摘要：目的:研究小RNA干扰泛素特异肽酶22(ubiquitin specific peptidase22,USP22)基因表达对膀胱癌EJ细胞增殖的影响。方法:设计并合成针对USP22基因的3条特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体Translipid转染EJ细胞。通过实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法分别检测转染前后EJ细胞中USP22mRNA和蛋白表达水平,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖率,FCM法检测细胞周期分布。结果:3条针对USP22基因的特异性siRNA均能抑制USP22mRNA和蛋白的表达,其中USP22-siRNA-1的沉默效率最高。转染USP22-siRNA-148h后,EJ细胞中USP22mRNA和蛋白表达水平分别下调65%和80%,而且细胞增殖明显受到抑制,细胞周期被阻滞于G1期。结论:USP22特异性siRNA能够有效沉默USP22基因表达,并显著抑制膀胱癌EJ细胞增殖。推测USP22基因可能成为治疗膀胱癌的一个新靶点。

摘要：目的评价术前CT尿路成像（CTU）三维重建结合术中X线和B超实时引导穿刺建立通道，采用EMS系统行经皮肾镜碎石术（PCNL）的“一站式”诊疗方案在复杂性肾结石中的应用价值。方法回顾性分析华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科2008年12月至2011年12月收治的210例复杂肾结石患者临床资料，其中119例纳入“一站式”方案诊疗组，术前行CTU及三维重建规划设计穿刺路径，采用B超和X线实时引导穿刺建立通道，应用EMS系统行经皮肾镜碎石术。余91例术中无X线监测行经皮肾镜碎石术病例纳为对照组，统计分析两组间1次穿刺成功率、平均通道建立时间、平均手术时间、术中平均出血量及I期结石清除率等指标。术后随访至2012年6月。结果“一站式”方案诊疗组1次穿刺成功率98．3％（117／119），高于对照组92．3％（84／91），差异有统计学意义（P=0．037），手术时间（97．8±13．2）rain较对照组（110．0±14．7）min缩短（P=0．043），且I期结石清除率92．4％（110／119）较对照组83．5％（76／91）高（P=0．037）。两组平均通道建立时间分别为（15．3±3．7）min和（13．9±3．9）min、术中平均出血量分别为（195．8±84．2）ml和（263．3±82．1）ml，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。两组均无严晕并发症发生，随访期间未见结石复发。结论CTU三维罩建结合X线、B超引导建立通道行PCNL的“一站式”诊疗方案，有助于规划最佳手术路径，提高穿刺成功率和I期结石清除率，减少穿刺和手术并发症。

摘要：目的研究siRNA对大鼠肾细胞(NRK)Ppif基因的抑制作用。方法根据大鼠Ppif基因序列设计并化学合成3对siRNA及1对阴性对照siRNA,并在5′端标记FAM羧基荧光素,以LipofectamineTM2000转染入大鼠肾细胞,用RT-PCR和Western blot分别检测Ppif基因和蛋白表达量的改变,验证所设计的siRNA的抑制效应。结果以Li-pofectamineTM2000转染所设计的siRNA进入NRK细胞,转染效率>90%。起始于405、556位点的siRNA在基因水平对Ppif无明显抑制效应(P>0.05),起始于198位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75.25%(P<0.05);蛋白水平下降72.13%(P<0.05)。结论起始于198位点的siRNA对大鼠肾细胞的Ppif基因有明显的抑制效应。

摘要：采用几种不同诱石剂诱导大鼠肾草酸钙结石模型成功后 ,检测各组大鼠肾功能、草酸钙结晶、 2 4 h尿总钙和草酸 ,以比较几种目前国内外常用的实验性大白鼠肾草酸钙结石模型 ,设计并寻找一种成石效果好、简便、稳定的结石模型。结果发现 :乙二醇和 1α (OH) Vit D3诱导模型组的尿钙、肾钙明显高于其它模型组 ,肾组织可见大量草酸钙结晶沉积。乙二醇和氯化铵诱导的模型组与乙二醇和 1α (OH) Vit D3诱导的模型组情况类似。研究显示 :乙二醇和1α(OH) Vit D3与乙二醇和氯化铵诱导大鼠肾草酸钙结石形成效果显著、简便。

摘要：目的构建并鉴定针对LRIG3基因的小干扰RNA(LRIG3-siRNA)腺病毒表达载体,为膀胱癌基因治疗的研究提供有效的实验工具。方法设计可形成小发夹结构的LRIG3-siRNA模板cDNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pSilencer-U6neo,构建LRIG3-siRNA表达质粒pSilencer-LRIG3。鉴定正确后,将pSilencer-LRIG3转染至HEK293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒pAd-LRIG3。大量扩增pAd-LRIG3,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。pAd-LRIG3感染人膀胱癌细胞T24,RT-PCR法检测LRIG3 mRNA的表达。结果酶切分析、测序鉴定表明pSilencer-LRIG3构建成功,PCR分析表明pAd-LRIG3含有LRIG3-siRNA序列。pAd-LRIG3可抑制LRIG3 mRNA的表达。结论含有LRIG3-siRNA的重组腺病毒构建成功,且具有抑制LRIG3基因mRNA表达的功能。

摘要：目的 应用RNA激活技术激活大鼠肝细胞株BRL中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因的表达,筛选出有效的激活序列,进一步证明了该现象普遍存在于哺乳动物细胞中.方法 设计并合成了4条靶向大鼠iNOS基因启动子DNA序列互补的双链RNA分子（saRNA-1、saRNA-2、saR-NA-3及saRNA-co）,脂质体法转染BRL细胞.转染后收集转染后细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测iNOS的表达.结果大鼠肝细胞株BRL转染羟基荧光素（FAM）标记的saRNA后,70%以上细胞内有绿色荧光表达.转染72 h半定量RT-PCR检测显示saRNA-2转染后能够激活BRL细胞iNOS基因的表达,其他saRNA转染后未见激活现象.结论 利用RNA激活技术可成功激活大鼠肝细胞BRL细胞株iNOS基因的表达.

摘要：目的　观察以激活剂蛋白 1(AP 1)位点为靶序列的特异性反义寡聚脱氧核苷酸 (a sODNs)对人膀胱癌耐药细胞株多药耐药性的逆转作用。方法　设计针对谷胱甘肽 (GSH )生物合成的限速酶γ 谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ GCS)基因启动子区域AP 1序列的特异性asODNs ,用阳离子脂质体包被后转染人膀胱癌细胞株BIU87及其多药耐药 (MDR)亚株BIU87/A ,然后分别用定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法 [以 β 肌动蛋白 (β actin)为内参照 ]、荧光分光光度法、MTT法等检测AP 1 asODNs对两株细胞γ GCSmRNA表达、细胞内GSH水平及其对 6种抗癌药物肿瘤细胞抑制率的变化。结果　AP 1 asODNs转染 72h后 ,BIU 87和BIU 87/A细胞的γ GCSmRNA的表达和细胞内GSH的水平均出现下降。同时 6种抗癌药物对反义转染后的两株细胞的抑制率大部分都有所提高。结论　γ GCS特异的AP 1 asODNs可通过降低细胞内的GSH水平增强膀胱癌细胞对化疗的敏感性 ,逆转肿瘤细胞的耐药。

摘要：目的探讨膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶(HAS)的优势亚型,为膀胱移行细胞癌组织中透明质酸的功能研究奠定基础。方法于Gene Bank中检索得到三种透明质酸合成酶亚型(HAS1、HAS2、HAS3)的mRNA序列,应用Primer 5.0软件,根据这些mRNA序列分别设计、合成三对引物;常规分别提取膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞和正常膀胱黏膜组织中成纤维细胞的总RNA,逆转录半定量聚合酶链反应(PCR,25循环)后进行常规琼脂糖凝胶电泳、图像扫描和分析、凝胶DNA回收和序列测定。结果正常膀胱组织中成纤维细胞mRNA中扩增出较明显的HAS 1条带,HAS2、HAS3条带不明显,而膀胱癌组织中成纤维细胞mRNA中扩增出非常明显的HAS3条带和较明显的HAS1条带,无HAS2条带。扫描图像分析后比较两者HAS1条带凝胶灰度值,差异无统计学意义(P>0.05),膀胱癌组织中成纤维细胞的HAS3条带和HAS1条带的凝胶灰度值差异有统计学意义(P<0.01)。结论膀胱癌组织中成纤维细胞出现HAS3的大量合成,且为其透明质酸合成酶的优势亚型。

摘要：　目的　评价单次口服盐酸米多君对女性轻中度压力性尿失禁的治疗效果。　方法　采用开放的前瞻性临床研究设计,观察和比较 30例女性压力性尿失禁患者口服盐酸米多君前后尿垫试验和尿动力学检查结果的变化。　结果　患者服药前平均尿失禁量、Valsalva漏尿点压力、咳嗽漏尿点压力、最大尿道闭合压、功能性尿道长度分别为(9. 2±8. 6)g、(73. 7±22. 6)cmH2O(1cmH2O=0. 098kPa)、(97. 1±40. 4 )cmH2O、( 84. 9±45. 8 )cmH2O和 ( 3. 3±1. 0 )cm,服药后分别为(4. 0±5. 2)g、(84. 8±26. 9)cmH2O、(118. 6±36. 4)cmH2O、(105. 2±52. 3)cmH2O和 (3. 7±0. 9)cm,服药后平均尿失禁量减少(5. 3±5. 6)g(P<0. 01)。Valsalva漏尿点压力、咳嗽漏尿点压力分别增加(10. 7±16. 0)cmH2O、(21. 5±20. 8)cmH2O,差异均有统计学意义(P<0. 01)。最大尿道闭合压、功能性尿道长度分别增加(20. 3±47. 0)cmH2O、(0. 4±0. 9 )cm,差异有统计学意义 (P<0. 05)。　结论　尿垫试验和尿动力学观察表明,单次口服盐酸米多君对轻中度女性压力性尿失禁具有快速和客观的临床治疗效果。

摘要：目的探索联合RNA干扰TR及TERT[小型干扰RNA（siRNA）、人端粒酶RNA（hTR）及人端粒酶逆转录酶（hTERT）]基因对膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87端粒酶活性及其增殖的影响。方法根据hTRmRNA和hTERTmRNA的序列，分别设计合成3对不同的且能干扰TR和TERT基因表达的siRNA并筛选出最高效抑制序列（pRNAT—TR—Ⅲ、pRNAT-TERT-Ⅲ），构建以hTR、hTERT基因为靶点的联合RNA干扰装置***—Ⅲ、pRNAT—TERT—Ⅲ（脂质体法）并将其转染BIU-87细胞株，采用荧光定量PCR分析hTR及hTERTmRNA表达，TRAP-ELISA检测端粒酶活性，MTT法检测细胞增殖。结果分别及联合RNA干扰hTR及hTERT基因后，pRNAT—TERT—Ⅲ，pRNAT—TR-Ⅲ及pRNAT—TERT-Ⅲ、pRNAT—TR-Ⅲ的联合干扰可以特异性抑制BIU-87细胞株中TERT和TR表达（分别减少pRNAT—TERT-ⅢTERTmRNA：67％、pRNAT—TR-ⅢTRmRNA：41％、pRNAT—TERT—Ⅲ、pRNAT—TR—ⅢTRmRNA：57％、pRNAT—TERT-Ⅲ、pRNAT—TR—Ⅲ TERTmRNA：70％，P〈0．05）。且膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87的生长和端粒酶活性均明显受到抑制，以联合RNA干扰尤为明显（pRNAT—TERT-Ⅲ：1．80±0．014，pRNAT—TR—Ⅲ：1．95±0．016，pRNAT—TERT-Ⅲ、pRNAT—TR-Ⅲ：1．25±0．012，P〈0．05）。结论联合RNA干扰hTERT及hTR基因能更明显抑制膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株的生长，为其临床应用奠定了基础。