摘要：目的　研究siRNA对肝癌细胞株HepG2中Survivin基因表达的抑制作用。方法　设计、合成一对Survivin编码基因的反向重复序列 ,中间间隔 9个核苷酸序列 ,通过定向克隆至载体Psilencer2 1,构建siRNA真核表达载体 ,经稳定转染HepG2细胞后应用RT PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中Survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果　测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT PCR及流式细胞术检测 ,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Sur vivin基因表达分别达 73%和 75 %。结论　构建的Psilencer (+) Survivin重组质粒能有效抑制Survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。

摘要：目的:探讨转入靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响. 方法:设计、合成一对survivin编码基因的反向重复序列, 中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体PSilencer2.1, 构建siRNA真核表达载体,经稳定转染HepG2细胞后对转基因后肿瘤细胞的生物学行为进行观察. 结果:测序证实siRNA真核表达载体构建成功.通过RT- PCR及流式细胞术检测,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin基因表达分别达73%和75%.转染细胞生长速度明显减慢,凋亡率增加15倍.裸鼠体内成瘤率下降75%,9-30 d肿瘤体积分别为0.10±0.01 cm3,0.30±0.03 cm3,0.39±0.11 cm3,0.45±0.13 cm3,0.49±0.07 cm3,0.58±0.01 cm3,0.60±0.10 cm3,0.65±0.07 cm3,与对照组相比差异显著(P<0.01). 结论:靶向survivin的siRNA能有效降低目的基因的表达并能在体内体外抑制肝癌细胞株HepG2的生长.为进一步逆转肿瘤细胞的耐药性提供了理论指导.

摘要：目的介导MDR1的RNAi腺病毒载体,探讨RNA干扰MDR1基因对人肝癌细胞的作用。方法根据MDR1mRNA序列构建表达MDR1mRNA特异的shRNA的腺病毒穿梭质粒pshuttle-MDR1。与腺病毒载体体内重组为pAd-MDR1后转染人肝癌细胞SMMC-7721,以FCM检测细胞表面膜蛋白P-gp表达阳性率,以共聚焦显微镜检测细胞内Rh123的潴留,WesternBlot检测P-gp蛋白量的变化。结果构建成pshuttle-MDR1经限制性酶切和PCR证实与设计一致,将pAd-MDR1转染肝癌细胞SMMC-7721后,FCM检测细胞表面膜蛋白P-gp表达阳性率为22.9%和30.8%,远低于对照组(85.8%)。WesternBlot经病毒感染的SMMC-7721/R的P-gp含量明显低于对照SMMC-7721/R,而与SMMC-7721/S细胞接近。结论成功构建了pshuttle-MDR1腺病毒载体,并有效干扰了肝癌细胞细SMMC-7721MDR1的表达。

摘要：目的观察小干扰RNA(siRNA)沉默P-21活化激酶1(PAK1)基因对肝癌细胞的增殖、凋亡及迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法设计合成针对PAK1的特异性siRNA(siPAK1)和通用无义siRNA序列,转染肝癌细胞,分为siPAK1组和NC组,通过实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)技术和Westernblot法检测肝癌细胞中PAK1的表达;利用细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞仪、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验,分别检测其对肝癌细胞生物学特性的影响;利用Westernblot检测肝癌细胞中磷酸化的细胞蛋白调节激酶1/2(p-ERK1/2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)分子的蛋白表达量。结果转染siPAK1能明显抑制肝癌细胞中PAK1的表达;沉默PAK1基因能明显减少肝癌细胞的增殖[NC组:Hep3B(100.00±0.00)%,SMMC-7721(100.00±0.00)%;siPAK1组:Hep3B(30.35±3.44)%,SMMC-7721(41.76±5.91)%(PHep3B=0.018,PSMMC-7721=0.022)]、促进肝癌细胞凋亡(PHep3B=0.004,PSMMC-7721=0.006)并且抑制其迁移(PHep3B=0.028,PSMMC-7721=0.018)和侵袭(PHep3B=0.012,PSMMC-7721=0.006)的能力;沉默PAK1基因可抑制肝癌细胞中p-ERK1/2、bcl-2和CyclinD1分子的蛋白表达量。结论沉默PAK1基因可通过PAK1/ERK通路促进肝癌细胞凋亡,并抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

摘要：目的调查全国范围内三级甲等医院外科医师开设和运营自媒体平台的现状并分析其对患者及外科医师的影响。方法采用回顾性横断面调查研究方法。2021年11月5―30日, 以《中华消化外科杂志》第二届中华消化外科菁英荟全体委员所在单位或行业协会中已开设自媒体平台的外科医师为调查对象, 设计《三级甲等医院外科医师开设自媒体平台的调查研究》问卷进行调查研究。问卷通过微信方式发放, 软件平台为问卷星。观察指标:(1)问卷调查结果。(2)开设自媒体平台外科医师的基本信息。(3)开设自媒体平台外科医师的日常工作量和科研背景。(4)自媒体平台相关信息。(5)开设自媒体平台对患者的影响。(6)开设自媒体平台对外科医师的影响。(7)外科医师开设自媒体平台后的感想和建议。正态分布的计量资料以x±s表示。计数资料以绝对数和百分比表示。结果 (1)问卷调查结果。共收回完整有效问卷229份。(2)开设自媒体平台外科医师的基本信息。229位外科医师中, 男195例, 女34例;年龄为(40±8)岁, 年龄36~45岁120例, 年龄≤35岁80例, 年龄>45岁29例。86.46%(198/229)外科医师来自教学医院, 74.67%(171/229)来自省会城市医院。229位外科医师中, 医师职称为初级职称、中级职称、副高职称、正高职称分别占17.90%(41/229)、27.51%(63/229)、37.12%(85/229)、17.47%(40/229);参加工作年限为≤5年、6~10年、11~15年、≥16年分别占19.21%(44/229)、22.27%(51/229)、26.64%(61/229)、31.88%(73/229);医师专业以肝胆胰外科(48.03%, 110/229)和食管胃肠外科(14.41%, 33/229)为主。229位外科医师中, 开设自媒体平台初衷(多选题):52.84%(121/229)通过增加患者数量提高收入、54.15%(124/229)积累病例开展临床科研项目、64.19%(147/229)增加行业知名度获得同行认可、58.08%(133/229)增加社会知名度提升精神层面的满足感, 17.90%(41/229)被动开展。(3)开设自媒体平台外科医师的日常工作量和科研背景。60.26%(138/229)外科医师每年参与线下社会公益活动1~3次, 26.64%(61/229)参与次数>3次。47.60%(109/229)外科医师每周手术量为5~10台, 33.19%(76/229)每周手术量>10台。以第一作者(含共同第一作者)发表高质量英文文章:38.43%(88/229)外科医师尚未发表, 24.89%(57/229)已发表1~3篇, 36.68%(84/229)发表>3篇。51.09%(117/229)外科医师尚未主持纵向课题(包括已结题项目), 13.54%(31/229)主持过国家级项目, 35.37%(81/229)主持过省部级项目。(4)自媒体平台相关信息。65.50%(150/229)外科医师开设微信公众号, 55.02%(126/229)开设问诊平台, 31.44%(72/229)开设抖音, 21.40%(49/229)开设微信视频号, 同1位外科医师可开设多种自媒体平台。35.81%(82/229)外科医师开设自媒体平台时间3年。45.85%(105/229)外科医师>2周更新自媒体内容。63.32%(145/229)自媒体平台获得科室或医院精神支持, 12.66%(29/229)获得科室或医院学科经费支持。82.53%(189/229)自媒体平台为外科医师自行运作。47.16%(108/229)自媒体平台顺利运营, 50.22%(115/229)无法持续运营, 2.62%(6/229)停用。60.70%(139/229)运营自媒体平台耗时50次占6.99%(16/229)。平均每项内容被点赞量或阅读量10万次。平均每项内容被转发次数300次占6.55%(15/229)。87.34%(200/229)自媒体平台的粉丝量<1万。自媒体受众(多选题)主要包括"相关专业小同行""医护

摘要：目的制备双重物理机制载药的卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球,优选制备工艺,观测其特征。方法碳包铁纳米磁粉经稀盐酸处理后制得碳包铁纳米笼。以此纳米笼为磁性内核,壳聚糖为基质,采用反相微乳法制备卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球。该纳米球通过基质包裹和碳包铁纳米笼吸附双重物理机制载药。利用正交实验设计优选纳米球制备工艺,观测纳米球的形貌、粒径、载药量、磁响应性和体外释药性能。结果碳包铁纳米笼与其前体相比,比表面积由20.98 m2.g-1增至40.38 m2.g-1,孔容由70 mm3.g-1增至110mm3.g-1,对卡铂的吸附量为9.6%。卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球球形圆整,磁响应性强,平均粒径(207±21)nm,载药量为(11.40±1.31)%。纳米球的体外释药持续5 d,累计释药量依次为51%,68%,80%,87%,91%。结论良好的磁性内核和双重物理载药机制的有机结合能够优化纳米球的性能,制备出理想的磁靶向纳米药物载体。

摘要：目的了解护理人员安全实施肠内营养的认知、态度和行为状况,为安全实施肠内营养提供参考。方法采用便利整群抽样法,对866名临床护理人员应用自行设计的安全实施肠内营养知信行问卷进行调查。结果 52.5%的护理人员安全实施肠内营养知识得分>36分(满分40分),肠内营养态度得分3.72±0.40,肠内营养行为得分3.69±0.41;不同年龄、护龄、职称、是否接受过肠内营养知识培训的护理人员,其安全实施肠内营养知识、态度、行为有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。结论护理人员安全实施肠内营养知识有待提高,安全实施肠内营养态度积极,行为较好,但需重点关注低年资及中高职称护士。

摘要：目的了解综合医院护士对住院患者自杀预防认知状况,为更好地预防患者自杀提供建议。方法采用自行设计的护士对住院患者自杀预防认知调查问卷,对412名临床护士进行调查。结果护士对住院患者自杀预防认知总均分9.56±2.20,正确率45.52%,其中自杀一般知识均分6.83±1.68,正确率52.54%,自杀预防知识均分2.73±1.41,正确率34.07%。不同年龄、工作年限、职称、学历护士对住院患者自杀预防认知水平比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。有护理自杀倾向/自杀未遂患者经历的护士自杀预防知识得分高于无经历者(P<0.05)。结论综合医院护士预防住院患者自杀的认知水平尚不理想,护理管理者应结合影响因素开展培训。

摘要：目的分析肝切除联合微波消融对肝细胞肝癌病人术后免疫功能及预后的影响。方法肝细胞肝癌病人50例,随机分成两组,实验组25例,行肝切除联合切面微波消融,对照组25例,行单纯肝切除。术前、术后1周及术后1个月检测病人淋巴细胞亚群变化,术后观察病人生存期及肿瘤复发率。结果两组术后1年和2年生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组术后1年无瘤生存率(DFS)比较,差异无统计学意义(P>0.05),实验组术后2年DFS(80%)高于对照组(56%)(P0.05)。结论肝切除联合微波消融不仅能直接杀灭肿瘤细胞,而且能提高病人术后免疫功能,延长无瘤生存时间。

摘要：背景:采用胚胎干细胞源性肝样细胞进行移植治疗时,诱导分化的肝样细胞致瘤性及其对肝脏生化代谢的影响有待观察。目的:评价胚胎干细胞源性肝样细胞移植对急性肝功能衰竭模型小鼠的治疗效果。设计:随机对照观察。单位:中山大学附属第一医院。材料:实验于2005-01/2006-02在中山大学附属第一医院中心实验室完成。选用转染绿色荧光蛋白基因的小鼠D3-ES细胞(129系小鼠分离建系),由中山大学眼科中心黄冰教授馈赠。选用40只清洁级6周龄D3-129系小鼠,雌雄不限,由中山大学实验动物中心提供,许可证号码为SCXK(粤)2004-0011,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。转化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子为美国GibcoBRL公司产品。方法:①利用转化生长因子、成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子联合诱导小鼠D3-ES细胞分化为肝样细胞,将细胞悬液以2.0×106/只注入20只小鼠肝包膜下,其余20只小鼠作为对照组,仅给予生理盐水注射。②注射后24h,采用5μL/20g四氯化碳腹腔注射,诱发两组小鼠急性肝功能衰竭,观察小鼠生存质量及平均生存时间;急性肝功能衰竭24h,取小鼠后腔静脉血进行总胆红素、谷丙转氨酶、白蛋白、血糖、凝血酶原时间等肝功能指标检测;小鼠死亡后取肝脏标本,观察有无肿瘤生成,应用苏木精-伊红染色和免疫组化观察移植细胞生长和白蛋白表达情况。主要观察指标:①小鼠生存质量及平均生存时间。②肝功能指标检测结果。③移植细胞体内生长及肿瘤形成情况。结果:①小鼠生存质量及平均生存时间:诱发急性急性肝功能衰竭后,对照组先出现共济失调等中枢神经系统症状,对照组14只及移植组8只出现腹水。对照组平均存活时间短于移植组,差异有统计学意义(23,62h,P<0.05)。②小鼠肝功能指标检测结果:对照组及移植组总胆红素及谷丙转氨酶较造模前升高,白蛋白及血糖较造模前低,凝血酶原时间较造模前延长,差异有显著性意义(P<0.01),移植组总胆红素及谷丙转氨酶较对照组下降,血糖较对照组高,凝血酶原时间较对照组短,差异有显著性意义(P<0.05)。③移植细胞体内生长及肿瘤形成情况:移植组小鼠死亡后取肝脏标本做病理切片观察,发现肝脏组织结构无明显改变,无肿瘤形成,移植细胞与小鼠肝样细胞形成很好的排列连接并表达白蛋白。结论:胚胎干细胞源性肝样细胞移植能改善急性肝功能衰竭模型小鼠生活质量,延长小鼠生存时间,移植细胞对肝脏生化代谢起到了较好的支持作用。