摘要：采用菌落计数法分别测定了氨苄西林和阿莫西林在 0 5、 1、 2、 4倍于各菌最小抑菌浓度 (MIC)时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌标准株及其临床分离株的体外抗生素后效应 (PAE)。结果显示 ,氨苄西林和阿莫西林在 0 5、 1、 2、 4倍MIC时对金黄色葡萄球菌C2 61 1 2 及临床分离株均具有一定的PAE ,且PAE与浓度在一定范围内 (0 5～ 4倍MIC)呈剂量依赖性 ,当药物浓度达 4倍MIC时 ,PAE明显延长 (P <0 0 5 ) ;但两药对金黄色葡萄球菌C2 61 1 2 及临床分离株的PAE值仅在4倍MIC时差异显著 (P <0 0 5 )。在相同浓度下 ,两药对大肠杆菌ATCC2 5 92 2和临床分离株的PAE很小甚至没有。提示 :在临床设计给药方案时 ,对金黄色葡萄球菌敏感株引起的感染 ,除了考虑药代动力学和MIC指标外 ,还应考虑PAE因素 ,可适当延长给药间隔时间 ;而对PAE无意义的大肠杆菌敏感株引起的感染 。

摘要：目的 Eha是一种重要转录调控因子,它可以影响迟缓爱德华氏菌(Et)的胞内存活,本实验探究Eha直接调控的靶基因如何抵御巨噬细胞杀灭细菌的分子机制。方法构建pGEX-4T-ehaflag重组质粒,电击导入eha基因缺失株的ET-13菌,得到Cehaflag ET13重组菌;用Western blot检测重组菌Eha-Flag融合蛋白的表达,并用细菌胞内存活实验检测细菌EhaFlag融合蛋白的活性;我们釆用染色质免疫共沉淀(CHIP)技术,用抗Flag标签抗体对靶基因沉淀Eha-DNA片段,除去结合的蛋白并纯化DNA片段;以RNA-Sequencing的差异表达基因设计引物,以CHIP得到的DNA样品为模板,进行qRT-PCR; PCR扩增靶基因的启动子区域,构建了pBAD-P_靶lac Z重组质粒,电击分别导入ET-13野生株和eha基因缺失株,比较它们β-半乳糖苷酶活性的差异;SDS-PAGE电泳比较野生株和缺失株外膜蛋白、厌氧C4二羧酸转运蛋白DcuA1和鞭毛钩蛋白FlgK表达的差异,并用细菌胞内存活实验比较野生株和缺失株的差异。结果 Western blot表明,Cehaflag ET13重组菌能够表达Eha-Flag融合蛋白;细菌胞内存活实验表明,该融合蛋白完全可以恢复缺失株在胞内降低的生存能力,Flag融合标签不影响Eha蛋白的功能;通过qPCR鉴定CHIP,富集到Eha的结合靶点,最终筛选出10个Eha直接结合的基因;通过野生株和缺失株中β-半乳糖苷酶活性的差异,证明eha基因对5个靶基因启动子有直接调控作用;通过检测野生株和缺失株表型的差异,证明eha基因对靶蛋白DcuA1,TnaA和FlgK的表达和活性有调控作用。结论 Eha可以通过直接调控这些靶基因,使Et菌在巨噬细胞内的存活受到影响。

摘要：根据已发表的纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FNZ)基因(fnz)序列,设计并合成1对引物,以马链球菌兽疫亚种(SEZ)ATCC35246菌株基因组DNA为模板,PCR扩增fnz基因,并定向将其克隆至表达载体pET-32a(+)中。重组质粒pET-32a(+)-fnz经酶切及测序鉴定后,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达,表达产物经Western-blot检测后进行纯化,得到了74ku的纯化蛋白。以纯化的FNZ与ISA206佐剂以1∶1的体积比混合后免疫ICR小鼠,每只小鼠背部皮下多点注射120μL(含蛋白22.5μg),14d后以同样方法进行加强免疫。间接ELISA检测结果表明,FNZ免疫组小鼠的血清FNZ抗体效价显著高于其他3个对照组。二免后第15天小鼠腹腔注射ATCC35246菌液5.0×105 CFU(10LD50),观察注射后10d内小鼠的临床表现及存活状况;结果显示,FNZ免疫组小鼠的存活率为62.5%,显著高于阴性对照组(0)和空白对照组(0),但低于SEZ灭活疫苗免疫组(87.5%)。结果表明,FNZ可使免疫小鼠对SEZ的感染产生一定的抵抗作用。

摘要：为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据其基因序列,设计1对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1 801～2 176nt的375bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6;将重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达TRPV6融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡TRPV6多克隆抗体,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法和Western blot检测抗体的效价和抗体特异性。结果表明,试验成功构建原核表达载体pET-32a(+)-TRPV6,SDS-PAGE蛋白电泳检测发现目的蛋白大小约35 000;Western blot分析显示,表达的TRPV6融合蛋白具有良好的免疫原性,其抗体可与大肠杆菌表达的产物特异性结合;ELISA显示其抗体效价达1∶100 000。获得纯化的融合蛋白和多克隆抗体对研究TRPV6钙离子通道在蛋鸡髓质骨形成的作用机理具有重要作用。

摘要：建立嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila,Ah)的生物被膜(BF)体外形成模型,用银染法及扫描电镜观察检测Ah致病株J1、N1及非致病株W1、4332株产生BF的情况,同时研究温度和消毒剂对AhJ1株的游离(FC)细菌(以下简称FC细菌)和具有BF的细菌(以下简称BF细菌)的影响。实验表明:致病株AhJ1、N1株均可形成BF,而非致病株AhW1、4332株均不形成BF。AhJ1株的BF细菌经85℃30min、-20℃80d、0.01%新洁尔灭处理后均有存活,而FC细菌无存活细菌。根据已发表的AhA1株的转录调节蛋白基因(AhyR)核苷酸序列,设计并合成了一对引物,对AhJ1、N1、W1、4332株的基因组进行PCR扩增和测序分析。发现致病性AhJ1、N1株可扩增出912bp的核苷酸片段,该片段与已发表的AhAhyR基因的同源性达99%,而非致病性AhW1、4332株无该基因片段。

摘要：通过对大麦代谢能、蛋白质和氨基酸的营养价值提升后进行饲料配方设计，研究饲喂大麦基础日粮加酶、不加酶以及玉米基础日粮的肉鸡生产性能。结果表明：大麦基础日粮加酶能促进7～21日龄雏鸡的生长、提高增重和饲料利用率，且生产性能等同于同水平玉米基础日粮组；而对21～42日龄生长鸡的作用效果不明显，但饲料回收率高于玉米基础日粮组。因此饲料厂家在根据市场行情选择饲料原料方面更具有灵活性。

摘要：背景:青年期蛋鸡在性成熟前形成髓质骨,体内雌激素水平的升高对骨代谢有直接的影响。目的:观察外源性17β-雌二醇对青年期ISA蛋鸡骨代谢的影响。设计、时间及地点:随机分组设计、动物对照观察,于2007-10/2008-02在南京农业大学动物医学院畜禽骨骼生物学实验室完成。材料:92日龄青年期ISA蛋鸡180羽。17β-雌二醇由美国Cayman公司提供,玉米油为国产分析纯。方法:180羽蛋鸡按随机数字表法分成3组,空白对照组、溶剂对照组、雌激素组,每组60羽。空白对照组蛋鸡,不做任何处理;溶剂对照组为每天肌肉注射玉米油1mL,雌激素组为每天肌肉注射2g/L17β-雌二醇玉米油溶液1mL。两组均注射20d。主要观察指标:于实验第0,5,10,15,20天,每组取12只鸡翼静脉采血5mL,用半自动生化分析仪测定血Ca、P和碱性磷酸酶活性。分光光度计测定抗酒石酸酸性磷酸酶活性。采用放射免疫法,运用智能放射免疫γ测量仪测定血浆雌二醇与睾酮。每个时间点取血后,麻醉后处死,取股骨中段样本,厚度为4mm,置于扫描仪上直接扫描后,运用ImageJ图像处理系统分析扫描图像,计算皮质骨厚度、皮质骨面积和皮质骨面积比例、皮质骨骨内径、皮质骨骨外径。结果:从实验第5天开始,雌激素组雌二醇显著高于空白对照组和溶剂对照组,睾酮水平显著低于空白对照组和溶剂对照组,差异有显著性意义(P0.05)。雌激素组皮质骨厚度、皮质骨面积、皮质骨面积比例、骨内径及骨外径与空白对照组和溶剂对照组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:外源性雌激素能够促进青年期蛋鸡骨形成,抑制骨吸收,促进骨骼发育。

摘要：为研究不同精粗比日粮对山羊内脏氨基酸吸收与代谢的影响,选择6头平均体质量为40 kg的非泌乳山羊采用随机交叉试验设计评价日粮对内脏[门静脉排流组织(PDV)和肝脏]氨基酸吸收与代谢规律。分别在动物肠系膜静脉、门静脉、肝静脉与股动脉安装慢性多血管瘘用于采集血样,氨基马脲酸(PAH)用于血流量测定。试验日粮分高精料组(HC)和高粗料组(HF),2组饲料的精饲料和粗饲料分别占60%与40%和40%与60%。每个试验期的最后3 d于动物采食前(0 h)和采食后2、4、6、8 h分别从门静脉、肝静脉与股动脉采集血样。结果显示:与HF日粮相比,HC日粮显著提高门静脉与肝静脉血浆流量(P<0.05),显著提高门静脉血浆中Arg、His、Ile、Met、Thr与Val等必需氨基酸(EAA)以及Ala、Cit、Orn、Ser与Tyr等非必需氨基酸(NEAA)的浓度(P<0.05),增加门静脉支链氨基酸(BCAA)、总必需氨基酸(TEAA)(P<0.05)及趋向提高总氨基酸(TAA)(P=0.07)浓度。除Glu被PDV组织清除外,PDV组织净释放其他所有的氨基酸;并且HC日粮显著增加PDV中Leu、Lys、Met、Phe、Thr等EAA以及Ala、Cit、Ser、Tyr等NEAA流量(P<0.05),提高PDV中BCAA(P=0.05)、TEAA(P=0.05)与TAA(P<0.05)的流量。肝脏除净释放Asp、Glu与Orn外,净摄取其他氨基酸。HC日粮显著增加肝脏对His、Leu、Lys、Thr、BCAA与TEAA摄取量。结论:HC日粮能够增加动物整个内脏的BCAA、TEAA、总非必需氨基酸(TNEAA)及TAA的释放量。

摘要：RSAD2是一种多功能干扰素(interferon,IFN)诱导蛋白。该研究利用CRISPR/Cas9系统建立了RSAD2基因敲除的猪睾丸细胞系(swine testicular cell,ST cell)模型。应用在线工具设计了针对RSAD2基因的4条sgRNA,并将其克隆至pX459载体。经嘌呤霉素初步筛选、Western blot检测确定了RSAD2-sgRNA-4具有最优敲除效果。该实验通过单克隆化转染RSAD2-sgRNA-4的ST细胞后成功获得RSAD2基因敲除ST细胞模型。双荧光素酶活性实验及实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR)证明,RSAD2基因敲除对ST细胞的IFN-β、IRF3、NF-κB基因启动子活性及mRNA水平没有明显影响。该实验利用CRISPR/Cas9系统构建并获得稳定敲除RSAD2基因的ST细胞模型,为RSAD2功能研究提供有力工具。

摘要：提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRVKa plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL25、全部UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失270个核苷酸。将L片段和R片段克隆于pBluescriptM13-载体上,获得pSKLR;再将绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1上含GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLRG。提取pSKLRG质粒,经单酶切线性化后用脂质体与PRVBartha-K61株共转染143TK-细胞,在细胞培养液中有5 溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下筛选出表达绿色荧光蛋白的重组PRVBartha-K61毒株:PRVrBGFP。