摘要：目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化***21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成。结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH。

摘要：目的通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白M(M)基因的RNA片段,为病原学检测提供阳性定量标准品。方法设计H5N1禽流感病毒的HA、NA及M基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H5N1禽流感病毒总RNA,用RT-PCR获得相应片段,分别连接至pGEM-Teasy质粒,转化宿主菌XL10-Gold,然后提取阳性克隆的重组质粒DNA,测序鉴定后用限制性核酸内切酶NdeI酶切线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,产物用DNase酶处理、纯化后测定浓度,用实时荧光定量PCR构建标准曲线进行验证。结果获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M基因全长开放阅读框序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为503.9、379.2、437.8ng/μl。结论获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。

摘要：基因工程双功能抗体在临床肿瘤、病毒病等治疗和诊断方面具有广阔的应用前景 ,是抗体研究的热点之一。要获得有活性的双功能产物 ,关键在于分子设计及表达系统的选择。本文着重论述近年来基因工程双功能抗体在分子设计及表达研究方面的新进展。

摘要：目的建立对高致病性猪链球菌2型毒力基因SalK、virB4-89K、cps2J同步检测的多重实时荧光定量PCR检测方法。方法根据SalK、virB4-89K、cps2J基因保守区域设计并合成3对引物及其探针;通过反应体系和扩增条件优化,建立快速鉴定高致病性猪链球菌2型的方法,并对方法的特异性、敏感性、重复性指标进行评估。结果反应体系具有良好的扩增效率,全部扩增检测可在60min内完成。SalK、virB4-89K、cps2J基因检测灵敏度分别为19cfu/ml、27cfu/ml和32cfu/ml。重复性试验中变异系数均小于3%。用该方法考核33株猪链球菌,包括1/2型、1型、3型至33型,以及9株常见对照菌株,仅猪链球菌1/2型检测到cps2J基因荧光信号增强。对疫情现场获得的SS2感染者血液进行检测,3个基因均阳性。结论建立的多重实时荧光定量PCR方法可快速检测高致病性猪链球菌2型,并能鉴定是否含有89K毒力岛基因SalK、virB4-89K,具有敏感、特异、重复性好的特点。

摘要：目的建立针对高致病性2型猪链球菌（Streptococcus suis 2，SS2）89K毒力岛Ⅳ型分泌系统的环介导等温扩增（100p-mediated isothermal amplification，LAMP）方法。方法根据国内流行株特有89K毒力岛编码的Ⅳ型分泌系统（T4SS-89K）的virB4-89K基因保守区域设计并合成LAMP引物，通过优化反应体系和扩增条件建立T4SS-89K快速检测方法，对方法的特异性、敏感性进行评估。结果优化的LAMP反应体系具有良好的扩增效率，检测灵敏度为1．53×10^-1拷贝／反应，全部扩增检测可在60rain内完成；建立的LAMP法具有良好的特异性，与不含T4SS-89K的猪链球菌（包括1／2型、1型、3-33型），以及其他常见9种对照菌均不发生特异性扩增，而与1998和2005年疫情现场分离的高致病性SS2均可发生特异性扩增。结论建立的LAMP方法具有特异、灵敏，设备要求简单等特点，可用于高致病性SS2快速检测。

摘要：目的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是近年来发展起来的一种新型核酸扩增技术,文中旨在建立一种LAMP方法用于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的快速检测。方法利用在线引物设计软件,针对B型和C型HBV基因序列的相对保守区域,设计LAMP引物、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)引物和探针序列。采用羟基萘酚蓝作为显色剂,优化反应条件,分别建立HBV的可视化LAMP反应体系和q PCR反应体系。反应体系中酶量为1.5μL、反应温度为65℃为LAMP扩增的最佳条件。用2种方法同时检测临床样本(96例乙型肝炎患者、5例丙型肝炎患者、5例获得性免疫缺陷综合症患者及50例健康对照样本的血清核酸),以q PCR检测结果为金标准,评价可视化LAMP方法诊断HBV的敏感性和特异性。结果建立的LAMP方法和q PCR方法最低可检测到10 copies/μL。96例乙型肝炎患者中,q PCR法共55例扩增阳性,其中LAMP方法共42例阳性,敏感性为76.4%(42/55);对病毒滴度高于102copies/μL和低于102copies/μL样本的检测敏感性分别为96.8%(30/31)和50%(12/24)。LAMP方法可成功检出B型和C型HBV,且不会和其他经血传播的病毒发生交叉反应,特异性为100%。结论建立的LAMP方法操作简便快捷、结果判读方便,能在1 h内敏感、特异地检测出血清中的HBV,为基层单位筛查HBV提供新的方法。

摘要：目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,***2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究***2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论***2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为***2免疫保护性疫苗候选分子。

摘要：目的对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,*** 2)05ZYH33组氨酸三聚体蛋白家族(Histidine triadprotein,Htp)成员编码基因05SSU1267进行克隆、表达,并研究其免疫保护作用。方法根据05ZYH33基因组编码的05SSU1267基因序列设计引物,PCR扩增目的片段。将目的基因克隆入原核表达载体pET32a,并转化*** BL21(DE3)。通过IPTG诱导表达、His-Tag亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并将纯化后的蛋白用于Western blot分析。以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备兔多抗血清,并通过ELISA检测多抗血清的效价。重组蛋白免疫Balb/c小鼠,研究其免疫保护作用。结果 Western blot显示重组蛋白可以与兔抗05ZYH33全菌血清反应,显示该蛋白具有较好的免疫反应原性;ELISA结果显示重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的多抗血清;动物保护实验表明该蛋白具有一定的免疫保护作用。结论在原核系统成功表达了05ZYH33 Htp蛋白05SSU1267,动物实验结果表明其能够在Balb/c小鼠中发挥一定的免疫保护作用,研究结果为Htp蛋白作为2型猪链球菌疫苗候选分子以及进一步了解该蛋白家族的生物学功能奠定基础。

摘要：目的研究不同杀虫气雾剂配方,以及不同配方对淡色库蚊、家蝇、德国小蠊的防制效果。方法按照GB 13917.2-92和GB/T 17322.2-1998制定的室内药效试验和模拟现场试验方法。结果41种配方的杀虫气雾剂在室内对蚊、蝇和蟑螂的KT50均在3 m in以内,24 h死亡率均达到100%;在模拟现场,1 h击倒率和24 h死亡率均达到100%,达到国家A级标准。结论所有设计的杀虫气雾剂配方对蚊、蝇和蟑螂等具有很好的击倒作用和杀灭效果。

摘要：目的　对新建放射治疗中心楼基建设计防护效果和合理性进行评价。方法　依据国家和军队的法规、标准及辐射防护最优化原则。结果　根据射线装置能量和源强度。按照其布局和环境 ,计算出各自的防护效果。结论　基建设计符合防护要求 ,是可行的 。