摘要：根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp与 epf)序列 ,分别设计、合成一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)方法。该方法扩增出 2型菌株的 mrp大小为 885 bp,epf为 62 6bp,而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等 PCR均未扩增出任何条带。用 Xba 和 H ae 分别酶切 PCR扩增产物 ,均获得与预计一致的酶切图谱 ,PCR扩增产物测序结果显示 :其基因序列分别与 Gen Bank上公布的mrp全基因第 5 0 0～ 1 3 1 5位碱基及 epf全基因第 2 441～ 3 0 2 8碱基对一致。PCR检测的敏感度可达 1 0 0个细菌。用建立的 PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测 ,检测的 1 5株 2型分离株中有 1 3株 mrp与 epf均为阳性 ,为典型的高毒力表现型菌株 (mrp+ epf+ ) ,1株为 mrp+ epf- ,1株为 mrp- epf- 。

摘要：通过筛选16S rDNA序列库，设计了一对双歧杆菌属特异性引物P175和P874在试验确定的反应条件下，该引物对能正确区分双歧杆菌和非双歧杆菌。RAPD技术用于种及菌株的鉴定。选用10种引物对9株标准菌株基因组DNA进行扩增，对其指纹图谱分析表明S 256引物扩增的图谱可于双歧杆菌菌种及菌株鉴定的依据。通过对图谱相似性进行聚类分析，揭示了双歧杆菌属基因组的多态性及其遗传发育关系。

摘要：建立高效液相色谱荧光检测法同时检测鸡组织中阿莫西林和氨苄西林残留的方法。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白,正己烷脱脂,饱和二氯甲烷萃取,上清液经水杨醛在酸性条件下沸水浴衍生化。以C18柱为固定相、0.01 mol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 m L/min,荧光检测激发波长为358 nm,发射波长为440 nm。阿莫西林和氨苄西林在25-1 000μg/kg体重范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9994。当阿莫西林和氨苄西林添加水平在10-100μg/kg体重时,鸡组织样品中平均回收率均高于68.65%,相对标准偏差均低于10.74%。阿莫西林、氨苄西林在鸡组织中的检测限均分别为5、3.5μg/kg体重,阿莫西林、氨苄西林的定量限均分别为13、10μg/kg体重。该方法灵敏、准确、快速,适用于鸡组织中阿莫西林、氨苄西林残留的同时检测。

摘要：根据猪传染性胃肠炎病毒 ( TGEV)纤突蛋白 S基因的 5′端核酸序列设计了 1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为 886bp。在优化 RT-PCR反应条件的基础上 ,建立了检测 TGEV的 RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测 56份猪腹泻粪样 ,同时用夹心 ELISA法作对照。结果显示 ,RT-PCR法检测的 2 0份阳性粪样 ,用夹心 ELISA法检测有 1 4份呈阳性 ,两者的符合率为 89%。 RT-PCR法比夹心 ELISA法敏感性更高 ,可用于

摘要：按照犬瘟热(CDV)N基因序列,设计合成了特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立了Real-time荧光定量RT-PCR技术,对细胞培养物、肝脏、肺脏、脑、脾脏、淋巴结以及鼻腔拭子等组织病料中的CDV进行了特异性检测和敏感性试验。同时,利用建立的Real-time荧光定量RT-PCR方法与常规RT-PCR以及韩国BIOINDIST生产的BIT RAPID CDV检测试剂盒对57份临床样品进行了检测。结果:用20pmol/mL的引物浓度各1uL和20pmol/mL的探针浓度0．3uL,获得的荧光信号最强,曲线平滑。敏感性高,可检测到1．24×10—3ng/uL的病毒RNA;特异性强,与NDV、AIV、NiPV等RNA病毒不发生交叉反应。试验重复性的变异系数(CV)分别为2．3%、2．5%和4．2%;与常规RT-PCR和BIOINDIST生产的BIT RAPID CDV检测试剂盒相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,并可同时检测大量样品等优点。

摘要：根据GenBank上马流感病毒H3N8 HA和NA的基因序列,设计并合成了扩增HA和NA基因RT-PCR引物及NA基因荧光定量RT-PCR引物探针,经条件优化,建立的HA和NA RT-PCR方法检测下限为10 TCID50;荧光PCR方法检测下限为0.1 TCID50。对H5、H7、H9、H3N1、H3N2、Pi等6种病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性,显示建立的方法具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于马流感病毒的检测和监控。

摘要：根据GenBank中猪圆环病毒2型（PCV-2）ORF2基因序列设计特异性引物，进行PCR反应，回收PCR产物，将其克隆人pMD18-T载体，再定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta，进行原核表达。表达产物经His—Bind蛋白纯化试剂盒纯化，平均浓度为1．10mg／ml。以1．8μg／ml蛋白包被酶标板，建立ELISA检测方法。建立的ELISA方法与北京世纪元亨公司试剂盒比较，两者检测结果符合率达85％以上。用该方法对常州某猪场36份母猪和156份10～160日龄猪群血清样品进行了检测，检测结果显示母猪阳性率为81．4％，仔猪阳性率随着日龄的增加而逐渐降低，之后由于受PCV-2的感染，阳性率逐渐升高。本试验建立的ELISA方法，具有较好的特异性、莺复性和敏感性，可用于猪群PCV-2抗体的大规模检测。

摘要：比较了长效强力霉素注射液和普通强力霉素注射液在猪体内的药物动力学特征。选用6头健康仔猪,按随机交叉设计试验,进行肌注两种强力霉素注射液在猪体内的药物动力学研究,给药剂量均为10 mg/kg BW。长效强力霉素注射液和普通强力霉素注射液肌注给药的药-时数据均符合一级吸收二室开放模型,主要药动学参数:吸收半衰期(T1/2Ka)为(0.51±0.17)h和(0.22±0.06)h,分布半衰期(T1/2α)为(4.38±1.45)h和(0.89±0.32)h,消除半衰期(T1/2β)为(11.07±4.14)h和(5.21±1.78)h,达峰时间(Tmax)为(2.31±0.44)h和(0.62±0.27)h,峰浓度(Cmax)为(1.24±0.33)μg/ml和(2.61±0.58)μg/ml,表观分布容积(Vd)为(7.55±2.24)L/kg和(2.78±0.36)L/kg,药时曲线下面积(AUC)为(19.85±5.62)μg/(ml.h)和(9.53±2.47)μg/(ml.h)。结果表明:长效强力霉素注射液在猪体内吸收缓慢,消除半衰期显著延长,临床应用24 h给药1次仍能维持对常见病原菌的有效血药浓度。

摘要：为了解流感病毒M2及HA保守肽段的免疫原性,参照流感病毒M2及HA的氨基酸序列分别设计合成多肽并免疫SPF鸡,设H5和H9亚型禽流感灭活疫苗及空白组作对照。对免疫后2、4、6和8周的血清进行HI和ELISA抗体、MDCK细胞的病毒血清法中和抗体效价和间接免疫荧光抗体检测,8周采血结束后用H9病毒进行攻毒检测。结果表明两种多肽疫苗均不产生HI抗体,针对各自多肽的ELISA抗体效价均显著高于H5/H9常规灭活疫苗对照组。M2e/HA0多肽苗免疫血清最高中和抗体效价为1∶16,远低于H9血清中和效价(1∶256)。间接免疫荧光检测结果显示多肽苗(M2e/HA0)组含荧光颗粒的MDCK细胞比例约20%左右,低于H5和H9灭活疫苗组含荧光颗粒细胞数(分别为50%和70%)。H9亚型禽流感病毒攻毒结果表明,两组多肽免疫后都可以有效抑制排毒,其中M2e免疫组抑制效果略好于HA0免疫组。以上结果提示M2e/HA0多肽具有较好的免疫原性,但其免疫原性弱于常规疫苗。

摘要：建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样品为原材料,对方法的敏感性和特异性进行分析。运用成功建立的二重PCR,从带菌率最高的牛粪便中检测EHEC O157:H7,并进行菌株分离和鉴定。成功建立了rfbE与fliC的二重PCR方法,rfbE与fliC引物比例为2.5∶1,PCR循环参数中退火温度为56℃,扩增片段长度rfbE为812 bp,fliC为625 bp。检测阳性临床样品检测敏感性可以达到10 cfu/g。检测24株非EHEC O157:H7大肠杆菌和15株非大肠杆菌,只有EHECO157:H7能够扩增出特异性的rfbE条带,EHEC O157:H7和EPEC O55:H7能够扩增出fliC。只有EHEC O157:H7能够同时扩增出rfbE与fliC 2条目的条带。从63份牛粪便样品中分离到4株EHEC O157:H7:生化试验表明4株EHEC O157:H7具有典型EHECO157:H7的生化特性;药敏试验表明4株EHEC O157:H7具有较为广谱的耐药性;rfbE序列分析与GenBank序列同源性介于97.3%～99.2%之间,fliC序列与GenBank序列同源性介于97.6%～100%之间;4株EHEC O157:H7对Balb/c小鼠的致病性有差异,EHEC O157:H728#和EHEC O157:H738#致病性强,EHEC O157:H73#和EHEC O157:H717#较弱。以rfbE和fliC为目的基因成功建立了二重PCR,敏感性和特异性良好,可用于临床样品的检测,提高细菌分离率。