摘要：目的对宫颈疾病患者血浆循环DNA进行定量检测，探讨该指标对宫颈疾病特别是宫颈癌的诊断价值。方法收集2009年5月至2010年12月在南京医科大学第一附属医院就诊的53例宫颈低度病变[即宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ]、49例宫颈高度病变（包含CINⅡ、CINⅢ）和44例原发性宫颈浸润癌患者的治疗前血浆，并选取同期体检的健康妇女70例作为对照。磁珠法提取血浆循环DNA，采用自行建立的含内参照的双重实时荧光定量PCR技术检测血浆循环DNA含量。结果宫颈癌患者血浆循环DNA含量的中位数为61．59mg／L，显著高于低度病变、高度病变、健康对照妇女（中位数分别为21．77、24．17、16．35mg／L），分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。鳞癌患者血浆循环DNA含量（中位数为50．43mg／L）高于腺癌（中位数为47．31mg／L），两者比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。Ⅰ期宫颈癌患者血浆循环DNA含量明显低于Ⅱ-Ⅲ期者（中位数分别为46．02、71．35mg／L），两者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论血浆循环DNA在宫颈疾病的诊断及衡量疾病严重程度中具有一定的应用前景。

摘要：目的以熔解曲线法测定4株肺癌细胞株和肺癌病人APC基因启动子区的甲基化模式。方法以脐血淋巴细胞DNA及其转甲基后的DNA经化学修饰、克隆测序的质粒，作为完全非甲基化和完全甲基化标准品。设计通用引物，采用加入荧光染料SYBRGreen1的荧光定量PCR法扩增包含21个CpG位点的APC基因启动子区的目的序列，以熔解曲线法通过与完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值比较，确定四株肺癌细胞株（NCI-H446，NCI-H460，SPCA1，NCI—H520）在该区段的甲基化模式，并通过克隆测序验证。同时测定两例肺癌患者癌组织中APC基因启动子区甲基化模式。结果四株肺癌细胞株中，NCI-H446，SPCA1和NCI—H520的Tm值与完全非甲基化标准品的Tm值相同，而NCI—H460的Tm值有两个，分别与完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值吻合，并经克隆测序验证。两例肺癌患者癌组织的Tm值位于完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值之间。结论小细胞肺癌细胞株NCI—H446，肺腺癌细胞株SPCA1和肺鳞癌细胞株NCI—H520的APC基因启动子区为完全未甲基化型，而大细胞肺癌细胞株NCI—H460APC基因启动子区甲基化模式为等位基因杂合型。两例肺癌患者癌组织中的APC基因启动子均为部分甲基化型。熔解曲线法是简单、经济和实用的甲基化模式检测方法。

摘要：目的设计以PCSK9基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒载体并鉴定此RNA干扰体系对PCSK9基因表达的影响。方法将3条人PCSK9基因的shRNA片段插入至慢病毒载体pLentilox3.7,与pCDNA3-hPCSK9-FLAG质粒用Lipofectamine2000共转染293细胞,Westernblotting法鉴定出最有效的shRNA。此重组质粒与pCre-VSV-G、pLoxp-CMV-R8.91经293细胞包装后,产生的重组慢病毒感染293细胞,48h后转染pCDNA3-hPCSK9-FLAG质粒,Western blotting法检测人PCSK9基因表达的情况。结果经双酶切鉴定,构建了PCSK9 shRNA慢病毒载体pLentilox-hPC-SK9,鉴定出hshRNA-2为最有效的shRNA。重组的慢病毒能明显的抑制人PCSK9的表达。结论慢病毒介导的shRNA干扰技术可特异性的阻断PCSK9的表达,为进一步探讨PCSK9特异性的shRNA治疗脂代谢异常疾病奠定了基础。