摘要：经鼻高流量氧疗(HFNC)作为新的呼吸支持技术近年在临床得到广泛应用。HFNC治疗时,由于鼻塞及系带长时间、持续佩戴于患者面部,易导致面部多处皮肤发生医疗器械相关压力性损伤,并且当患者改变体位时,由于HFNC鼻塞处无良好的固定设计,易出现鼻塞导管移位或向外翻转,导致通气异常,达不到临床氧疗的目的。为克服上述问题,华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科重症监护病房医务人员设计了一种新型预防HFNC面部压力性损伤减压固定贴,并获得了国家实用新型专利(ZL 2022 2 0754626.1)。该装置一体化设计结构,兼具面部皮肤减压和鼻塞导管固定的功能,保证氧疗效果的同时可改善氧疗体验,提高患者舒适度,适合在临床推广。

摘要：目的针对肝纤维化发病关键基因热休克蛋白47(HSP47)基因构建HSP47-shRNA,初步验证其在NIH/3T3细胞系干预HSP47基因的表达,影响HSP47 mRNA及蛋白水平表达,并观察该细胞功能学变化。方法设计HSP47-shRNA模板,并将其分别设计于U6启动子的下游引物,将U6启动子及其下游HSP47-shRNA的模板双链DNA连接入载体,构建HSP47-pGCsi-U6-shRNA重组质粒(HSP47-1-pGCsi-U6-shRNA、HSP47-2-pGCsi-U6-shRNA和HSP47-3-pGCsi-U6-shRNA)。以非相关干扰质粒作为对照,通过脂质体介导转染HSP47-shRNA至小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中,分别于12、24、48和72h在倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率和荧光表达强度;同时于转染后0、24和48h收集细胞,采用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析HSP47 mRNA和蛋白表达情况;并观察干预后该细胞分泌胶原功能和小鼠转化生长因子(TGF-β1)表达的变化。结果成功构建HSP47-shRNA载体,通过脂质体介导转染入NIH/3T3细胞,各干扰质粒转染效率均约为60.0%,各干扰质粒转染效率间差异无统计学意义(P>0.05)。转染12 h,可见少量绿色荧光细胞,随转染时间的延长,细胞荧光表达量逐渐增加,各干扰质粒于转染72h荧光表达最强。shRNA干扰显著抑制HSP47蛋白的表达,以转染HSP47-1-shRNA 24h后对蛋白表达抑制效果最佳,对HSP47 mRNA的相对沉默效率为(25.83±1.79)%,与空白组及非相关对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。各组HSP47-shRNA干扰质粒对TGF-β1 mRNA的抑制效率以转染24 h效果最佳,相对表达分别为(63.23±2.18)%、(64.53±3.17)%和(75.19±4.20)%,均低于空白组和非相关对照组(P0.05)。各HSP47-shRNA干扰质粒组细胞上清中TGF-β1的抑制率以转染24h为最佳,分别为(51.79±3.12)%、(66.67±2.13)%和(69.61±3.65)%,与空白组相比,HSP47-1-shRNA组与HSP47-2-shRNA组对TGF-β1均有显著抑制作用,且以HSP47-1-shRNA组抑制效率更佳(P0.05)。结论构建了HSP47-shRNA干扰质粒,初步证实其对HSP47的表达干预有效,并引起NIH/3T3细胞功能学的变化。

摘要：目的探讨RNA分子干扰铜绿假单胞菌MexAB—OprM外排泵MexB基因的体内效应。方法针对MexAB-OprM外排泵MexB基因设计siRNA小分子，构建干扰RNA（shRNA）表达载体，将带有小分子干扰RNA（siRNA）质粒电转入铜绿假单胞菌，从小鼠支气管内直接予以siRNA质粒干扰PAO琼脂菌体悬液（1×10^7CFU／ml）攻击，建立PA01野生型及siRNA2干扰型和siRNA阴性对照分子干扰型菌株的肺部感染动物模型。于感染后第1、2、3天腹腔注射美罗培南（100mg／kg，2次／d）。感染后第3、5、7天评估各组小鼠肺部细菌学、肺部病理学、细胞因子水平及肺组织中性粒细胞募集（MPO）水平变化。结果siRNA2干扰组小鼠，感染后3、5、7d的肺部细菌负荷明显下降。且与siRNAnon组和ScrambledsiRNA组比较，siRNA2干扰组小鼠感染早期（3d）病理学改变明显减轻；MPO及炎性细胞因子（IL-1β和IL-12）表达水平升高。而在感染后期（7d）siRNA2干扰组小鼠炎性细胞因子表达水平则下降。结论siRNA分子干扰明显增加小鼠对铜绿假单胞菌感染的抵抗力，降低肺部细菌的载量，增加早期中性粒细胞募集到感染部位并诱导铜绿假单胞菌的早期免疫应答。siRNA分子联合抗生素的治疗，为慢性铜绿假单胞菌肺部感染的治疗提供了有意义的资料。

摘要：目的　研究建立快速检测细菌DNA的方法。方法　设计一对共同引物 ,应用聚合酶链反应 (PCR)法 ,扩增细菌核糖体 2 3S亚单位基因 2 3SrDNA。对 2 3种临床常见致病菌、培养物及临床病例标本采用该方法进行检测 ,并与常规细菌培养法比较。结果　该方法可检测细菌下限为 2 5CFU ,与真菌、乙肝病毒等无交叉反应。对纯菌及培养物均可检出一条明显DNA条带 ,革兰阴性细菌约 35 0bp ,革兰阳性细菌约 4 0 0bp。临床标本 2 3SrDNA检出率明显高于常规培养方法 (P <0 0 1)。结论　应用所设计的共同引物 ,检测细菌 2 3SrDNA ,敏感性和特异性好 ,比常规培养法快速、准确。

摘要：目的:研究原发性肝癌survivin基因表达及治疗靶点作用.方法:收集肝癌和癌旁组织40例.Westernblot法检测survivin蛋白表达,RT-PCR法检测survivinmRNA.原位末端标记法检测组织凋亡指数.设计合成survivin反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)转染hepG2细胞,设置空白对照组、脂质体组、正义链组和各浓度ASODN组.流式细胞术检测凋亡指数,MTT法检测化疗药物对细胞生长抑制率.建立原位荷肝癌鼠模型并分为3组:反义survivin链组、空白对照组及脂质体组.V=ab2/2计算肿瘤体积,以V治疗后/V治疗前×100%计算生长指数.结果:肝癌细胞株和34/40例肝癌组织表达survivin蛋白及mRNA,癌旁组织无survivin表达.肝内转移组(93.5%)和门静脉癌栓组(92.8%)survivin蛋白表达阳性率显著高于阴性组(55.6%)和无癌栓组(66.7%)(p<0.05)肝内转移组(1.105±0.396)和门静脉癌栓组(1.137±0.404)survivinmRNA水平显著高于阴性组(0.572±0.082)和无癌栓组(0.627±0.122)(P<0.05).Survivin阳性组织凋亡指数为1.15±0.33%,显著低于阴性组(4.50±0.83%)(P=0.00002).ASODN组survivin表达减弱,凋亡指数增高,200nmol/L组为10.50±0.76%,400nmol/L组为12.99±0.42%,600nmol/L组为22.21±1.26%,明显高于对照组(P<0.05).化疗药物对ASODN组生长抑制率增高,200nmol/L组为47.7±4.6%(5-FU)、59.7±3.5%(DDP),400nmol/L组为56.8±4.0%(5-FU)、68.2±2.1%(DDP),600nmol/L组为85.2±2.3%(5-FU)、79.9±3.7%(DDP),明显高于对照组(P<0.05).23/25裸鼠成功建立原位荷肝癌动物模型.ASODN组肿瘤生长指数为51.0±24.2%,显著低于空白对照组(70.2±23.4%)和脂质体组(168.0±28.6%)(P<0.05).ASODN组凋亡指数为21.97±2.11%,显著高于空白对照组(3.21±0.57%)和脂质体组(3.07±0.81%)(P<0.05).结论:survivin在HCC发生中有重要作用.survivinASODN转染能下调survivin表达,诱导细胞凋亡,增加HCC细胞对化疗药物敏感性.survivinASODN对荷HCC鼠有一定治疗作用.

摘要：目的观察mir-34a对人脑胶质瘤细胞U87中Dll1基因和蛋白表达水平的影响,探讨Dll1是否为mir-34a的靶基因。方法将人脑胶质瘤U87细胞分为mir-34a模拟物组、阴性对照组、脂质体组和空白对照组,根据人源mir-34a序列,设计并合成其双链模拟物(mir-34a mimics)。将mir-34a mimics以脂质体Lipofectamine 2000包裹,并转染至人脑胶质瘤细胞U87中,转染后48 h采用实时荧光定量PCR方法检测细胞内Dll1基因mRNA表达水平,Western blot技术检测细胞内Dll1蛋白表达水平。实验数据采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。结果转染后48 h模拟物组、阴性对照组、脂质体组和空白对照组细胞内Dll1基因mRNA相对表达水平分别为1.26±0.09、1.29±0.03、1.10±0.12和1.39±0.08;转染后48 h模拟物组、阴性对照组、脂质体组和空白对照组细胞内Dll1蛋白相对表达水平分别为0.011 34±0.041 90、0.628 09±0.035 00、0.913 28±0.036 20和0.868 60±0.039 00。模拟物组Dll1蛋白表达水平均明显低于阴性对照组、脂质体组和空白对照组(Pa0.05)。结论人脑胶质瘤细胞U87中,mir-34a可通过下调Dll1蛋白而非基因表达水平发挥该靶基因转录后翻译水平的负性调控作用。

摘要：目的构建pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)基因真核表达载体,为研制乙肝治疗性疫苗奠定基础。方法根据乙肝病毒核心抗原基因序列,设计合成3对引物,在引物中引入分别针对人、鼠敏感的CpG片段和不含CpG的片段,用PCR方法从慢性乙肝患者血清DNA中扩增出乙肝核心抗原基因片段,将扩增的产物与真核表达质粒pZeoSV2(+)连接,构建重组体pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS),进行酶切、PCR及测序鉴定。结果乙肝核心抗原基因体外扩增产物大小约为530bp。所构建的pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)重组体经双酶切及PCR鉴定,与预期片段的大小相符;测序结果与GenBank中收录的HBcAg全长序列一致,表明pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)真核表达载体构建正确。结论成功地构建了真核重组表达载体pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS),为CpG的功能研究和乙肝治疗性疫苗的研制提供了物质基础。

摘要：目的在新型冠状病毒肺炎疫情期间,给患者提供饮食保障,同时保障医务人员饮食配送过程的安全。方法应用质量先期策划管理方法,通过评估患者饮食需求,制订计划(明确新型冠状病毒肺炎患者院内饮食配送团队职责、开展关键防护与交接环节培训、制定患者饮食院内转运衔接流程、进行流程失效模式分析)、流程的实施与运行、流程调整与再确认、反馈5个步骤对新型冠状病毒肺炎患者饮食配送过程进行管理。结果及时有效地落实23个重症病区患者每日饮食供给,实施2个月未发生工作人员感染。结论应用质量先期策划管理方法对流程进行有效设计与开发,实现了对新型冠状病毒肺炎患者院内饮食的高效、安全配送。

摘要：目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6-shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为最佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.

摘要：目的建立中国HBVB、C基因型参照序列。方法从GenBank中获得来源于中国不同地区的HBV全基因序列，通过基因分型和序列比对，以相同位置频率最高碱基作为参照碱基建立序列；将这些参照序列与国内外的参照序列进行比较，了解其中的不同点；对不同编码区的氨基酸序列进行比较。对B、C基因型HBV的碱基替代情况进行统计学分析，其中1762、1764、1896位点采用妒检验，1858位点采用Fisher＇s确切概率法检验。结果获得了中国HBV B、C基因型参照序列。Bc与Ba、Bj基因型HBV的全基因序列同源性分别为99．32％、95．52％，S基因序列同源性分别为99．71％、98．68％；Cc与C、Caus基因型的全基因序列同源性分别为98．44％、93．97％，S基因序列同源性分别为99．27％、95．01％。与Bj型相比，Bc和Ba型同源性更高；与Caus型相比，Cc和C型同源性更高。不同编码区的氨基酸序列也有差异；两种基因型在1762、1764、1858位点的碱基分布差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论建立的HBV B、C基因型参照序列可以作为中国HBV参照序列，为设计引物和分析碱基或（和）氨基酸变异提供参考。