摘要：旨在研究日粮中添加不同类型油脂对蛋鸡生产性能、蛋品质及血浆生化指标的影响。选取252只330日龄海兰褐蛋鸡,采用单因子设计,根据实际产蛋率近似原则随机分为大豆油组(对照组)、猪油组和棕榈油组3组,每组7个重复,每个重复12只,不同油脂添加量均为2%。试验周期为8周,记录采食量、蛋重、产蛋数,计算料蛋比,检测鸡蛋品质、蛋黄脂肪酸组成以及血浆生化指标。结果:在生产性能方面,与对照组相比,添加猪油、棕榈油均极显著降低平均蛋重(P0.05)。在蛋黄脂肪酸方面,与对照组相比,添加猪油、棕榈油都显著降低蛋黄花生烯酸(C20:1)、二十一烷酸(C21:0)含量(P<0.05),极显著降低多不饱和脂肪酸(PUFA)含量(P<0.01),极显著增加单不饱和脂肪酸(MUFA)含量(P<0.01);添加猪油极显著增加蛋黄油酸(C18:1n-9(t9)、C18:1n-9(c9))含量(P<0.01),显著增加花生四烯酸(C20:4n-6)含量(P<0.05);添加棕榈油极显著增加蛋黄饱和脂肪酸(SFA)(P<0.01),显著增加肉豆蔻酸(C14:0)含量(P<0.05),显著降低不饱和脂肪酸(USFA)含量(P<0.05)。在血浆生化指标方面,与对照组相比,添加猪油和棕榈油极显著降低血浆碱性磷酸酶浓度(P<0.01),显著降低血浆葡萄糖浓度(P<0.05);添加棕榈油极显著升高血浆谷丙转氨酶浓度(P<0.01)。综上,日粮添加猪油和棕榈油可显著降低平均蛋重,显著增加料蛋比,添加棕榈油可显著提高平均产蛋率;添加猪油和棕榈油可显著改善蛋黄脂肪酸组成并显著降低血浆碱性磷酸酶和葡萄糖浓度,添加棕榈油可显著升高血浆谷丙转氨酶浓度。

摘要：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Ras GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白2(G3BP2)基因敲除的293T细胞系,并初步探讨了G3BP2基因缺失对于塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)增殖的影响。采用激光共聚焦试验观察病毒感染是否引起应激颗粒的产生;设计、构建靶向G3BP2基因的px459-sgRNA表达载体并转染进293T细胞;通过嘌呤霉素压力筛选以及亚克隆得到细胞株,经过Western blot、基因测序的方式鉴定细胞株;CCK-8法测定细胞增殖速度;Western blot、RT-qPCR、噬斑试验分别检测SVA感染后病毒蛋白VP1的表达水平、VP1的拷贝数和细胞上清液的病毒滴度;设计并构建SVA核糖体进入位点(IRES)的双荧光素酶报告系统,双荧光素酶报告试验测定病毒启动子的启动活性。结果:病毒感染引起应激颗粒的产生;筛选得到1株G3BP2基因缺失10 bp的293T细胞系(HEK 293T G3BP2^(-/-)),其细胞活力与未敲除细胞相比无显著差异;Western blot、RT-qPCR、噬斑试验均显示G3BP2敲除后显著抑制了病毒的增殖;双荧光素酶报告试验表明G3BP2敲除后下调了病毒的翻译启动活性。综上,本研究获得了1株HEK 293T G3BP2^(-/-)细胞系,该细胞通过下调病毒的启动活性抑制病毒的增殖,为进一步探讨G3BP2对SVA复制的影响奠定基础。

摘要：旨在建立一种检测犬C群轮状病毒(CRV C)的探针法实时荧光反转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。以病毒基因组的保守序列VP6为靶标,设计合成1组LAMP引物探针,对反应的各项参数进行优化后确定方法的特异性、敏感性等各项指标,进行临床样品检测以评估方法的实际效果。结果:该方法检测下限为7.71×10^(0) copies/μL,敏感性与荧光定量RT-PCR相当。重复试验结果的变异系数小于4.35%。与犬A群轮状病毒(CRV A)、犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬肠道冠状病毒(CCoV)和犬星状病毒(CaAstV)均无交叉反应。临床样品检测符合率试验表明,本方法与荧光定量RT-PCR方法的总体符合率达到了98.46%(64/65)。综上,本研究建立的探针法实时荧光RTLAMP方法具有反应快速、灵敏度高、特异性强、仪器成本低等优点,可用于CRV C快速检测、临床诊断与疫病监测。

摘要：旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后获得重组蛋白pS183L,免疫小鼠并制备抗pS183L的多克隆抗体。通过ELISA鉴定多克隆抗体效价大于1∶128000;Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明,该多克隆抗体能识别293T和PK15细胞外源表达蛋白及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)内源表达蛋白。综上,本研究成功制备抗pS183L多克隆抗体,为深入研究ASFV pS183L的功能提供了关键生物材料。

摘要：为了筛选能够提高羊免疫应答的Toll样受体激动剂,设计针对羊TLR1~TLR10基因序列的引物,采用PCR方法检测羊体内Toll样受体的表达情况。然后,将人载脂蛋白A1(ApoA1)和HMT13佐剂配伍不同的TLR1~TLR9样受体激动剂,分组免疫湖羊后采集血样,并通过琼脂扩散试验检测抗体效价。结果表明:在湖羊的血液中均可检测到TLR1~TLR10的特异性目的片段。经过3、5、7次免疫后,添加TLR3激动剂的组效价最高,说明TLR3激动剂Ploy(I∶C)免疫增强效果最佳,可作为提高羊疫苗免疫的候选激动剂。

摘要：为了初步探索热休克蛋白70(Hsp70)作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0的基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副猪嗜血杆菌Hsp70的pColdI-Hsp70中,构建了pColdI-E0和pColdI-E0-Hsp70重组质粒,经IPTG诱导表达后,获得了E0、Hsp70和E0-Hsp70融合蛋白。将以上三种蛋白纯化后分组免疫Balb/c小鼠,通过ELISA和流式细胞术测定了小鼠针对E0蛋白的体液免疫和细胞免疫效果。结果显示:E0-Hsp70融合蛋白和E0+Hsp70混合物免疫后均能显著提高抗E0的抗体效价、CD4+和CD8+T细胞水平,并促进IFN-γ的释放。研究结果表明Hsp70能显著增强猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0在小鼠上的免疫效果,为在猪体上的进一步应用奠定了基础。

摘要：为快速精准检测猫冠状病毒(FCoV),用FCoV的7b基因设计引物与探针,构建重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)方法。通过筛选最佳反应时间与温度,测定其敏感性和特异性。结果显示,RPA-LFD方法在37℃、15 min条件下,最低检测限为1 pg/μL,比普通PCR灵敏1000倍。同时,该方法与猫杯状病毒、猫疱疹病毒、犬冠状病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒均无交叉反应。通过9份临床病例的猫腹水样品检测,结果显示RPA-LFD与普通PCR结果一致。表明该方法快捷简便、特异性和灵敏性好,适用于快速检测FCoV感染。

摘要：通过抑制性差减杂交技术建立了包含对虾白斑综合征病毒表达性基因的差减文库,并用cDNA微阵列技术进行了鉴定,得到255个正向克隆。对其中的184个正向阳性克隆进行了测序,测序结果通过BLAST与GenBank中序列进行比对,共得到WSSV(whitespotsyndromevirus,WSSV)基因30个。此次首次鉴定了5个,其中WSV184具有调控蛋白的结构特征(Cys2/Cys2型锌指),WSV321和WSV322含跨膜结构,且存在可能的糖基化位点。有3个被其它研究推断无polyA结构的阅读框所处的mRNA应有polyA结构。进一步用DotNorthernblot对克隆号PCI118(含WSSV阅读框WSV321和WSV322)进行鉴定,表明确实存在该基因的转录。进而根据已报道的WSSV基因序列设计两条引物,用快速扩增cDNA末端技术,扩增WSV321和WSV322两个阅读框所处的cD NA的5′端片段和3′端片段,分析得到其全长共1109bp,与已报道的WSSV全基因序列(AF332093)的相关序列完全相同。该mRNA存在polyA,并有加尾信号AATAAA;两个阅读框都没有自己的TATA盒,但都有病毒RNA聚合酶Ⅱ的结合位点-CCAAT盒;它们编码的蛋白质分别有117和227个氨基酸,都存在可能的糖基化位点,其中WSV321一个,WSV322两个。

摘要：借助计算机软件，在分析比较了９个传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ａ片段结构蛋白基因的基础上，设计并合成了２对ＶＰ２和ＶＰ３基因ＰＣＲ引物，经ＲＴ－ＰＣＲ反应条件优化选择，成功地建立了ＲＴ－ＰＣＲ方法，用于扩增ＩＢＤＶＶＰ２和ＶＰ３基因，经琼脂糖凝胶电泳和分子杂交鉴定，获得４个ＩＢＤＶ野毒株ＶＰ２和ＶＰ３基因。

摘要：根据人源大肠杆菌 1型菌毛结构基因 (pilA)DNA序列 ,在其保守区设计了 1对带有 BamHI/Hind Ⅲ酶切位点的引物 ,经PCR扩增 ,从 2 4株鸡源大肠杆菌致病株染色体中得到 2 1个大小约 6 5 7bp的阳性产物 ,经酶切、连接、转化及筛选 ,得到 3种来自不同血清型鸡源大肠杆菌 (O1、O78及O88)PCR产物的阳性克隆。经核酸序列测定 ,确认所克隆的外源基因为