摘要：根据GenBank中已发表PCV2全基因序列,设计1对特异性引物,建立扩增PCV2全基因的PCR方法。用该方法从山东、河北、安徽、甘肃4个省份的4份PMWS患病猪的阳性病料和山东德州、南京、北京、甘肃、甘肃泉州和白银5个屠宰场的7份健康猪阳性样品中直接扩增出11个PCV2全基因片段。将扩增片段克隆于pMD18-T载体,并通过双酶切的方法筛选获得了11个阳性重组质粒,分别命名为SDPCV、HBPCV、AHPCV、GSPCV、DZPCV1、DZPCV2、DZPCV3、NJPCV、BJPCV、BYPCV和QZPCV。测序结果分析表明,除了BJPCV和GSPCV2株PCV2基因组全长为1768bp外,其余9株基因组全长均为1767bp。应用DNAstar序列分析软件,对测定的11个PCV2序列与GenBank中登录的10个不同地区的代表毒株进行同源性比较,发现健康猪群感染毒株的全基因组序列和ORF2及其氨基酸序列同源性比患病猪群略高,ORF1、ORF3及其相应氨基酸序列同源性在2类猪群中则没有明显差异。系统发生进化树显示,DZPCV3与其他10株PCV2亲缘关系较远,但与山东分离株AY556473亲缘关系接近,共同构成一个独立分支;其余10株PCV2之间关系密切,都分布于一个独立的小分支中,并与法国分离株亲缘关系接近。患病猪群和健康猪群感染的PCV2在基因进化树上交错分布,表明2类猪群感染的PCV2在基因水平上差异不显著,在地域分布上也没有明显差异。

摘要：【目的】探讨国产麻保沙星的毒性作用,及其对常见临床分离菌的抑菌效果,评价其临床用药安全性。【方法】设计了国产麻保沙星对小鼠的经口急性毒性试验、精子畸形试验、微核试验、亚慢性毒性试验,来研究其毒性,并采用微量稀释法检测麻保沙星的体外抑菌活性。【结果】国产麻保沙星经口LD50为887.8 mg/kg,属低毒类化合物;其致精子畸形与小鼠骨髓微核试验结果均为阴性,表明其无致突变作用。国产麻保沙星按178,89和18mg/kg剂量连续灌胃30 d,小鼠未见死亡,各用药组较阴性对照组体质量增加差异不显著(P>0.05),对脏器系数、血常规指标、血液生化指标有显著影响(P<0.05),但均在正常值范围之内。体外抑菌试验表明,乳酸麻保沙星对临床分离的鸡、猪大肠杆菌,鸭李氏杆菌,猪链球菌和金黄色葡萄球菌很敏感,其最小抑菌浓度(MIC)均小于0.5μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)均小于4μg/mL。【结论】国产麻保沙星按临床剂量使用安全,临床常见菌对其敏感。

摘要：猪伪狂犬病是危害世界养猪业的重要疫病之一。近年来我国免疫猪群出现暴发、流行,经证实其抗原性和毒力发生了变异。为了有效区分变异毒株和经典毒株,根据国内外伪狂犬病病毒（PRV）变异毒株和经典毒株基因序列比对结果,针对UL44和UL36区域的基因序列设计了2对引物,建立两步法PCR。第一步PCR针对UL44区域,区分出经典毒株（疫苗株HB98除外）感染与变异毒株感染。第二步PCR针对UL36区域,区分出HB98株与伪狂犬病病毒变异毒株。两步法PCR的敏感度分别达到2~20TCID50和50TCID50病毒量。对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、日本脑炎病毒、脑心肌炎病毒和猪流行性腹泻病毒的核酸应用此方法进行扩增,结果均为阴性。该方法与猪伪狂犬病病毒国家标准PCR检测方法的符合率达到91%,可用于实验室快速诊断。

摘要：应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,用设计带有限制性酶切位点的特异地扩增了从起始密码子开始的 1 8kb新城疫病毒 (NDV)血凝素 神经氨酸 (HN)基因开放式阅读框 (ORF) ,然后插入 pTK2 B的NheI位点 ,构建了含NDVHN基因的插入载体 pTKHN1和 pTKHN2 ,将其与感染火鸡疱疹病毒 (HVT)细胞的总DNA共转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,经有限稀释法和Dot blot筛选 ,得到含有HN基因的重组体rHVT1和rHVT2 。对重组体进行组织培养传代和Westernblot分析 ,表明重组体在感染细胞中表达了HN蛋白 ,重组体在CEF上的生长特性与亲本病毒相同 ,且在连续传代过程中保持稳定。

摘要：目的:从皖北多个大型兔场无菌采集发病兔肺脏进行兔支气管败血波氏杆菌(Bb)分离鉴定,并建立PCR诊断方法,为养兔场及时了解Bb的流行状况及本病的防控提供依据。方法:用5%绵羊血改良的B-G培养板对无菌采集的兔病变肺脏病料进行细菌培养,对分离菌株的形态、血清、生化特性等进行研究,并利用16S rRNA-PCR扩增技术加以验证;针对Bb表面特有的丝状血凝素(FHA)蛋白基因序列设计1对引物,建立检测Bb的PCR方法,并对反应条件进行优化。结果:本研究所得的Bb菌株在形态学、血清学、生化特性与标准Bb菌株一致,16S rRNA-PCR鉴定方法在1492 bp处扩增出目的条带,基因序列与Bb16S rRNA(E06073)同源性达到99.1%;新建的PCR方法25 mmol/L MgCl_(2)1.0μL、退火温度为58℃、30个循环),可扩增出特异醒目的目的条带(约730 bp);特异性试验显示该方法对兔巴氏杆菌、兔魏氏梭菌、金黄色葡萄球菌和兔大肠埃希氏菌检测均为阴性,敏感性试验显示该方法在Bb菌液浓度仅为7.2×10^(3)CFU/mL时仍能获得目的条带。结论:本研究从兔肺脏病料中分离的菌株经鉴定为Bb,并建立了检测该细菌的PCR方法,可用于临床鉴别和诊断兔支气管败血波氏杆菌病。

摘要：为研究柔嫩艾美耳球虫不同发育时期Etron2基因的转录水平差异,选取***生活史中的未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子、第二代裂殖子,分别提取总RNA,反转录为cDNA;选择Etactin作为参照基因,Etron2为目的基因,设计实时荧光定量PCR的引物,分析在***生活史中不同发育阶段Etron2转录水平的差异。结果显示Etron2在未孢子化卵囊中转录水平最高,然后分别是裂殖子、孢子化卵囊和子孢子。在柔嫩艾美耳球虫发育过程中,Etron2基因可能在未孢子化卵囊阶段被转录储备,随着宿主细胞的刺激,得以大量表达,在入侵过程中发挥作用。

摘要：上海地区 6个规模化猪场断奶后仔猪出现全身消耗性综合征 ,剖检的 18头病仔猪都表现肺脏严重病变和淋巴结肿大出血。分别设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) N蛋白和 2型猪圆环病毒 (porcine circovirus type 2 ,PCV- 2 )部分基因的特异性 PCR引物 ,通过 RT- PCR和 PCR技术从患病猪肺脏组织均扩增出 PRRSV和 PCV- 2的特异基因片段。结合临床症状和流行病学调查 ,证实上海地区出现PRRSV和 PCV-

摘要：为应用液相芯片技术建立同时检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒(AIV)的方法,在GenBank中收集H5、H7、H9亚型AIV的HA基因序列,利用DNAMAN软件分析比较筛选出特异的保守片段,设计引物和探针。将多重不对称RT-PCR扩增产物与偶联荧光微球的探针进行杂交,建立多重液相芯片方法。结果显示,多重液相芯片技术对H5、H7、H9亚型AIV核酸的最低检出量分别为18.5、28.7、20.7pg/μL,检测的特异性和重复性都很好,应用该方法和禽流感检测试剂盒双盲试验同时对50份已知病毒的样品进行了检测,两者符合率为100%。该方法为禽流感病毒核酸液相芯片的进一步研究奠定了基础。

摘要：以无水硫酸钠、30%过氧化氢(H2O2)溶液和氯化钠为原料制备固体H2O2;采用单因素试验设计法考察了原料配比、反应温度、反应时间及干燥温度对产品产量及产品中H2O2含量的影响,并据此确定最佳制备条件;采用微生物悬液定量杀菌试验考察了所制备固体H2O2的抗菌活性。结果显示:在25 mL 30%H2O2溶液中,加入32 g硫酸钠、4 g氯化钠,反应时间30 min,反应温度40℃,干燥温度60℃时得到的产物H2O2含量最高,产品质量最好。10.8 g.L-1的H2O2消毒液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作用10 min的平均杀菌率达到99.9%,对蜡样芽孢杆菌作用1 h的平均杀菌率达到100%。结论:本试验制备的固体H2O2具有良好的杀菌效果,且制备工艺简单。

摘要：为了探讨黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)两种真菌毒素单独或联合应用对水产养殖的影响,本试验选用鲤鱼270尾(体重为(18±0.1)g),均分为9组,每组设3个平行,2个平行组进行试验观察和统计,1个平行组作为试验过程中解剖检查用。试验采用二因素三水平设计,AFB1的含量分别为0、0.05和0.1mg·kg-1,DON的含量分别为0、1和5mg·kg-1。试验期为40d。每20d进行增重、体长、丰满系数的检测。试验结束时进行肝胰脏重/体重值、血清生化指标(碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP))检测以及肝胰脏、脾脏和肠道的组织学检查。试验结果表明:除1mg·kg-1DON组外,其他7个试验组鲤鱼的增重都明显受到抑制(P0.05)。生化指标中AST活性增加明显(P<0.05)。肝脏的病理变化为肝细胞变性、坏死;肠道为肠黏膜脱落、绒毛萎缩,而毒素对脾脏的影响较小。两种毒素联合作用后毒性具有一定的协同效应。