摘要：应用AdMax腺病毒载体系统构建携带siSPK1基因的重组腺病毒,进一步研究SPK1基因对N2a细胞凋亡的影响。设计可形成小发夹结构的SPK1-siRNA模板cDNA序列,克隆至质粒pDC316-siRNA,构建SPK1-siRNA穿梭质粒pDC316-SPK1,经鉴定正确后,将pDC316-SPK1与辅助包装质粒(pBHG loxΔE1,3 Cre)共转染至HEK293细胞,包装纯化并扩增重组腺病毒颗粒,终点稀释法测定病毒滴度;病毒感染N2a细胞,Western blot法检测SPK1蛋白的表达;Hoechst33258染色检测SPK1基因对N2a细胞凋亡的影响。酶切后PCR分析、测序鉴定表明,pDC316-SPK1构建成功,病毒纯化后滴度为2.50E+10 PFU/mL;重组病毒可在蛋白水平抑制SPK1的表达;SPK1基因抑制后,N2a细胞凋亡增加(P<0.001)。上述结果表明,含有SPK1-siRNA的重组腺病毒构建成功,且具有抑制SPK1蛋白表达的功能,该基因沉默后,N2a细胞凋亡增加。

摘要：借助目前先进的物联网和大数据技术,设计带有先进传感器的可穿戴设备的跌倒监测平台,进行个体生理数据的采集和跌倒事件监测;利用数理统计方法对跌倒风险因子进行筛选并建立定量化的跌倒风险预测模型,使得跌倒风险评估的手段从定性化、经验性的判断转变为定量化、模型化的计算,并提高跌倒风险评估的科学性和准确性。

摘要：目的构建人微小RNAl45（miR-145）前体的真核表达载体，探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pPG-miR-EGFP载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901，实时定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞中miR．145表达水平，黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的pPG—miRl45-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配；重组质粒转染SGC．7901细胞后，miR-145表达分别上调20．45倍（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降51．5％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降30．4％（P〈0．01）。结论成功构建人pre—miR-145真核表达载体，转染胃癌细胞过表达后，能抑制癌细胞的游走和侵袭能力。

摘要：基因芯是将大量的DNA片段按预先设计的排列方式固化在载体表面，并以此为探针，在一定的条件下与样品中待测的靶基因片段杂交，通过检测杂交后的信号，实现对靶基因信息的快速检测。基因芯片可以分为很多种类，常见并广泛应用的有cDNA微点阵和寡核苷酸原位合成芯片。基因芯片能对微量样品中的核酸序列进行检测和分析，其高通量、快速、并行化采集生物信息的特点更是优于其他传统的技术方法。笔者概述了近年来基因芯片技术在骨科创伤机制、创伤修复及在骨组织工程领域研究中的应用进展。

摘要：剂量计算过程中，计算网格越小结果越精确，计算时间却越长。因此需要确定一个最优的计算网格尺寸，在保证临床剂量计算精度的同时减少计算时间。鉴于此笔者设置不同大小的计算网格对鼻咽癌调强计划进行剂量计算，将计算结果进行比较以阐明计算网格大小对计算精度的影响，为临床计划设计提供理论依据。

摘要：目的为生物类似药临床应用与管理提供规范化指导,促进其广泛、合理地用于临床治疗。方法遵循《WHO指南制订手册(第2版)》等指南研究方法学规范进行《中国生物类似药临床应用循证管理指南(2024)》的设计、规划、制订流程和全文报告,并充分考虑当前最佳循证医学证据、多学科专家经验和患者意愿及价值观,采用推荐意见分级的评估、制订与评价(GRADE)方法评价证据质量并确定推荐意见强度。结果与结论《中国生物类似药临床应用循证管理指南(2024)》共形成10条推荐意见,其中强推荐7条、弱推荐3条。推荐意见涵盖生物类似药临床应用管理全流程,医疗机构及相关卫生监管部门可参考本指南科学管理生物类似药未获批适应证的外推应用,医务人员可参考本指南进行用药前评估、患者教育、用药前预处理、用药方案调整,多学科治疗团队可参考本指南提供涵盖治疗前、中、后全流程的药物警戒与患者管理。

摘要：[目的]探究绘本游戏治疗在白血病患儿进行鞘内注射操作中的应用效果。[方法]选择2017年6月—12月我科收治的诊断为急性白血病并接受正规治疗的患儿40例,针对患儿在进行鞘内注射操作时恐惧、焦虑的心理,以及抗拒、哭闹等行为,采用合适的绘本或自行设计绘本,并联系本科实际,设计绘本延伸的游戏活动,帮助患儿减轻疼痛感。[结果]将绘本游戏治疗应用于鞘内注射操作后,患儿进行鞘内注射的依从性(90%)及医生穿刺成功率(88%)明显优于实施前(40%,70%),患儿的疼痛感觉明显低于实施前,患儿家属对护理总体满意度也高于实施前,差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]绘本游戏治疗应用于白血病患儿的鞘内注射操作中,有助于提高患儿的穿刺成功率和依从性,缓解疼痛感。

摘要：背景与目的:肿瘤细胞可表达FasL,从而诱导表达Fas的T细胞凋亡,即肿瘤细胞的“Fas反击作用”。本研究通过检测抗Fas核酶对小鼠T细胞凋亡的抑制作用,探索增强T细胞抗肿瘤能力的新途径。方法:设计并合成针对小鼠Fas基因的锤头状核酶,检测其对Fas m RNA的体外切割能力。通过电穿孔转染法将其导入小鼠脾脏T细胞,同时设立空白对照组和空载体转染组,通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polym erase chain reaction,RT-PCR)、W estern blot检测细胞上Fas的表达。细胞经抗Fas的抗体(JO2)作用后,流式细胞仪检测细胞凋亡,M TT法测转染前后细胞的增殖,以乳酸脱氢酶试验检测细胞毒性T细胞的体外杀伤活性。结果:抗Fas核酶能显著切割Fas m RNA,切割效率为60%。核酶组细胞表面的Fas水平显著低于对照组及空载体组(0.4vs.1.1,1.0,P<0.01)。经抗Fas抗体处理后,核酶组细胞的凋亡率明显低于对照组及空载体组(35%vs.86%,87%,P<0.01);核酶组的细胞增殖活性显著高于对照组及空载体组(208%vs.100%,98%,P<0.01);核酶组T细胞的体外杀伤活性明显强于其它2组细胞(67%vs.32%,31%,P<0.01)。结论:抗Fas核酶能显著降低小鼠脾脏T细胞的Fas水平,使细胞免于Fas途径的凋亡,从而增强T细胞的抗瘤能力。

摘要：目的设计合成新型靶向性非病毒载体K16GRGDSPC寡肽,探讨其作为载体介导外源基因转染骨髓基质干细胞(BMSCs)的可行性。方法用固相合成法合成K16GRGDSPC并用质谱仪和高压液相色谱仪进行检测。以其作为载体转染增强型绿色荧光蛋白质粒pcDNA3-EGFP并计数转染效率；转染转化生长因子(TGF)-β1质粒pcDNA3-TGF-β1并通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和TGF-β1敏感细胞株水貂肺上皮细胞(MV1)生长抑制法检测目的基因TGF-β1稳定表达情况及表达产物的生物学活性。结果质谱图显示合成肽的平均分子量为2741．3307 m/z,与理论上计算的平均分子量一致。高压液相色谱仪示合成肽的纯度为94%～95%,满足试验需求。以K16GRGDSPC寡肽为载体转染BMSCs的效率为(18．6±2．1)%,与脂质体(Lipofectamine)介导转染的效率(19．3±2．3)%差异无统计学意义(P＞0．05)；转染TGF-β1基因阳性细胞克隆经RT- PCR扩增有特异性产物,TGF-β1敏感细胞株MV1的增殖受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．05)。结论所合成的肽是设计的K16GRGDSPC寡肽,以其为载体介导外源基因转染BMSCS是确实可行的,为下一步构建载基因仿生基质材料奠定了基础。

摘要：化疗是目前结直肠癌主要的辅助治疗,但许多患者在化疗过程中肿瘤细胞形成多药耐药,从而导致化疗失败.有研究提示对耐药肿瘤应用具有抗血管生成的细胞毒药物能获得很好的抑瘤效应.Grant等[1]认为泰素帝是一种强效血管生成抑制剂.为了探求耐药结、直肠癌应用泰素帝治疗的前景,我们设计了本研究.