摘要：目的:探索使用病理石蜡样本检测新型冠状病毒的方法。方法:采用荧光定量PCR技术,使用新型冠状病毒核酸扩增试剂盒,检测临床确诊患者的肺组织病理石蜡样本1例,无病毒感染肺组织石蜡样本2例和正常人群咽拭子样本2例。建立检测体系,判读检测结果。结果:经过荧光定量PCR反应和信号采集,所有5例样本RNA内参HEX信号扩增曲线均有升起;临床确诊患者手术石蜡样本RNA FAM信号(N基因)扩增曲线升起(Ct值35.48),ROX信号(ORF1ab基因)曲线未升起。重复试验FAM信号扩增曲线升起(Ct值36.00),ROX信号曲线未升起。结合2次检测结果,该例患者病理石蜡样本新型冠状病毒阳性。同时作为对照的2例无感染病理石蜡组织样本和2例正常人群咽拭子样本病毒核酸检测均为阴性。结论:病理石蜡样本提取的总RNA可以满足新型冠状病毒检测的质量要求;根据新型冠状病毒检测指南建议设计和生产病毒核酸检测试剂盒可以满足病理石蜡样本检测的需要;使用所建荧光定量PCR检测体系,病理石蜡样本可以用于进行新型冠状病毒的核酸检测。

摘要：目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)抑制人乳腺癌细胞中鼠双微粒体2(murine double minute 2,MDM2)的表达对癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)合成以及裸鼠移植瘤组织内血管生成的影响。方法根据MDM2已知的c DNA序列设计并转录合成特异性si RNA,转染高表达MDM2的人乳腺癌MDA-MB-468细胞,低氧培养后应用蛋白质印迹法和ELISA法检测肿瘤细胞及其上清液中VEGF的水平。构建裸鼠乳腺癌移植瘤模型,观察MDM2沉默后肿瘤生长情况,蛋白质印迹法、免疫组织化学及ELISA方法检测荷瘤组织和裸鼠血清标本中的VEGF含量,并以CD34标记血管内皮细胞计数微血管密度(microvessel density,MVD)。结果si RNA抑制MDM2表达后,MDA-MB-468细胞分泌的VEGF蛋白显著减少(P=0.006)。裸鼠移植瘤模型显示,封闭MDM2表达使荷瘤组织生长变慢(P=0.008),且荷瘤小鼠血清VEGF水平明显减低(P=0.008),荷瘤组织内MVD也明显降低(P=0.003)。结论 MDM2 si RNA能有效减低乳腺癌细胞中VEGF的合成,并抑制裸鼠移植瘤组织内新生血管的生成,为MDM2/VEGF途径抗肿瘤血管生成作用的研究及靶向药物开发提供了新的思路。

摘要：目的:构建大鼠心肌素(myocardin)慢病毒RNA干扰(RNAi)重组质粒,分析该RNAi质粒的干扰效果及其对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法:设计并合成3对针对大鼠myocardin的shRNA片段,退火后将双链oligo-DNA克隆入慢病毒质粒载体pGCSIL-GFP获得重组干扰质粒pGCSIL-GFP-shMyocd。以pEGFP-N1/X124G表达载体构建含Flag标签的myocardin表达质粒pEGFP-N1-Myocd。将重组干扰质粒和过表达质粒共转染293T细胞,Western blotting分析Flag标签蛋白的表达,筛选出干扰效率最好的干扰质粒并大量扩增。干扰质粒转染大鼠主动脉VSMCs,RT-PCR和Western blotting检测myocardin及分化标志物SM22α的表达。结果:成功构建大鼠myocardin的慢病毒干扰质粒pGCSIL-GFP-shMyocd和过表达质粒pEGFP-N1-Myocd。上述2种质粒共转染293T细胞后,1号干扰质粒转染组Flag标签蛋白表达下降最显著。将1号质粒进行大包装,获得滴度为1×10^(12)TU/L的慢病毒颗粒,该病毒转染VSMCs后,myocardin表达明显下调并伴随分化标志物SM22α表达的显著下降。结论:成功构建大鼠myocardin慢病毒重组干扰质粒pGCSIL-GFP-shMyocd;抑制基因myocardin表达后伴随VSMCs分化的表达下降,提示myocardin在VSMCs分化过程中的重要性。pGCSIL-GFP-shMyocd重组质粒的成功构建为后续研究特定病理条件下(如动脉粥样硬化)VSMCs表型转变的分子机制奠定了基础。