摘要：目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA (shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间的核苷酸片断,并定向克隆到仅表达EGFP的空载体pGenesil-1的U6启动子下,构建重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2；不针对任何序列的重组质粒pGenesil-1-hk作为对照。通过脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,应用逆转录聚合酶链反应,western blot蛋白免疫印迹法分别从mRNA、蛋白水平检测阻抑效应。结果酶切鉴定和测序结果证实了pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2、pGenesil-1-hk的成功构建,转染HepG2细胞后,pGenesil-1- s1、pGenesil-1-s2组SMYD3 mRNA和蛋白表达均明显下调,与pGenesil-1-hk组及pGenesil-1对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论构建的重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2能特异性抑制SMYD3 在HepG2细胞中的表达。

摘要：应用AdMax腺病毒载体系统构建携带siSPK1基因的重组腺病毒,进一步研究SPK1基因对N2a细胞凋亡的影响。设计可形成小发夹结构的SPK1-siRNA模板cDNA序列,克隆至质粒pDC316-siRNA,构建SPK1-siRNA穿梭质粒pDC316-SPK1,经鉴定正确后,将pDC316-SPK1与辅助包装质粒(pBHG loxΔE1,3 Cre)共转染至HEK293细胞,包装纯化并扩增重组腺病毒颗粒,终点稀释法测定病毒滴度;病毒感染N2a细胞,Western blot法检测SPK1蛋白的表达;Hoechst33258染色检测SPK1基因对N2a细胞凋亡的影响。酶切后PCR分析、测序鉴定表明,pDC316-SPK1构建成功,病毒纯化后滴度为2.50E+10 PFU/mL;重组病毒可在蛋白水平抑制SPK1的表达;SPK1基因抑制后,N2a细胞凋亡增加(P<0.001)。上述结果表明,含有SPK1-siRNA的重组腺病毒构建成功,且具有抑制SPK1蛋白表达的功能,该基因沉默后,N2a细胞凋亡增加。

摘要：背景:3-硝基丙酸可以抑制氧化磷酸化过程,损害细胞的能量代谢从而引起细胞的损伤。但是小剂量的3-硝基丙酸却可以通过轻度抑制细胞的氧化磷酸化过程,激发细胞内源性保护因子保护神经元,增加神经元对缺血缺氧的耐受性,但它对多巴胺能神经元是否也有类似的作用尚不十分清楚。目的:探讨3-硝基丙酸预处理能否增强多巴胺能神经元对1-甲基-4苯基吡啶离子毒性的耐受。设计:以能分泌多巴胺的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为研究对象,进行随机对照的探索性研究。单位:一所大学附属医院的神经科。材料:实验于2003-03/11在同济医学院病理生理实验室完成。SH-SY5Y细胞购于北京协和医科大学细胞典藏中心。干预:细胞随机分为6组,将1-甲基-4苯基吡啶离子加入到培养的多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞中制作帕金森病的细胞模型,在加入1-甲基-4苯基吡啶离子(0.25mmol/L)前,分别单次或多次加入3-硝基丙酸(0.2mmol/L)形成预处理,应用四氮唑盐检测细胞生存率,犤3H犦DA摄取率测定多巴胺能细胞突触前功能。主要观察指标:主要结局:细胞生存率。次要结局:犤3H犦DA摄取率。结果:1-甲基-4苯基吡啶离子组细胞生存率(54.3%)较空白对照组明显降低(P<0.01),3-硝基丙酸预处理后,细胞生存率明显增高,分别为71.8%(单次),85.2%(多次)。

摘要：背景:有实验已证实多种神经营养因子具有促进损伤神经元存活、分化和轴突再生的作用,使损伤后的脊髓组织结构完整性能得到最大的保存。目的:观察神经生长因子对大鼠脊髓损伤后神经再生和运动功能的影响。设计:随机对照观察。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科。材料:选用30只成年健康雄性Wistar大鼠(同济医学院动物实验中心)。方法:实验于2004-01/2005-01在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科完成。采用随机抽签法将大鼠分为治疗组和对照组,每组15只。①造模:应用改良Allen’s打击法致伤脊髓。②干预措施:造模后,治疗组大鼠给予蛛网膜下腔注射含1μg神经生长因子的生理盐水0.05mL,1次/d,共3周;对照组大鼠注射等体积的生理盐水,1次/d,共3W。③斜板试验:在造模前和治疗后3d和1,2,3周分别应用改良Rivlin法(斜板试验)测定大鼠运动功能值。④形态学观察:造模后2天和3周,分别取7只治疗组大鼠和8只对照组大鼠进行NF200免疫组织化学检测与轴突计数。主要观察指标:大鼠造模前、治疗后3d及1,2,3周斜板试验结果以及大鼠造模后2d和3周白质区轴突计数。结果:①治疗组大鼠脊髓损伤后斜板试验结果在术后1,2,3周时分别为(45.2±3.2),(51.2±3.8),(53.4±4.6)°,明显高于对照组(37.2±2.8),(42.6±3.5),(44.5±5.6)°,差异有显著性(P<0.05)。②治疗后3周,对照组白质内可见少量、散在不均匀的NF200着色点。治疗组白质内可见大量均匀的NF200着色点。治疗组大鼠脊髓损伤后3W白质内轴突计数明显高于对照组(363.6±34.2,187.5±32.1,P<0.05)。结论:神经生长因子对脊髓损伤后的神经再生有一定的促进作用,并有助于功能恢复。

摘要：背景:目前已经了解血清瘦素与肥胖的关系密切,血清瘦素和胰岛素与伴有肥胖的高血压关系如何?目的:研究老年男性肥胖高血压患者血清瘦素和胰岛素水平的变化,探讨瘦素抵抗与老年男性肥胖高血压的关系。设计:以诊断为依据,设立对照的回顾性研究。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科、核医学科。对象:62例老年男性患者均来自2001-10/2002-06华中科技大学同济医学院附属协和医院的住院和门诊患者,年龄60～82岁。高血压的诊断采用1999年世界卫生组织建议的血压判定标准:收缩压≥140mmHg(1mmHg=0.133kPa)和(或)舒张压≥90mmHg即诊断为高血压。方法:用放射免疫法测定41例高血压和21例正常血压的老年男性患者血清瘦素和胰岛素的含量。主要观察指标:老年男性肥胖患者和非肥胖者血压、体质量指数、血清瘦素和胰岛素水平。结果:高血压肥胖者较正常血压肥胖者血清瘦素和胰岛素含量分别升高1.8μg/L和2.7mIU/L,差异均有显著性意义(t=2.212,2.395,P<0.01)。高血压肥胖者较非肥胖者血清瘦素和胰岛素水平分别升高2.7μg/L和4.7mIU/L,差异均有显著性意义(t=3.348,5.113,P均<0.001)。高血压70岁以上者较高血压60～70岁者血清瘦素水平升高1.7μg/L,差异均有显著性意义(t=2.767,P<0.05)。

摘要：背景:血浆纤维蛋白原(fibrinogen,Fbg)水平的升高是脑血管病的主要危险因素,纤维蛋白单体聚合功能的评价远较Fbg水平的测定具有更重要的临床价值。目的:研究缺血性脑血管病患者纤维蛋白单体聚合功能的临床意义及康复介入对其的影响作用。设计:以患者和正常人为研究对象,病例-对照研究。单位:一所大学医院血液病研究所和神经内科。对象:2001-09/2002-03检测华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科110例不同类型的缺血性脑血管病患者和50例健康人。方法:随机选取31例脑梗死患者进行康复介入,采用血浆纤维蛋白单位聚合功能测定系统进行测定各组血浆纤维蛋白单体聚合功能参数。主要观察指标:纤维蛋白单体聚合功能各项参数的异常情况。结果:缺血性脑血管病患者较健康人纤维蛋白单体聚合功能各项参数均显著增高(P<0.01);缺血性脑血管病患者Fbg水平和纤维蛋白单体聚合速率(FMPV)的异常率较健康人显著增高(P<0.01),纤维蛋白单体聚合功能异常患者缺血性脑血管病的相对危险度(RR)分别是健康对照组的4～31倍;脑梗死患者中,前循环梗死组FMPV较后循环梗死组和腔隙性脑梗死组显著升高(P<0.05);康复介入前脑梗死患者纤维蛋白单体聚合功能显著高于健康对照组,康复介入后纤维蛋白单体聚合功能各参数有所降低,但与治?

摘要：背景:雌激素对帕金森病(Parkinson'sDisease,PD)可能具有保护作用,这为PD保护因素的研究提供了一条新的线索。目的:探讨雌激素对帕金森病是否具有保护作用。设计:完全随机对照实验研究。地点和材料:本研究在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科实验室进行,材料为Bab/c小鼠96只,雌性,由同济医科大学动物学部提供,体质量20～25g,平均(21.8+2.5)g。干预:将实验小鼠随机分为3大组:A组(正常雌性小鼠MPTP造模组);B组(去势后MPTP造模组);C组(MPTP造模后去势组)。其中B组又分为两组,给予生理盐水组和给予雌激素组;C组分为两组,给予生理盐水组和给予雌激素组。主要观察指标:利用免疫组化染色(ABC法)计数酪氨酸羟化酶(TH)的阳性细胞数,用TUNEL法观察每视野下凋亡细胞的数目,比较各组的差异。结果:A组比B组中给予生理盐水组和C组中给予生理盐水组的TH阳性细胞数目多,凋亡细胞数目少(t=1.92,P0.05);B组中给予雌激素组比B组中给予生理盐水组;C组中给予雌激素组比C组中给予生理盐水组TH阳性细胞多,凋亡细胞数目少(t=1.97,P<0.05)。结论:雌激素对帕金森病具有保护作用和损伤修复作用,且与凋亡有关。

摘要：背景:睡眠障碍影响身心健康,目前医学生的睡眠问题研究在本科生中开展较多,而关于其他类医学生睡眠质量问题尚未充分探讨。目的:了解本科生、七年制学生和硕士研究生等三类医学生的睡眠质量及其影响因素,为提高医学生的睡眠质量提供科学依据。设计:抽样调查。地点、对象和方法:在华中科技大学同济医学院中以整群抽样的方法抽取本科生、七年制学生和硕士研究生998人,采用自制的睡眠状况调查表进行调查。收回有效问卷918份,男生389人,女生529人,年龄16～35岁。主要观察指标:使用匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgsleepqualityindex,PSQI)评价学生的睡眠质量,以≥8分为存在睡眠障碍的标准;影响因素包括一般状况和心理卫生状况。结果:17.32%的人有睡眠质量问题,本科生、七年制学生和硕士生的睡眠障碍现患率分别是23.37%,14.02%和12.16%,本科生睡眠障碍现患率显著高于七年制学生和硕士生(χ2=16.07,P<0.01)。逐步回归分析发现影响睡眠质量的因素包括睡眠环境差、寝具不适、焦虑、抑郁、学习紧张和锻炼少。本科生PSQI总分显著高于七年制学生和硕士生(F=15.20,P<0.05);七年制学生入睡时间得分显著低于本科生和硕士生(F=9.17,P<0.05);硕士生睡眠时间得分显著低于本科生、七年制学生(F=18.72,P<0.05);硕士生日间功能?

摘要：背景:维生素B12缺乏会产生神经功能障碍,影响中枢神经系统及全身的代谢,补充维生素B12对预防及延缓阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)的发展作用机制尚不清楚。目的:研究AD与血清维生素B12,叶酸及血浆同型半胱氨酸水平之间的关系,探讨导致痴呆的机制。设计:以诊断为依据的非随机对照研究。地点和对象:2002-10/2003-05于华中科技大学同济医学院附属协和医院住院治疗的AD患者30例(AD组),均符合美国神经病学语言障碍和卒中-阿尔茨海默病和相关疾病学会(NINCDS-ADRDA)的很可能AD标准。对照组为同期参加体检的健康正常人30例。方法:采用简易精神状态量表(MMSE)对两组患者进行评分,并用放免分析法测定血清维生素B12及叶酸水平,荧光偏振免疫法(fluorescencepolarizationimmunoassay,FPIA)测定血浆同型半胱氨酸水平。主要观察指标:①AD组及对照组之间维生素B12水平差异。②AD组及对照组之间Hcy的水平差异。③MMSE得分与维生素B12及Hcy之间的相关性。结果:AD组维生素B12水平(217.3±134.2)pmol/L明显低于对照组(313.6±184.7)pmol/L,二者差异有极显著性(t=3.93,P<0.001)。AD组血浆同型半胱氨酸(18.9±6.8)μmol/L高于对照组(9.4±4.1)μmol/L,差异有极显著性意义(t=7.66,P<0.001)。AD组叶酸水平(29.2±12.7)

摘要：背景:脑源性神经营养因子对多巴胺能神经元具有特殊保护作用,而帕金森病的主要病理改变是黑质致密部多巴胺能神经元的变性和丢失。帕金森病的发生可能与脑源性神经营养因子基因多态性有关。目的:探讨中国人群中脑源性神经营养因子基因多态性与散发性帕金森病的相关性,以期为该病的一级康复预防提供遗传学数据。设计:以散发性帕金森病患者DNA 为研究对象,以社区健康人群DNA 为对照,探索性基础研究。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科,华中科技大学人类基因组中心。对象:以武汉协和医院神经内科提供85例散发性帕金森病患者(研究组,均为汉族,居在华中地区长期居住)DNA 和华中科技大学人类基因组中心提供的健康人(对照组,均为汉族,居在华中地区长期居住)DNA 为研究对象。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法,对健康人和散发性帕金森病患者进行基因分型。主要观察指标:检测两组G 196A 和C270T 多态性位点的基因型及等位基因。结果:研究组和对照组G 196A 多态性位点均以G /A 基因型为主,频率分别为50.6%和52.0%;C270T 多态性位点均为C /C 基因型。两组间脑源性神经营养因子基因G 196A 和C270T 多态性位点各基因型和等位基因频率差异均无显著性(P >0.05)。结论:中国华中地区汉?