摘要：目的:制备兔抗人LYRM1蛋白的多克隆抗体并对其进行初步鉴定。方法:预测LYRM1蛋白的抗原表位,设计并合成出一段由17个氨基酸组成的多肽,将合成肽与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为抗原,免疫新西兰大白兔,制备抗LYRM1蛋白的多克隆抗体,利用ELISA、Westernblot鉴定其效价及特异性,并将该抗体用于人脂肪组织LYRM1的表达检测。结果:制备了兔抗人LYRM1蛋白的多克隆抗体并证实此抗体效价较高、特异性较强。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功制备了人类肥胖相关新基因LYRM1的多克隆抗体。

摘要：背景：目前普遍认为骨髓间充质干细胞是一类高度黏附的成纤维样细胞，但也有研究显示处于非黏附状态的骨髓间质细胞也具有自我复制及多向分化潜能。目的：探讨表皮生长因子对骨髓中存在的非黏附骨髓间充质干细胞产生成纤维细胞集落形成单位的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-07／12在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成。材料：4周龄雄性C57／BL6小鼠6只，由南京医科大学实验动物中心提供。表皮生长因子为美国Sigma公司产品。方法：全骨髓法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞，调整细胞浓度为2×10^9L^-1。收集第3代细胞，分别接种于向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的培养液中进行诱导。取30mL骨髓间充质干细胞悬液，平均分到两管中，表皮生长因子处理组加入终浓度为10μg／L表皮生长因子，空白对照组加入普通完全培养基，采用反复转移非黏附骨髓细胞培养法，每天将非黏附骨髓细胞转移到新的培养皿，原来的皿中为总骨髓来源的贴壁细胞，转移第1次定义P01，第2次为P02，依次类推，培养12d终止。主要观察指标：骨髓间充质干细胞的鉴定结果，亚甲基蓝染色显示每皿细胞克隆的形成情况，计算克隆形成区域占皿底面积的百分比及克隆数目。结果：非黏附骨髓间充质细胞在第4天转移到新的培养皿后，继续培养仍能够贴壁生长，并逐渐扩增形成克隆；诱导后能够分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。给予表皮生长因子处理后，无论是总骨髓来源的贴壁细胞，还是反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞，均能够不断产生成纤维细胞集落形成单位，且数量明显多于空白对照组（P〈005）。表皮生长因子处理组总骨髓来源的贴壁细胞、P01-P05非黏附骨髓间充质干细胞所形成的贴壁细胞数分别是空白对照组的1．54倍，4．25倍，2．51倍，1．56倍，1.25倍，2.01倍：所产生的克隆数分别是空白对照组的12倍，18倍，1．4倍，1．4倍，1．1倍。结论：表皮生长因子能有效促进骨髓中的非黏附骨髓间充质干细胞在悬浮状态下增殖，明显提高了骨髓间充质干细胞的富集效率。

摘要：目的采用长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）高通量测序技术检测氧诱导视网膜病（oxygen-induced retinopathy，OIR）新生小鼠和正常新生小鼠视网膜组织lncRNA的差异表达情况，为早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity，ROP）的发病机制研究提供依据。 方法清洁级C57BL/6J新生小鼠48只，按随机化配对设计分为OIR组和对照组，每组24只。生后第7天，将OIR组小鼠与母鼠饲养于密闭有机玻璃箱内，氧浓度（75±2）%，于生后第12天恢复在空气中饲养，继续饲养5 d。对照组小鼠一直饲养于正常空气环境中，至生后第17天。生后第17天，2组小鼠处死后摘除眼球，荧光显微镜观察视网膜血管形态与分布，光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目，同时采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）对高通量测序得到的差异表达lncRNA进行验证。基于lncRNA与mRNA表达相关性以及lncRNA与mRNA基因组位置近邻关系，得到lncRNA的潜在靶基因。同时通过GO和KEGG Pathway分析对lncRNA表达谱进行初步生物信息学分析。采用t检验及Graphpad Prism对数据进行统计分析及绘图。 结果lncRNA高通量测序技术分析获得1 118条与OIR相关的lncRNA（差异表达倍数≥2倍，P〈0.05）。采用实时荧光定量PCR验证结果表明，OIR组XLOC_150632、XLOC_150636表达明显上调，XLOC_122045、XLOC_100454、XLOC_170009、XLOC_122042表达明显下调。差异表达lncRNA的靶基因经GO分析有852个靶基因富集于生物学进程，1 148个靶基因富集于细胞组件，2 100个靶基因富集于分子功能；Pathway分析36个显著富集的生物学通路，主要涉及视网膜发育、血管内皮细胞趋化、迁移及能量代谢。 结论OIR小鼠视网膜组织中lncRNA存在差异表达，其中XLOC_150632、XLOC_150636潜在靶基因成纤维细胞生长因子2与磷脂酰肌醇-3激酶通路相关，可能与OIR视网膜新生血管形成相关。