摘要：目的:构建重组质粒pPHU281-C-Spec-E,用于敲除菌毛蛋白次要组分基因fimCDE。构建fimCDE缺陷的牙龈卟啉单胞菌,为进一步研究FimCDE在感染中的作用奠定基础。方法:厌氧罐培养牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC33277,提取基因组DNA后,PCR扩增获得含有人工设计的酶切位点的fimC基因的上游片段及fimE的下游片段,将其克隆到自杀质粒pPHU281内,命名为pPHU281-C-E;再将抗大观霉素的抗性基因插入到C及E片段之间,最终获得重组质粒pPHU281-C-Spec-E。结果:酶切及DNA序列分析验证重组质粒pPHU281-C-Spec-E构建成功。结论:成功构建了含有牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白次要组分基因fimC上游及fimE下游片段的重组质粒pPHU281-CSpec-E,可用于构建菌毛蛋白次要组分FimCDE缺陷的的突变体。

摘要：谷氧还蛋白2(Glutaredoxin 2,GLRX2)是一种相对分子质量较小的氧化还原酶,属于硫氧还蛋白家族成员,以谷胱甘肽为辅基调节细胞的氧化还原内环境。在非应激条件下,GLRX2结合铁硫簇,以二聚体形式存在,可能参与铁硫簇的转运或运输;当氧化压力增加时,铁硫簇解聚,GLRX2二聚体转化为GLRX2单体,利用单巯基或双巯基机制,发挥抗氧化应激和抗细胞凋亡的功能。GLRX2与人类健康和疾病,如心血管疾病、神经退行性疾病、白内障、肿瘤细胞生长与分化和精子成熟等密切相关。因此,对GLRX2的深入研究将有助于设计针对氧化应激的药物,为治疗和预防由此产生的疾病或健康问题带来新的希望。

摘要：构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据小鼠cnksr2基因序列设计cnksr2干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-Sicnksr2干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化*** BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞,包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞病理性变化(Cell pathological effect,CPE),用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为3.98×107PFU/***2在大鼠及小鼠中具有保守性,该病毒能在大鼠来源的PC12细胞中成功表达,并且对cnksr2基因干扰效率达50%以上.结论:成功构建了小鼠cnksr2基因的干扰腺病毒载体.

摘要：构建GGPPS基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据GGPPS基因序列设计GGPPS干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-SiGGPPS干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化*** BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞CPE,用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建GGPPS基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.995×107PFU/***在人中具有保守性,该病毒能在人源的WRL-68细胞中成功表达,并且对GGPPS基因干扰效率达70%以上.

摘要：目的比较RNA干扰（RNAi）和伊马替尼（imatinib）杀伤K562细胞的效果。方法设计有效的bcr—abl干扰shRNA序列，利用基因工程技术插入到干扰载体构建RNAi质粒。测序鉴定正确的RNAi质粒转染K562细胞，48h后荧光显微镜观察转染效率。RT—PCR技术检测K562细胞中bcr—abl表达水平。同时，伊马替尼作用K562细胞。利用凋亡分析、MTT增生实验和磷酸化的酪氨酸蛋白含量检测来评估RNAi和伊马替尼作用效果。结果与伊马替尼一样，RNAi使K562细胞凋亡增强，增生减少，磷酸化的酪氨酸蛋白含量减少。结论RNAi达到伊马替尼杀伤K562细胞的效果，有望在临床用于治疗慢性髓细胞白血病（CML）患者，尤其是那些对伊马替尼等化疗药物不敏感的CML患者。

摘要：目的:调查普通成年人群隐匿性HBV感染率。方法:收集普通成年人血清1440份,ELISA检测HBV血清学标志物,分别设计HBV DNA不同区域的引物,用巢式PCR检测HBV DNA,对阳性标本进行DNA序列分析,并确定HBV基因型。结果:1440份血清中,HBsAg阳性70例(4.86%);HBsAg阴性的1370份血清中,3例(0.21%)至少2组不同特异性引物巢式PCR显示HBV DNA阳性。其DNA序列与基因库中已知HBV序列同源,证实了PCR产物的特异性,而各HBV DNA序列又不完全相同,排除了因污染造成的假阳性。3例隐匿性HBV感染中2例为基因型B型,另1例为C型。结论:普通成年人群存在隐匿性HBV感染。输血和器官移植时,仅以血清学标志物作为筛查HBV的手段,可能会引起HBV的传播。