摘要：旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13蛋白具有RNA解旋活性。将pET28a(+)-PEDV Nsp13重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中,利用终浓度0.5 mmol/L的IPTG在18℃条件下诱导16 h,收集诱导后的菌体,超声破碎并收集其上清液,通过镍亲和层析技术获得纯化后的PEDV Nsp13;设计RNA底物,并建立体外解旋反应体系,验证蛋白的RNA解旋活性,并在相同时间内探究不同温度条件下PEDV Nsp13蛋白对RNA的解旋情况,进一步验证其活性。结果表明,在大肠杆菌系统中可溶性表达了PEDV Nsp13蛋白,纯化后蛋白浓度可达0.9 mg/mL;通过体外解旋试验,验证了PEDV Nsp13蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性,并发现PEDV Nsp13蛋白的RNA解旋酶活性在一定范围内随解旋温度的升高而提高。本研究结果为进一步深入研究PEDV Nsp13的RNA解旋作用机制奠定了基础。

摘要：为建立一种快速且准确检测鸭源鹅细小病毒(D-GPV)的实时荧光定量PCR方法,本研究通过分析D-GPV基因序列的保守区设计并合成一对特异性引物,构建携带NS1基因的重组质粒作为标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性、特异性、重复性试验和临床样品的检测。结果显示,该方法标准曲线的的线性关系良好,相关系数为0.999;灵敏度高,检测底限为10拷贝;特异性与重复性好,与其他病毒无交叉反应,批间和批内变异系数均低于1%。该方法对人工感染D-GPV鸭泄殖腔拭子和咽拭子样品的检测结果显示,鸭在攻毒后第1 d即可以通过口腔和泄殖腔向外排毒,排毒量在第3 d达到高峰,排毒持续期可达到42 d。本研究所建立的实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性和稳定性好,可用于临床样品中的D-GPV检测。

摘要：猫短暂性心肌肥厚(TMT)是一种不常见疾病,具有特殊的临床特征和疾病预后。为了分析猫TMT的临床特征、实验室检查、治疗和转归,本试验采用病例系列研究设计,收集2020—2022年诊断为猫TMT的病历资料,分析研究对象的临床特征、实验室检查、X线检查、超声心动图检查结果、治疗方案和转归。结果显示:8只猫存在舒张期左心室壁厚度增加和左心房扩张,初步诊断为“肥厚型心肌病表型”并伴有不同程度的肺水肿或胸腔积液,通过吸氧、静脉注射呋塞米和其他支持疗法治疗,症状缓解后口服呋塞米和氯吡格雷管理肥厚型心肌病。患猫在距初次超声心动图检查平均71 d(12~185 d)时复查,8只猫的左心室壁厚度和左心房大小均已恢复正常,因此,确诊为TMT。8只猫在距初次就诊平均81 d(29~187 d)时停用心脏病药物。本病例系列分析结果表明,TMT患猫的心肌增厚和左心房扩张是可逆的。本试验分析结果可为猫TMT的临床诊断和治疗提供参考。

摘要：本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。

摘要：目的 建立一种可同时检测无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门菌(Salmonella) 5种罗非鱼常见食源性致病菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。方法 根据5种致病菌特异性基因片段设计并合成引物,优化多重PCR体系条件,并对多重PCR体系的特异性、灵敏度以及人工模拟样品进行检测。结果 建立的多重PCR方法可同时扩增5种目的菌株的特异性条带,且不与非靶标细菌发生交叉反应。敏感性实验结果显示,该方法对无乳链球菌、嗜水气单胞菌、沙门菌、霍乱弧菌、大肠杆菌纯培养物基因组DNA的检出限均为0.4 ng/μL。人工模拟样品检测结果显示,该方法可以快速且准确地检测上述5种食源性致病菌,且检出限可达到2×10^(1)CFU/g。结论 本研究建立了一种可同时检测无乳链球菌、嗜水气单胞菌、霍乱弧菌、大肠杆菌和沙门菌5种罗非鱼常见食源性致病菌的多重PCR检测方法。该方法的建立为罗非鱼常见食源性致病菌的快速检测提供了重要的技术手段。

摘要：为了解近年来鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)的流行现状,本研究在DuCV的Rep基因保守区内设计一对特异性荧光定量引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:该方法最低可检测到拷贝数为3.46×10^(1)copies/μL的目的基因,比常规PCR灵敏;选取Ct值最低的阳性样品进行全基因组扩增及进化分析,成功扩增出1988 bp的病毒全基因,序列分析结果显示该病毒基因型为DuCV-1,亚型为1 b。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法为DuCV的流行病学调查提供了有效的监测手段,同时通过分析不同基因型的遗传进化特点与Cap蛋白氨基酸位点突变特征,为DuCV感染的防控研究提供参考。

摘要：为了探究猪源T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(sTIM-1)的生物学功能,制备sTIM-1多克隆抗体,通过软件分析sTIM-1蛋白抗原表位及亲水性,并设计引物,以sTIM-1基因为模板扩增sTIM-1黏蛋白功能域编码基因(sTIM-1-M),成功构建了重组表达质粒pET28a-sTIM-1-M,并在大肠杆菌Rosetta 2中诱导表达。以纯化的重组蛋白sTIM-1-M与佐剂混合免疫新西兰大白兔制备多抗血清。SDS-PAGE及Western blot证实了该重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达,分子量约为36 kDa。经Western blot与免疫荧光试验(IFA)验证sTIM-1多抗血清可特异性识别293T细胞表达的sTIM-1。免疫沉淀(IP)结果显示制备的多抗血清可与sTIM-1蛋白互作。以上数据表明本研究制备的sTIM-1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。sTIM-1多克隆抗体的制备为进一步研究sTIM-1参与病毒入侵细胞的机制奠定了基础。

摘要：旨在研究包被丁酸钠(CSB)和维生素D_(3)(VD_(3))对肉鸡脂代谢和抗氧化能力的影响。采用2×2双因子试验设计,在基础日粮中设2个CSB添加水平(0和1 g/kg)和2个VD_(3)添加水平(3 000和5 000 IU/kg)。试验选用1日龄AA肉鸡192只,随机分为4组,分别为对照组(Con):基础日粮(含3 000 IU/kg VD_(3));VD_(3)组:基础日粮+额外2 000 IU/kg VD_(3);CSB组:基础日粮+1 g/kg CSB;VD_(3)+CSB组:基础日粮+额外2 000 IU/kg VD_(3)+1 g/kg CSB。每组6个重复,每个重复8只鸡,试验期42 d。添加CSB显著降低腹脂率和总胆固醇(TC),显著升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和血清总抗氧化能力(T-AOC)(P0.05);添加CSB能够显著降低肝脏中FAS mRNA的表达量、显著提升CPT1α和SOD的mRNA表达量(P<0.05);联合添加CSB和VD_(3)对肝脏中脂质合成基因ACC的mRNA表达量有交互作用,相比CON和VD_(3)组,CSB和VD_(3)+CSB组的ACC mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。日粮中添加CSB和VD_(3)能改善肉鸡脂代谢和提高抗氧化能力。

摘要：本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建G3BP1基因稳定敲除的293T细胞系,对塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)的增殖特性进行初步研究。设计、构建靶向G3BP1基因的sgRNA表达载体,转染293T细胞,经过Western-blot、基因测序筛选鉴定G3BP1敲除细胞系,CCK-8法检测细胞增殖速度;荧光定量RT-PCR方法检测SVA感染后基因组拷贝数,Western-blot检测病毒蛋白VP1表达水平;间接免疫荧光(IFA)检测敲除G3BP1基因对细胞内应激颗粒形成的影响。结果显示,筛选出1株G3BP1基因缺失5 bp的293T细胞(G3BP1-/-293T),其增殖速度与正常细胞相比未见显著差异;荧光定量RT-PCR结果和Western-blot结果表明,在病毒感染早期,敲除G3BP1基因显著抑制SVA基因组复制和病毒蛋白表达;IFA结果显示,敲除G3BP1基因不会影响其细胞内应激颗粒的形成,表明G3BP1对SVA复制的影响与应激颗粒的形成无关。综上,本研究获得1株G3BP1-/-293T细胞系,该细胞能够在病毒感染早期抑制SVA复制,为进一步研究G3BP1对SVA复制的影响奠定了基础。

摘要：为了实时了解鸡舍中鸡的健康状况,预防疫病的发生,设计出一种基于无线传感网络的哨兵鸡体温监测系统。基于DS18B20温度传感器和ESP8266无线通信模块设计了一款用于鸡舍内鸡只健康检测的哨兵鸡体温实时检测系统。系统中的体温监测节点采用ESP8266-12F为主控芯片,DS18B20温度传感器进行哨兵鸡翼下无毛区的体温监测,装置将采集到的体温数据实时发送到网关节点,在发送成功后进入深度休眠,网关转发数据到阿里云服务器并储存在数据库中,同时微信小程序读取数据库信息并进行显示,系统报警节点采用声光报警的方式,在接收到服务器信息后实时处理,并在发现问题后进行报警。结果表明,该系统能够有效地监测哨兵鸡的体温,并实现低功耗工作,且装置无线传输距离达到60 m,可以满足鸡舍无线通信的要求。基于无线传感网络的哨兵鸡体温实时监测系统运行稳定,功能完备,能够实现低功耗、低成本的特点,在数据超出阈值时能够及时报警,提高了鸡舍管理的效率和自动化水平。