摘要：目的：从恶性疟原虫FCC1／HN株环子孢子蛋白（circumsporozoite protein，CSP）的全长编码基因中扩增4个CSP基因编码片段，克隆至原核表达载体pET28 a／EGFP 中进行表达纯化，观察环子孢子蛋白肽段与EGFP融合蛋白对肝细胞的靶向结合能力，探讨其作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子载体的可行性。方法根据恶性疟原虫FCC1／HN株环子孢子蛋白的编码序列设计4对引物，利用聚合酶链反应（ PCR ）扩增出4段CSP 的编码基因，将其克隆到原核表达载体pET28 a／EGFP中，与EGFP融合表达，在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达，表达产物用Ni2＋螯合柱亲和纯化，采用SDS-PAGE对纯化的融合蛋白检测；并观察重组环子孢子蛋白对不同组织细胞的结合能力。结果从恶性疟原虫FCC1／HN株CSP基因中成功扩增到4段分别为300、90、120、80 bp的基因片段，且在原核表达载体pET28 a／EGFP中经诱导表达出相对分子质量约39＆#215;103、31＆#215;103、33＆#215;103和30＆#215;103大小的融合蛋白： CSR1a-EGFP、CSR1b-EGFP、CSR2a-EGFP及CSR2b-EGFP；通过Ni2＋亲和柱纯化获得重组CSP融合蛋白，能被疟原虫阳性血清特异识别，且CSR2 a-EGFP能够与肝癌和正常肝细胞特异性地结合，与其他组织来源的细胞则未见反应。结论重组环子孢子蛋白CSR2a-EGFP能够与肝组织特异性地结合，作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子具有一定的潜在应用价值。

摘要：目的评估透明帽辅助内镜下硬化术（CAES）治疗痔疮的方法学、可行性、安全性和有效性。方法对2014年9月至2016年5月收治的Ⅰ-Ⅲ度内痔患者行CAES治疗。依据CAES设计的内容，同步鉴别便血原因，并对检查过程中所发现的可切除息肉、肛乳头纤维瘤予以同步治疗。前瞻性观察CAES治疗痔疮的疗效，术中、术后并发症及患者满意度，随访时间超过3个月。结果共48例Ⅰ-Ⅲ度内痔患者接受CAES治疗，其中Ⅰ度25例（52．1％）、Ⅱ度21例（43．8％）、Ⅲ度2例（4．2％）。实施CAES同时一并完成的操作包括回结肠检查48例（100．0％），内镜下息肉切除术14例（29．2％），内镜下肛乳头纤维瘤切除术1例（2．1％），内镜下外痔切除术1例（2．1％），齿状线区域息肉的活检或切除2例（4．2％），黏膜脱垂硬化术2例（4．2％）。CAES术中、术后均无患者出现出血。1例（2．1％）患者术后出现感染，抗感染治疗1周后痊愈。1例（2．1％）患者在CAES术后4d诉轻度里急后重感。术后随访3个月，无患者出现并发症。患者对CAES的满意度为100．O％（48／48）。结论CAES作为一种治疗痔疮的新型内镜下硬化疗法，安全、有效、操作简便、患者满意度高。

摘要：肿瘤是一种动态的假器官,包含着多种细胞类型,它们之间相互作用,形成一个独特的网络。在这个网络中,恶性细胞的生存遇到许多挑战,并相应地对它们的代谢特性进行重新编程。这种改变可以通过与肿瘤内其他细胞,特别是免疫细胞的相互作用而实现。肿瘤微环境的重建能引起机体病理生理反应并促进代谢重编程,这种不同细胞之间的相互作用被用来支持肿瘤的代谢和生长。利用这些过程的重要性和普遍性及在肿瘤发生和进展中的作用,设计新的靶向药物用于癌症治疗。因此,剖析肿瘤微环境中不同细胞间代谢重编程的特点将有助于设计新的免疫治疗方案和治疗策略,并为个体化精准医疗奠定基础。

摘要：目的：探讨在麻醉状态下经胃镜中消化道粪菌移植的护理配合操作方法,并观察其安全性。方法前瞻性设计临床研究,2012年10月—2013年12月在南京医科大学第二附属医院消化医学中心接收经胃镜标准化粪菌移植患者86例,分析操作记录,统计注射时间、胃内有无反流、呕吐等不良反应,并总结护理经验。结果86例患者注射粪菌时间平均（3.3±1.9） min；73.3%的患者胃内无反流,26.7%的患者胃内少许反流,无一例发生大量反流、呕吐等现象。结论通过恰当的护理配合经胃镜中消化道粪菌移植的操作方法有效、安全。

摘要：目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR(GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c-Met CAR-T(GFP)细胞。Western blot检测c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)在293T细胞中表达的外源性CD3ζ蛋白。设计特异性引物应用荧光定量PCR检测CAR病毒对T细胞的感染效率,并与流式细胞术的检测结果进行比较。结果:构建c-Met CAR(GFP)质粒,荧光显微镜可观察到c-Met CAR(GFP)质粒在293T细胞上表达绿色荧光蛋白。c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)病毒感染的293T细胞可表达外源性CD3ζ蛋白。荧光定量PCR检测c-Met CAR与c-Met CAR(GFP)的感染效率分别为(52.1±1.7)%、(55.9±2.3)%。流式细胞术检测c-Met CAR(GFP)病毒感染效率为(50.7±3.6)%,两种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法能够特异性检测CAR病毒对T细胞的感染效率,该检测方法结果准确、安全,对CAR-T细胞的临床应用具有实用价值。

摘要：目的:通过优化设计、构建c-Met/PD-L1 scFv-Fc融合蛋白,探究重轻链不同组合形式对c-Met/PD-L1 scFv-Fc融合蛋白与肿瘤抗原结合的亲和性和特异性的影响。方法:使用生物信息学分析、基因工程抗体技术设计、优化及制备重轻链不同组合的双特异性c-Met/PD-L1 scFv-Fc融合蛋白CP1、CP2、PC1、PC2;生物分子相互作用分析仪BLItz分析融合蛋白对重组c-Met蛋白和PD-L1蛋白的亲和力,ELISA法分析其抗原结合特异性。结果:成功制备双特异性c-Met/PD-L1 scFv-Fc融合蛋白,融合蛋白CP1与重组c-Met蛋白和PD-L1蛋白的亲和力和抗原结合特异性均优于CP2、PC1和PC2。结论:重轻链不同组合形式会影响c-Met/PD-L1 scFv-Fc融合蛋白与c-Met和PD-L1蛋白的亲和力和抗原结合的特异性,融合蛋白CP1的亲和力和抗原结合的特异性最高,其对应的重轻链组合形式可用于c-Met/PD-L1 CAR表达载体的构建。

摘要：目的探讨miR-34b/c rs4938723 T>C与中国人群原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,选取501例原发性肝细胞肝癌病例和548例正常对照。选取miR-34b/c rs4938723 T>C为研究位点,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法进行多态性检测,应用Logistic回归计算OR值及95%CI,比较不同基因型与HCC发病风险的关系。结果在调整年龄、性别、吸烟、饮酒因素后,携带rs4938723 TC/CC基因型者与携带rs4938723 TT基因型个体相比,发生肝癌的风险增加了40%(调整OR=1.40,95%CI=1.10～1.80)。进一步分析显示在原发性肝细胞肝癌的发生中rs4938723基因型与饮酒存在交互作用(相乘交互作用P=0.049,相加交互作用P=0.012)。结论本研究表明位于miR-34b/c启动子区的rs4938723 T>C多态性可能影响中国人群原发性肝细胞肝癌发病风险。

摘要：为了加强肠内营养泵输注过程中的规范化安全管理,自行设计了肠内营养泵输注巡视单应用于临床.通过应用该巡视记录单,纠正了护士在使用肠内营养泵时依赖仪器报警的心理,加强了肠内营养过程中的环节质控,临床应用6 个月,未发生因使用肠内营养泵引发的不良事件.