摘要：【目的】建立禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)黏附相关基因、侵袭及毒素相关基因、抗血清存活相关基因及铁转运相关基因的多重PCR方法,实现禽致病性大肠杆菌毒力基因的简便、快速检测。【方法】根据GenBank公布的基因序列,设计合成18对特异性引物,通过条件优化,建立四组多重PCR体系,并通过模板倍比稀释检测各组多重PCR的灵敏性。利用多重PCR检测100株APEC毒力基因的分布,验证多重PCR方法的可行性。【结果】根据PCR扩增片段大小判定,上述四组多重PCR体系均能同时扩增出该组中的各个毒力基因,且灵敏度分别为:103CFU、103CFU、105CFU、105CFU细菌和1ng、1ng、10ng、10ng DNA。100株APEC的毒力因子检测结果显示,多重PCR和单基因PCR结果一致。【结论】建立的四组多重PCR方法能够简便、快速地检测禽致病性大肠杆菌的毒力基因,可用于毒力基因的鉴定以及流行病学调查。

摘要：利用琥珀酸酐法对DON分子进行结构修饰,采用高效液相色谱法和薄层层析法进行检测,并将衍生物与载体蛋白牛血清白蛋白进行偶联,设计人工抗原,通过紫外分光光度法、SDS-PAGE和ELISA试剂盒分析偶联结果。结果显示,成功得到了DON-BSA,偶联物中DON浓度为0.797μg/μL。

摘要：参照GenBank中已发表的有关基因序列,分别设计合成针对PCV-2、PRRSV和CSFV的3对引物,分别建立检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV感染的PCR或RT-PCR方法。结果显示,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,分别各呈现1条大小约1154,372,375bp的特异条带。采用建立的PCR方法对江西各地发病猪和死亡猪的133份临床病料进行PCV-2检测,结果总检出率53.38%(71/133)。在71份PCV-2阳性的病料中检测出PRRSV20份,阳性率28.17%(20/71);CSFV9份,阳性率12.68%(9/71);PRRSV和CSFV共同感染9份,阳性率12.68%(9/71)。

摘要：以 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 弱毒株膜蛋白（ Ｍ） 和核衣壳（ Ｎ） 蛋白基因为模板，设计的一对含有 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ 和 Ｂａｍ Ｈ Ｉ酶切位点的引物，通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增出一约９００ ｂｐ 的 Ｍ Ｎ 基因片段，将此基因片段成功克隆于高效表达载体ｐ Ｂ Ｖ２２０ ，构建成重组质粒ｐ Ｂ Ｖ Ｍ Ｎ，导入大肠杆菌 Ｄ Ｈ５α，经温敏诱导，成功地表达了 Ｍ Ｎ 基因。表达产物经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 印迹分析，其分子量约３４ ｋ Ｄ，与兔抗 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 高免血清发生反应，经光密度扫描分析，表达产物量占菌体总蛋白的１２ ％ 。该研究为 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ

摘要：目的　PCR方法和培养法调查食品和水中空肠弯曲杆菌的比较研究。方法　用空肠弯曲杆菌VS1基因的序列为模板设计一对引物 ,建立一种快速从食品和水中检测空肠弯曲杆菌的PCR方法 ;同时对南京地区的屠宰场、超市和牛奶场等地采取 10 0份鸡肉、10 0份生牛奶及 10 0份井水及自来水进行空肠弯曲杆菌PCR法和培养法双向检查。结果　研究表明该PCR方法只对空肠弯曲杆菌能特异的扩增出 35 8bp片段 ,而其它结肠弯曲杆菌、胎儿弯曲杆菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、沙门氏菌、大肠杆菌等均不能扩增出 ,检测灵敏度达 8CFU/ml,特异性与常规生化检查是一致的 ,发现 30 % (30 / 10 0 )的鸡肉为阳性、30 % (30 / 10 0 )的生牛奶为阳性、14 % (14 / 10 0 )的水为阳性。结论　调查结果表明在市场上销售的鸡肉、牛奶、牛奶制品及井水存在不同程度空肠弯曲杆菌污染 ,如果加工不当或饮食习惯不卫生 ,会对消费者的健康构成潜在威胁。

摘要：目的用TaqMan技术建立荧光RT-PCR方法,用于检测西尼罗病毒(WNV)。方法从GenBank上调取WNV的基因序列,设计WNYA、WNYB、WNYC三套荧光RT-PCR,经优化后用于WNV灭活苗、乙型脑炎病毒(JEV)、黄热病毒(YFV)等11种病毒核酸的检测,同时用10倍倍比稀释的双链DNA、质粒DNA、cDNA、RNA进行扩增,以检测其灵敏度。结果建立的WNYA、WNYC荧光RT-PCR检出WNV灭活苗阳性,而JEV等10种非WNV病毒均为阴性,能检出30个拷贝和65个拷贝的双链DNA、420个拷贝和460个拷贝的质粒DNA;WNYB的反转录效率明显低于WNYA和WNYC。结论建立的WNYA、WNYC荧光RT-PCR可作为检测WNV的技术储备。

摘要：为了解决群养母猪个体饮水行为的精准监测问题,提出一种饮水行为自动监测方法并设计了监测系统。采用射频标识技术、红外探测技术、多路信号嵌入式处理技术、ZigBee无线网络技术设计了远程饮水监测点;以STM32微控制器为核心扩展ZigBee模块及以太网接口设计具有协议转换功能的网关节点,实现饮水数据向本地服务器的转发;利用Visual C#及SQL Server构建了饮水行为管理信息系统,实现母猪饮水数据的存储、管理、远程发布。该系统在养殖场实地测试,结果表明,系统对群养母猪饮水频率监测准确率达到100%,能够实现母猪饮水行为的实时远程监测目标。

摘要：该研究利用CRISPR/Cas9策略构建敲除VPS34基因的A549/293T细胞系,并初步将其用于自噬功能研究。应用在线工具设计了针对VPS34基因的3条sgRNA,并克隆至pX459载体。将重组质粒转染A549/293T细胞,嘌呤霉素初步筛选,通过PCR后测序和Western blot技术检测发现, sgRNA-1的敲除效果最好。将转染sgRNA-1的两种细胞单克隆化, PCR测序发现,存在碱基缺失, Western blot结果显示,对应的单克隆也未检测到VPS34蛋白,可见成功获得了VPS34敲除的A549/293T细胞系。由于VPS34参与自噬起始,实验结果显示, VPS34敲除后, LC3-I向LC3-II转化显著被抑制,自噬底物P62大量累积。结果表明,该方法成功获得稳定敲除VPS34基因的A549/293T细胞系,且细胞中的自噬被显著抑制。同时,敲除VPS34能够降低人肺癌A549细胞的生长速率。该实验利用CRISPR/Cas9系统首次获得稳定敲除VPS34基因的哺乳动物细胞A549/293T细胞系,为后续自噬功能研究提供有力工具。

摘要：根据GenBank中登录的链球菌属保守基因(EF-TU)、猪链球菌种保守基因(GDH)、C群马链球菌兽疫亚种保守基因(M-like)、猪链球菌型特异性基因(SS1型CPS1I、SS2型CPS2J、SS7型CPS7H和SS9型CPS9H)的序列设计合成7对引物,建立了一次性在属、种、型3个水平上检测链球菌猪主要致病种和型(C群马链球菌兽疫亚种和猪链球菌1、2、7、9型)的多重PCR方法。结果显示,该多重PCR在退火温度为61℃时可一次性扩增出7条符合预期大小、序列正确的基因条带;特异性试验和准确性试验结果均符合预期,无非特异性、交叉反应、假阳性、假阴性条带出现;对16株临床分离鉴定链球菌的检测结果与细菌学鉴定及单纯PCR鉴定的符合率均为100%;敏感性为0.08ng/μL;5次重复试验的结果也完全一致。结果表明,建立的多重PCR方法具有高度特异性、准确性、敏感性和稳定性,适用于猪场链球菌病的监控和流行病学快速诊断。

摘要：根据抗菌肽Fowlicidin-3氨基酸序列,选用大肠杆菌(Escherichia coli)偏嗜密码子,设计合成117bp的Fowli-cidin-3a和102bp的Fowlicidin-3b基因。将这2个基因克隆到突变载体,构建出表达载体pET-32a-C-Fowlicidin-3a和pET-32a-Tev-C-Fowlicidin-3b,分别转化至*** BL21Rosetta-2中,IPTG诱导表达融合蛋白Trx-Fowlicidin-3a和Trx-Fowlicidin-3b并进行纯化。结果表明:肠激酶裂解Trx-Fowlicidin-3a和Tev酶裂解Trx-Fowlicidin-3b效率都较高,获得的裂解液都对指示菌*** DH5α显示出抑菌活性。Fowlicidin-3a和Fowlicidin-3b对指示菌*** DH5α的最小抑菌浓度均为2μ***-1。