摘要：移动式核酸检测实验室对短时间内提高区域新型冠状病毒核酸检测能力起着极为重要的作用,是落实“早发现、早报告、早隔离、早治疗”的基础和前提。本文总结了在大规模人群新型冠状病毒核酸筛查中应用移动式核酸检测实验室在流程设计、人员配备、生物安全等方面的经验以及工作中的重点注意事项,为今后局部疫情中应用移动式核酸检测实验室进行大规模人群新型冠状病毒核酸筛查提供参考。

摘要：目的:针对BMI-1基因的不同部位构建4种不同的BMI-1 shRNA真核表达载体,转染人宫颈癌细胞系Hela并筛选其有效序列。方法:应用DNA重组技术将针对人BMI-1基因的不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒psi RNA-hH1neo中,构建BMI-1 shRNA表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BMI-1 shRNA3和BMI-1 shRNA4,用阳离子脂质体介导转染Hela细胞以筛选其有效序列。结果:4个BMI-1 shRNA表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BM-1 shRNA3和BMI-1shRNA4经测序鉴定证明插入正确。②在Hela细胞中转染BMI-1 shRNA2和BMI-1 shRNA4能显著下调BMI-1mRNA表达,抑制率分别为59.9%和67.4%(P<0.01)。结论:成功构建了真核表达载体BMI-1 shRNA1、BMI-1 shRNA2、BMI-1 shRNA3和BMI-1 shRNA4,其中BMI-1 shRNA2和BMI-1 shRNA4能有效地抑制BMI-1在Hela细胞中的表达。本工作为今后研究BMI-1在肿瘤基因治疗中奠定基础。

摘要：目的建立测定人类Gfi1mRNA表达量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,为进一步研究新基因的功能奠定基础。方法以Gfi1基因为靶基因设计引物。构建携带Gfi1cDNA的质粒plox-Gfi1,经过纯化,质粒浓度测定,拷贝数的计算及10倍的梯度稀释制备标准品。应用ABI stepone PCR仪对Gfi1mRNA进行实时荧光定量PCR检测,建立标准曲线和熔解曲线。结果建立了Gfi1mRNA表达的实时荧光定量PCR方法,本法线性范围为6.36×102～6.36×108copies/μl,线性相关系数γ2为0.996,熔解曲线为单峰,Tm值为(89.98±0.22)℃,标准品的循环阈值批内变异系数和批间变异系数分别为1.35%～3.61%和1.49%～3.42%。结论本研究建立的Gfi1mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法速度快,灵敏度高,特异性强,重复性及稳定性好,可用于Gfi1基因的定量检测。

摘要：目的:分析引起医院内感染的细菌种类、致病菌科室分布及抗生素使用情况,为临床合理使用抗菌药物提供理论依据。方法:对2008年12月-2009年12月住院患者中临床标本分离培养的严格符合设计条件的200株细菌的患者情况进行调查,对患者的基础病史、感染细菌种类、感染危险因素、抗生素使用情况及细菌耐药性等进行分析。结果:①200株病原菌分离株中普外科27%、ICU 15%,比例最高;②病原菌中革兰阴性杆菌占76.5%,其中大肠埃希菌29.5%、铜绿假单胞菌10.5%、肺炎克雷伯菌10.0%和鲍曼不动杆菌9.5%最为常见,而在革兰阳性球菌中,金黄色葡萄球菌多见12.0%;③手术及其他侵入性操作、住院时间长短、年龄因素等都对医院内感染有着重要的影响;④肠杆菌科细菌对碳青酶烯类抗生素较敏感,而革兰阳性球菌对糖肽类和唑烷酮类抗生素较敏感;⑤细菌鉴定及药敏结果对临床使用抗生素有较好的指导作用。结论:医院要进一步加强医院内感染细菌的监测,加强医护人员的无菌操作观念和培训以减少医院感染的发生概率。同时,临床需合理使用抗生素,以延缓菌株的变异以及耐药菌株的增加。

摘要：目的了解华中科技大学同济医学院附属荆州医院(以下简称"我院")38个临床科室使用便携式血糖仪进行血糖监测的质控现状,为制订院内血糖监测质控管理提供依据。方法对我院血糖监测实施规范化管理培训及考核结束后1个月,第1次采用自行设计的便携式血糖仪对全院38个使用便携式血糖仪进行血糖监测的临床科室进行质控。结果 97.37%的科室更换新批号试纸条时未行质控品检测及登记;92.11%的科室未做到每天血糖检测前进行质控品检测并登记;76.32%的科室试纸未注明开封日期、时间及责任人;65.79%的护士在进行多人采血时,未使用快速手消毒剂进行手的消毒;63.16%的护士未将一次性采血针弃于锐器盒内;68.42%的护士没有帮助患者查找血糖正常或异常的原因。结论我院38个临床科室使用便携式血糖仪进行血糖监测时,质控较欠缺,38名护士临床使用便携式血糖仪监测血糖操作合格,但在手的消毒、医疗废物处理以及对糖尿病患者相关知识的宣教上仍不到位,因此要加大这几个方面质控的力度。

摘要：Internet上有大量的免费分子生物学软件与各种蛋白质、核酸和酶数据库，应用它们，可以极大推动我们的研究工作。Internet上的免费工具软件有在线与离线两种形式。对于在线工具软件，只要通过浏览器，输入一定的信息，便可得到相应的结果，例如二级序列分析、PCR引物设计等信息。而离线工具软件，只要下载了这个软件，便

摘要：目的分析同济医院分离的流感嗜血杆菌的生物学分型及荚膜基因分型,了解本地区分离的流感嗜血杆菌的主要流行株。方法 2012年1月1日至2012年12月31日从华中科技大学同济医学院附属同济医院分离流感嗜血杆菌100株。根据脲酶、吲哚和鸟氨酸脱羧酶试验对流感嗜血杆菌进行传统的生物学分型,分为I^VIII八个生物型。回顾患者病史资料,分析生物学分型和流感嗜血杆菌所引起的疾病之间的关系。用流感嗜血杆菌荚膜编码基因(bexA)和a-f型特异性荚膜基因设计引物,采用PCR技术对流感嗜血杆菌进行荚膜基因检测。通过生物学分型和荚膜基因分型结果的比对,探讨两者之间的关联。结果分离的100株流感嗜血杆菌生物学分型结果如下:III型6株,IV型28株,V型1株,VI型54株,VII型11株。未分离到Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅷ型。分析患者的临床诊断,发现主要流行株VI型流感嗜血杆菌主要引起患者肺炎(包括支气管肺炎和新生儿肺炎)和支气管炎(包括毛细支气管炎和喘息性支气管炎)。荚膜基因分型结果显示,未分离到b型和b-型流感嗜血杆菌。共分离到1株f型,其余99株均为无荚膜抗原的不可分型流感嗜血杆菌。生物学分型和荚膜分型之间无明显的相关性。结论该院分离的流感嗜血杆菌主要为生物型VI型。回顾患者病史,发现VI型主要引起肺炎和支气管炎。荚膜基因分型显示,本地区分离的流感嗜血杆菌主要为不可分型流感嗜血杆菌。生物学分型和荚膜基因分型之间无明显相关性。

摘要：目的利用PCR引物的错配扩增和荧光定量PCR技术,建立一种针对人亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因多态性的快速荧光扩增检测方法。方法收集已经测序验证的MTHFR基因C677T,A1 298C位点的野生型、杂合型和突变型样本,并据此构建野生型和突变型质粒;根据野生型MTHFR基因序列设计ARMS(扩增阻碍突变系统)引物和Taq Man探针并筛选出最合适的突变检测体系,与已知突变信息的214例样本进行比较,以验证该检测体系的可行性。结果建立的Taq Man-ARMS法性能评估优异,样本的最低检测限为10 copies/μL,样本间交叉检测无核酸扩增,体系检测阴性对照无核酸扩增;重复性及实验室内精密度结果良好,MTHFR-667位点和1 298位点重复性检测的标准差介于0.11~0.44,纯合和杂合样本的变异系数(CV)均<4.52%。214例临床样本用该法检测结果与测序法的一致性为100%。结论基于Taq Man-ARMS法检测MTHFR的基因多态性方法简单,快捷,精确,适合用于临床样本快速诊断。

摘要：目的探讨BC-5500全自动血细胞分析仪与UF-50尿沉渣分析仪测定脑脊液标本白细胞数的临床应用价值。方法84份脑脊液标本,分别用BC-5500与UF-50测定其白细胞数,并与手工Neubauer计数盘计数结果相比较。结果UF-50在白细胞数800×106/L时,线性较好,结果较准确。在脑脊液标本中白细胞数较低时,UF-50的检测结果更准确可靠(CV2.8%～3.5%),而BC-5500的结果可靠性则较差(CV16.5%～36.3%),与传统的手工计数结果相比,结果只能在一定的检测范围内较可靠。结论目前尚不能将这两种仪器完全用于脑脊液的白细胞计数,期待着有仪器厂商能够吸取现有检测仪器的优点设计出一种专门针对于脑脊液标本细胞计数的自动化仪器。

摘要：目的:探索以肺炎链球菌胆碱结合蛋白A(pneumococcal choline binding protein A,rCbpA)为抗原的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)反应模型在肺炎球菌性社区获得性肺炎患者(community acquired pneumonia,CAP)检测中的应用价值。方法:设计合成cbpA基因序列引物,通过PCR扩增,构建克隆质粒PGM-T/cbpA和表达质粒。经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl phosphorothioate,IPTG)诱导表达重组蛋白rCbpA;构建ELISA反应模型(rCbpA作为抗原),检测健康组及肺炎球菌性CAP患者组血清中相应的IgM和IgG抗体。并与痰培养、血培养结果相比较。运用卡方检验分析结果差异。结果:成功获得肺炎链球菌重组蛋白rCbpA,建立rCbpA-ELISA模型。以rCbpA-IgM模式检测肺炎球菌性CAP患者组的敏感性为22.5%,与血培养及痰培养法检测的敏感性无统计学差异(χ^(2)=3.529,P=0.060;χ^(2)=0.075,P=0.785);但其特异性为100%,明显高于痰培养(χ^(2)=12.754,P=0.000)。rCbpA-IgG模式检测肺炎球菌性CAP患者组的敏感性为50%,与血培养、痰培养检测的敏感性差异具有统计学意义(χ^(2)=17.635,P=0.000;χ^(2)=7.912,P=0.005)。结论:血清重组蛋白rCbpA对IgM类抗体有高特异性、对IgG类抗体有高敏感性,且该检测方法快,判定结果更准确客观,可以有效提高肺炎球菌感染性肺炎的诊断价值。