓝拒染试验测定活细胞数>95%。将新鲜分离的外周血单核细胞重悬,按4×107 L-1接种到24孔培养板上,每份标本设3孔:第1孔为基础分泌孔,第2孔为血管紧张素Ⅱ刺激孔,第3孔为丹参酮预处理孔。在血管紧张素Ⅱ刺激前先将外周血单核细胞与丹参酮共同孵育30min。血管紧张素Ⅱ、丹参酮终浓度分别为1×10-8mol/L和1×10-8g/L,外周血单核细胞终浓度为2×107 L-1。37℃下置于体积分数为0.05的CO2培养箱内24h,分别收集培养上清和细胞成分。②制备外周血单核细胞悬液,密度调整至2.5×109 L-1。在24孔培养板上用含体积分数为0.1小牛血清的M199培养基培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长至对数增长期后,铺板汇成单层,每孔加入100μL外周血单核细胞悬液,37℃下分别孵育2,4h,去除未黏附细胞,戊二醛固定后计数黏附细胞,高倍镜下每孔计数40个视野,取其平均值。③采用双抗体夹心ELISA法和反转录-聚合酶链技术检测外周血单核细胞培养上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的浓度及其mRNA的表达水平。主要观察指标:①外周血单核细胞黏附活性的变化。②外周血单核细胞培养上清中细胞因子浓度及其mRNA的表达。结果:①孵育2,4h时外周血单核细胞与内皮细胞的黏附数,在基础状态下高血压组和正常对照组基本相似(t=1.153～1.577,P均>0.05);血管紧张素Ⅱ刺激后高血压组明显多于正常对照组(t=3.842～4.536,P均0.05)。②基础状态时,两组培养上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的浓度均较低(t=0.981～1.829,P均>0.05);血管紧张素Ⅱ刺激后,高血压组各细胞因子浓度均明显高于正常对照组(t=2.442～5.075,P0.05)。两组外周血单核细胞中各细胞因子mRNA的表达与浓度变化基本相似。结论:①基础状态下原发性高血压患者外周血单核细胞与内皮细胞的黏附数及各炎性细胞因子浓度和mRNA表达处于正常人群水平,经血管紧张素Ⅱ刺激后显著升高,提示原发性高血压患者病程早期外周血单核细胞处于预激活状态。②丹参酮干预可使原发性高血压患者外周血单核细胞的黏附活性与分泌活性降至正常水平,证明丹参酮能够抑制预激活的外周血单核细胞进一步激活,一定程度上可防止动脉粥样硬化的发生。