摘要：根据猪丹毒杆菌噬菌体基因测序结果,设计针对裂解酶(Ely)的特异性扩增引物,PCR扩增获得Ely产物,PCR产物经酶切后克隆入表达载体p ET-28a(+),获得重组质粒p ET-28a(+)-Ely,并转化至大肠杆菌BL21(Rosetta)中。以1mmol/L IPTG在28℃诱导8 h,SDSPAGE结果表明,蛋白在上清中高效表达;通过Ni2+-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,其纯度在90%以上;以100、10和1μg/m L的终浓度作用于猪丹毒杆菌培养物,每隔1 h进行一次菌落计数,直至7 h,结果表明该裂解酶在体外可以有效裂解猪丹毒杆菌,并呈一定的时间和剂量依赖性。该研究将为治疗耐药性猪丹毒杆菌感染提供新的思路。

摘要：猪传染性胸膜肺炎是猪群一种常见的细菌性疾病,给养猪业造成了巨大的经济损失。为了对胸膜肺炎放线杆菌的感染情况进行监测,本研究设计了针对该菌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和外膜蛋白Omp2的全基因PCR扩增引物,以实验室保存的血清2型和5型菌株基因组DNA作为模板成功扩增出特异性基因片段,分别将目的片段克隆入原核表达载体成功构建重组表达质粒pColdI-omp2、pColdI-ApxⅡ、pET-32am-ApxⅠ、pCold-ProS2-ApxⅢ。将重组质粒转化Rosetta感受态细胞,通过IPTG诱导表达,应用His单克隆抗体和临床阳性猪血清对表达的重组蛋白上清进行Western blot分析,结果表明表达蛋白的分子量大小与预期相符,通过诱导条件的优化可以稳定表达可溶性蛋白,可溶性蛋白能与His单克隆抗体和临床阳性猪血清发生特异性反应,证明重组蛋白具有良好的免疫反应性。该试验为后期建立胸膜肺炎放线杆菌抗体的ELISA检测方法奠定基础。