摘要：背景:为将鼠抗人cTnI单克隆抗体应用人体进行体内诊断或作为治疗心肌损伤的药物载体,必须降低鼠源性抗体的免疫源性,克服其人抗鼠抗体反应,需要对其进行人源化改造。目的:克隆鼠抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因并进行序列分析。设计:单一样本研究。单位:一所医科大学附属医院的心血管病研究所。材料:本实验于2003-01/2004-05在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。分泌鼠抗人cTnI单克隆抗体的杂交瘤细胞株(JS200202)由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI单抗的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析。主要观察指标:重链Fd段和κ轻链基因序列及其所属亚型。结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800bpDNA片段。经序列分析,与已发表的鼠IgG基因序列对比,其核苷酸及其所推导的氨基酸序列符合鼠IgG1Fab段特征。在GenBank登录,登录号为AY484430(重链),AY484431(轻链);氨基酸序列登录号为AAR83243(重链),AAR83244(轻链)。结论:本实验室获得了完整的鼠源性抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因,为鼠抗人cTnI单克隆抗体的人源化改造奠定了基础。

摘要：目的:克隆鼠抗人cTnImAb Fab段基因并进行序列分析.方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI mAb的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析.结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800bp DNA片段.经序列分析,与已发表的鼠IgG基因序列对比,其核苷酸及其所推导的氨基酸序列符合鼠IgG1Fab段特征.在GenBank登录,登录号为AY484430(重链),AY484431(轻链);氨基酸序列登录号为AAR83243(重链),AAR83244(轻链).结论:本实验室获得了完整的鼠源性抗人cTnImAb Fab段基因,为鼠抗人cTnI的人源化改造奠定了基础.

摘要：基于基因芯片技术对心肌钙蛋白(cTnI)基因上的突变进行了分析.针对外显子上的突变特征设计了特异性探针,制备了可以同时检测cTnI基因上第3,5,7,8外显子突变的低密度基因芯片.对每一个外显子,设计了2条5′端标记荧光的寡核苷酸链,一条模拟野生型序列,另一条模拟突变型序列,将二者混合起来模拟杂合子序列.经过实验条件的优化,制作的芯片可以灵敏、特异地检测cTnI基因外显子上的突变.结果表明,该芯片检测突变正配错配区别明显,荧光强度比值符合理论估计(正中碱基错配的信号强度是完全正配信号强度的50%左右).经进一步对芯片优化后,该芯片有望在家族性肥厚型心肌病的研究和诊断中得到应用.

摘要：目的:等位基因特异性寡核苷酸杂交是基于分子杂交原理而建立的经典的突变检测方法,也是DNA芯片技术的重要组成部分,常用于突变筛查。实验拟建立一种适合快速大规模检测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T)的方法。方法:实验于2002-07/2004-06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所临床生物学诊断与治疗实验室完成。直接测序研究证实的具有cTnⅠ基因Arg145Trp突变的肥厚型心肌病患者2例,正常对照1名,受试者对实验均知情同意。自外周血白细胞抽提DNA,聚合酶链反应扩增心肌肌钙蛋白Ⅰ基因含有突变位点的外显子,点于硝纤膜上,分别在不同的温度条件(48,52,56℃)下再与生物素标记的突变及野生探针杂交,摸索最佳杂交条件。根据最佳杂交条件,分别在100倍浓度无关探针条件下行非特异性竞争杂交,在100倍浓度未标记的特异寡核苷酸探针条件下行特异性竞争杂交。结果:采用碱性磷酸酶标记的链霉亲和素和NBT/BCIP观察杂交结果:①突变及野生探针在48℃杂交时,除阴性对照外,2个患者及正常对照样本均见明显阳性信号。②在52℃及56℃条件下突变探针正确检出两个突变样本,但以56℃结果最佳。③100倍浓度无关探针杂交存在时,对生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果没有影响,2个患者样本均见明显阳性信号。100倍浓度未标记的突变寡核苷酸探针存在时杂交,完全抑制生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果。结论:所设计的寡核苷酸探针能够检测出肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T),适合该突变的快速大规模筛选。

摘要：目的　调查我国高血压的发病率及其影响因素，方法研究人群为不同地区、不同职业的１０个年龄为３５～５９岁的人群，共计２５６５６人。用统一设计、统一表格和统一标准化的调查方法，按国标规定方法测量血压。结果经过平均５年的定群随访，确诊高血压年发病率男性为１．２０％，女性为１．０７％，临界及以上分别为３．２７％和２．６８％。同患病率一样，人群间存在着北方高（３．０１％～５．６２％）南方低（０．７６％～１．５０％）的趋势。在工、农、渔不同职业、不同性别间也存在着明显差别。多元回归分析还表明，基线时收缩压（ＳＢＰ）、舒张压（ＤＢＰ）平均水平和体重指数对高血压发病率的影响最为明显。在控制了其他危险因素后，体重指数每增加一个单位，未来５年内，确诊高血压发病危险增加９％；在正常范围内的ＳＢＰ每增加１．３ｋＰａ（１０ｍｍＨｇ），未来５年内确诊高血压发病危险增加７１．５％。ＤＢＰ每增加１．３ｋＰａ（１０ｍｍＨｇ），确诊高血压发病危险增加１０２．４％。此外，分层分析表明，在３５～５９岁之间，年龄越小，相对危险增加幅度愈大。结论高血压的一级预防应在３５岁前尽早进行。

摘要：目的:利用聚合酶链反应定点突变技术构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体。方法:实验于2005-03/06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。选择南京医科大学第一附属医院体检中心健康体检者血标本提取人基因组DNA,设计、合成两对引物,将突变位点设计在引物内,突变位点包含限制性内切酶BseNI酶切位点,采用聚合酶链式反应定点突变技术,应用高保真TaqDNA聚合酶,通过三轮聚合酶链扩增反应对血小板反应素1基因的第13外显子进行扩增,将第13外显子碱基8831A置换为G,对最终扩增产物进行酶切鉴定和测序。结果:获得人血小板反应素1第13外显子编码钙结合域突变体,经酶切鉴定和测序分析,除引入突变点产生预期A8831→G突变外,其余碱基序列无改变。结论:采用聚合酶链反应体外定点突变技术,成功构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体,为研究血小板反应素1基因该位点突变导致血小板反应素1蛋白的结构、功能变化奠定了基础。

摘要：心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌兴奋收缩耦联的主要调节蛋白 ,是肌肉舒缩的分子开关。因其具有高度的组织特异性及检测的敏感性 ,自二十世纪九十年代以来 ,已被作为诊断心肌损伤首选的血清标志物 ,并且在疾病的预后评估中具有重要价值。研究显示收缩蛋白的降解及磷酸化修饰可能在心肌细胞的损伤及功能下降中起重要作用 ,而到目前为止 ,对无症状性心功能不全 ,临床上还没有敏感的诊断方法 ,即使对于明显的心力衰竭患者 ,也缺乏一个判断其心肌损伤程度的指标 ,血清心肌肌钙蛋白I可能会成为一个比较理想的评价心力衰竭患者的指标。同时对肌纤维蛋白结构和功能的研究也为心脏疾病的诊治提供了新的信息 ,其中针对肌纤维设计新药就是一个值得开拓和有应用前景的领域。

摘要：在静息/负荷心肌灌注显像(myocardial perfusion imaging,MPI)的基础上,使用D-SPECT进行心肌血流量(myocardial blood flow,MBF)和冠状动脉血流储备(coronary flow reserve,CFR)的心肌血流定量分析对冠心病的诊断具有增益价值。国内多个应用D-SPECT的医学中心共同制定了首部D-SPECT心肌血流定量操作规范并形成共识。

摘要：心房颤动(房颤)一站式治疗可以在单次手术中行射频/冷冻消融联合左心耳封堵达到改善症状和降低栓塞效果。一站式治疗虽具一定优势,但仍需要深入开展封堵器的材料与设计优化、一站式治疗方案优化、一站式治疗与单纯射频/冷冻消融和单纯封堵的随机对照研究及一站式术后抗凝策略等研究,以完善房颤一站式治疗,造福更多房颤患者。

摘要：背景 发生在无器质性心脏病的室性心律失常又称为特发性室性心律失常（IVA）,其中大多数起源于左心室或右心室流出道.目前关于特发性流出道室性早搏（IOTPVC）与非持续性室性心动过速（NSVT）的流行病学调查、预后以及临床干预均缺乏大样本的循证医学证据.基本原理 相关研究表明,不同负荷的IOTPVC/NSVT可能对患者的影响不同.IC类抗心律失常药物和β受体阻滞剂对IVA有效,导管消融是IVA的一线治疗措施.特发性流出道室性心律失常（IOTVA）研究将评估IOTPVC/NSVT对患者心功能的影响和不同干预方案对IOTPVC/NSVT负荷≥5％的患者的安全性与有效性.设计方案 IOTVA研究包括：①调查IOTVA在医院心内科门诊和住院患者中的构成比;②随访观察未经干预的IOTVA对患者心功能及预后的影响;③探讨与安慰剂对照的抗心律失常药物治疗IOTPVC患者的安全性;④比较抗心律失常药物与导管消融治疗IOTPVC/NSVT的安全性和有效性.在上述研究的基础上,探索IOTVA的临床治疗路径.患者的随访终点包括随访研究中PVC与NSVT出现次数及心脏功能变化等.本研究的次要终点包括脑钠肽（BNP）及生活质量的改善情况等.结论 IOTVA研究将明确我国IOTVA在门诊与住院室性心律失常患者中的构成比,抗心律失常药物和导管消融治疗的安全性与有效性.