摘要：目的构建大鼠STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体，并观察其对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法针对STATS基因的不同部位设计4对shRNA的寡核苷酸片段，克隆到慢病毒载体PLKO-1中，构建靶向STA33基因的慢病毒载体PLKO．1-STA33-shRNA，检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞，用噻唑蓝法和流式细胞仪检测沉默STAT3基因后对血管平滑肌细胞增殖和凋亡能力的影响。结果靶向STA33慢病毒表达载体构建成功。转染PLKO．1一STA33一shRNA后，STA33蛋白表达明显下降，其中以PLKO．1一STA33一S1最为明显，达到90％以上；转染PLKO．1-STA33-S1的细胞增殖能力（A值=0．25±0．05）明显低于未转染组（A值=0．62±0．12）和阴性对照组细胞（A值=0．59±0．11）（P〈0．05）；而早期细胞凋亡率（26．9±2．8）％和晚期细胞凋亡率（9．5±1．6）％均明显高于未转染组和阴性对照组（P〈0．01）。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向STAT3慢病毒表达载体PLKO．1-STAT3-S1，该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖，并促进细胞凋亡。

摘要：目的构建大鼠骨桥蛋白（OPN）基因的shRNA慢病毒表达载体，并观察其对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和凋亡的影响。方法针对OPN基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段，克隆到慢病毒载体PLKO-1中，构建靶向OPN基因的慢病毒载体PLKO-1-OPN-shRNA，检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞，用逆转录-聚合酶链反应（***）检测VSMCsOPNmRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测VSMCOPN蛋白表达水平；噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪检测沉默OPN基因后对VSMC增殖和凋亡能力的影响。结果靶向OPN慢病毒表达载体构建成功。重组慢病毒载体PLKO-1-OPN—shRNA转染后可显著抑制VSMCs的OPNmRNA及蛋白的表达水平，OPN蛋白表达明显下降，其中以PLKO-1-OPN2-shRNA最为明显，达到90％以上；转染PLKO-1-OPN2-shRNA后72h的细胞增殖能力[吸光度（A）值=0．365±0．011]明显低于未处理组（A值=0．941±0．028）和阴性对照组细胞（A值：0．941±0．040，P〈0．05）；而早期细胞凋亡率（20．44±2．69）％和晚期细胞凋亡率（16．79±1．01）％均明显高于未转染组和阴性对照组（P〈0．01）。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向OPN慢病毒表达载体PLKO-1-OPN2-shRNA，该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖，并促进细胞凋亡。