摘要：背景:目前已有很多实验证明外周血中存在间充质干细胞,但由于所用分离筛选方法、培养条件的不同导致了结果的多样性,且实验可重复性较差。目的:观察表皮生长因子对体外分离培养的原代小鼠外周血间充质干细胞克隆形成的影响,以及外周血间充质干细胞传代后的多向分化潜能。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-09在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成。材料:雄性成年C57BL/6J小鼠16只,购于南京医科大学骨与干细胞研究中心实验动物中心。重组人表皮生长因子为Sigma公司产品。方法:无菌条件下从小鼠心脏采血,裂解红细胞后应用贴壁法分离外周血间充质干细胞,通过传代进行纯化和扩增。将原代细胞分2组进行体外培养,实验组向α-MEM培养液中加入10μg/L表皮生长因子,对照组给予不含表皮生长因子的α-MEM培养液,16d后行亚甲基蓝染色,计算克隆面积。取第3代外周血间充质干细胞,以1×104/cm2密度接种后,分别向成骨和脂肪方向诱导分化。主要观察指标:外周血间充质干细胞的生长特性,外周血间充质干细胞体外诱导成骨、成脂能力。结果:倒置相差显微镜下,外周血间充质干细胞贴壁生长,形态类似于骨髓间充质干细胞,呈成纤维细胞样;但其形成克隆的时间较骨髓间充质干细胞有所推迟,且原代细胞克隆形成率低于骨髓间充质干细胞;亚甲基蓝染色结果示实验组外周血间充质干细胞克隆形成率明显高于对照组(P<0.05)。外周血间充质干细胞成骨诱导后,碱性磷酸酶染色、总胶原染色及茜素红染色均呈强阳性;成脂诱导后油红染色呈阳性,有一定数量的脂滴形成。结论:外周血中存在少量的间充质干细胞,能自我增殖,表皮生长因子可有效促进原代外周血间充质干细胞克隆的形成;体外分离培养的外周血间充质干细胞具备成骨和成脂分化特性。

摘要：背景：目前普遍认为骨髓间充质干细胞是一类高度黏附的成纤维样细胞，但也有研究显示处于非黏附状态的骨髓间质细胞也具有自我复制及多向分化潜能。目的：探讨表皮生长因子对骨髓中存在的非黏附骨髓间充质干细胞产生成纤维细胞集落形成单位的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-07／12在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成。材料：4周龄雄性C57／BL6小鼠6只，由南京医科大学实验动物中心提供。表皮生长因子为美国Sigma公司产品。方法：全骨髓法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞，调整细胞浓度为2×10^9L^-1。收集第3代细胞，分别接种于向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的培养液中进行诱导。取30mL骨髓间充质干细胞悬液，平均分到两管中，表皮生长因子处理组加入终浓度为10μg／L表皮生长因子，空白对照组加入普通完全培养基，采用反复转移非黏附骨髓细胞培养法，每天将非黏附骨髓细胞转移到新的培养皿，原来的皿中为总骨髓来源的贴壁细胞，转移第1次定义P01，第2次为P02，依次类推，培养12d终止。主要观察指标：骨髓间充质干细胞的鉴定结果，亚甲基蓝染色显示每皿细胞克隆的形成情况，计算克隆形成区域占皿底面积的百分比及克隆数目。结果：非黏附骨髓间充质细胞在第4天转移到新的培养皿后，继续培养仍能够贴壁生长，并逐渐扩增形成克隆；诱导后能够分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。给予表皮生长因子处理后，无论是总骨髓来源的贴壁细胞，还是反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞，均能够不断产生成纤维细胞集落形成单位，且数量明显多于空白对照组（P〈005）。表皮生长因子处理组总骨髓来源的贴壁细胞、P01-P05非黏附骨髓间充质干细胞所形成的贴壁细胞数分别是空白对照组的1．54倍，4．25倍，2．51倍，1．56倍，1.25倍，2.01倍：所产生的克隆数分别是空白对照组的12倍，18倍，1．4倍，1．4倍，1．1倍。结论：表皮生长因子能有效促进骨髓中的非黏附骨髓间充质干细胞在悬浮状态下增殖，明显提高了骨髓间充质干细胞的富集效率。

摘要：目的采用长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）高通量测序技术检测氧诱导视网膜病（oxygen-induced retinopathy，OIR）新生小鼠和正常新生小鼠视网膜组织lncRNA的差异表达情况，为早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity，ROP）的发病机制研究提供依据。 方法清洁级C57BL/6J新生小鼠48只，按随机化配对设计分为OIR组和对照组，每组24只。生后第7天，将OIR组小鼠与母鼠饲养于密闭有机玻璃箱内，氧浓度（75±2）%，于生后第12天恢复在空气中饲养，继续饲养5 d。对照组小鼠一直饲养于正常空气环境中，至生后第17天。生后第17天，2组小鼠处死后摘除眼球，荧光显微镜观察视网膜血管形态与分布，光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目，同时采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）对高通量测序得到的差异表达lncRNA进行验证。基于lncRNA与mRNA表达相关性以及lncRNA与mRNA基因组位置近邻关系，得到lncRNA的潜在靶基因。同时通过GO和KEGG Pathway分析对lncRNA表达谱进行初步生物信息学分析。采用t检验及Graphpad Prism对数据进行统计分析及绘图。 结果lncRNA高通量测序技术分析获得1 118条与OIR相关的lncRNA（差异表达倍数≥2倍，P〈0.05）。采用实时荧光定量PCR验证结果表明，OIR组XLOC_150632、XLOC_150636表达明显上调，XLOC_122045、XLOC_100454、XLOC_170009、XLOC_122042表达明显下调。差异表达lncRNA的靶基因经GO分析有852个靶基因富集于生物学进程，1 148个靶基因富集于细胞组件，2 100个靶基因富集于分子功能；Pathway分析36个显著富集的生物学通路，主要涉及视网膜发育、血管内皮细胞趋化、迁移及能量代谢。 结论OIR小鼠视网膜组织中lncRNA存在差异表达，其中XLOC_150632、XLOC_150636潜在靶基因成纤维细胞生长因子2与磷脂酰肌醇-3激酶通路相关，可能与OIR视网膜新生血管形成相关。

摘要：目的:设计新生儿院前急诊转运护理记录单,全面、客观、动态地记录新生儿院前急诊转运过程中的病情变化及护理措施,为提高新生儿转运护理质量提供依据。方法:在遵循江苏省《病历书写基本规范》要求下,结合新生儿转运文献及指南,设计表格式的新生儿院前急救转运护理记录单。结果:自行设计的表格式新生儿院前急救转运护理记录单不仅能够客观、准确、及时、有效反映新生儿院前急救的情况,还为改善患儿的远期结局提供真实依据。结论:新生儿院前急救转运护理记录单不仅可以作为解决医疗纠纷提供举证责任倒置的法律依据,还可以进一步作为提高转运护理质量和患儿最终生命质量的真实数据来源。

摘要：目的 探讨信号传导及转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)对肺泡上皮细胞表面活性物质相关蛋白(surfactant proteins,SP)表达的调控作用.方法 构建过表达STAT3的慢病毒并感染人肺泡上皮细胞A549细胞,构建过表达STAT3基因的A549细胞株;设计并化学合成STAT3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),在脂质体(Lipofectamine3000)的介导下转染A549细胞,构建沉默STAT3的A549细胞;采用Real-time PCR法分别检测STAT3过表达和沉默后STAT3、SP-A、SP-B、SP-C和SP-D mRNA的表达量,Western blot法检测STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、SP-A、SP-B、SP-C和SP-D蛋白的表达.结果 通过Real-time PCR和Western blot法检测STAT3的表达,结果证明成功构建了过表达/沉默STAT3的A549细胞株;与空载病毒组(LV5-Mock)相比,过表达STAT3组(LV5-STAT3)的SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白的表达均上调(P<0.05);与阴性对照组(NC)及转染试剂对照组(Mock)相比,沉默STAT3组(siRNA) SP-A、SP-B、SP-C和SP-D mRNA和蛋白的表达均下调(P<0.05).结论 STAT3对肺表面活性物质相关蛋白的表达具有调控作用,过表达STAT3基因能够促进SP的表达,沉默STAT3基因抑制SP的表达.