摘要：目的：制备Cys-Annexin V冻干品,并建立相应的质量控制方法。方法：将一定量的新型膜联蛋白变体蛋白（Cys-Annexin V）、氯化亚锡和葡庚糖酸钠溶于磷酸缓冲液,制备成冻干品;使用Bradford法测冻干品中蛋白含量;HPLC测定标记率;电位滴定法测冻干品中氯化亚锡含量;并对该冻干品的稳定性进行考察。结果：制备得到白色粉末冻干品,该冻干品的99mTc标记率大于90%,Bradford法测定蛋白含量,在0.01~0.1 mg·m L-1范围内线性良好,平均回收率为96.6%,RSD为6.25%。该冻干品对高温敏感,但在加速实验下6个月和长期稳定性实验下12个月是稳定的。结论：制备工艺简单易行,稳定性好,质量可控。

摘要：目的 :在大肠杆菌中克隆表达牛生长抑素基因并初步纯化。方法 :根据牛生长抑素基因序列 ,按照大肠杆菌偏爱密码子设计合成 2个DNA片段 ,经退火、Klenow酶补平及连接反应 ,获得牛生长抑素基因片段 ;经PCR扩增、EcoRⅠ和BamHⅠ酶切 ,牛生长抑素基因被克隆在表达质粒 pALEX中。 结果 :将重组质粒转化BL2 1(DE3 ) ,经IPTG诱导获得表达。表达产物经超声破碎和GST Sepharose 4B亲和层析纯化获得重组蛋白。结论 :牛生长抑素基因得到了高水平表达并初步纯化 ,为表达产物的大量制备。

摘要：目的 :寻找和确定SARS病毒中高保守的蛋白 ,以指导针对这些高保守蛋白为药物靶的药物分子设计。方法 :采用比较基因组的方法和PSI Blast搜索方法分别探讨SARS病毒不同蛋白在冠状病毒属内部及在正链RNA病毒内的保守情况。结果 :确定了SARS非结构蛋白 ,特别是RdRp、Hel、nsP12、nsP13等蛋白在冠状病毒属内部表现很高的序列相似性 ,同时它们在正链RNA病毒范围内呈现不同程度的保守性。结论 :主要参与病毒的复制、转录及后处理过程的非结构蛋白RdRp、Hel、nsP12、nsP13的高保守性 ,表明与病毒扩增相关的基因调控机制的保守是病毒进化的重要特征 ;同时这些非结构蛋白的高保守性及功能重要性表明它们更适合作为有效的药物靶分子。

摘要：目的:在大肠杆菌中克隆和表达骨形态发生蛋白2(BMP2)的变体P6BMP2并初步纯化。方法:根据P6肽的氨基酸序列,按照大肠杆菌偏爱密码子将P6肽的核酸序列设计在5′端引物,通过PCR方法合成P6BMP2基因,并将其克隆到大肠杆菌表达质粒pALEX中,经NcoⅠ、XhoⅠ双酶切和DNA序列测定验证。结果:通过双酶切和DNA序列分析,证实获得的基因片段与我们期望的相符合,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导获得表达。表达产物经超声破碎和Heparin Sepharo-se TM6 Fast Flow亲和层析纯化,获得重组蛋白。结论:构建了P6BMP2的表达质粒,获得P6BMP2的表达并建立了纯化方式,为P6BMP2的深入研究和应用奠定了坚实的基础。

摘要：N-甲酰肽fMet-Leu-Phe(fMLP)是来源于细菌的化学趋向性小肽。已知fMIP是活化中性颗粒白细胞的强激活剂,因此阐明fMLP受体(FRP)结合fMLP的结构域对控制炎症的发生、中性白细胞在组织中的浸润具有重要意义。用改进的方法构建了FPR的5个嵌合体及2个突变体,并鉴定了他们结合fMLP的亲和性,取得以下结果:(1)和其他G蛋白偶联性受体不同,FPR的细胞外氨基端结构域(残基1～26)对fMLP结合的重要性不显著。(2)FPR在细胞外的3个环区(loop)对配体的结合是关键性的,其中环区1和环区3尤为重要。(3)FPR的跨膜结构域(TMD)中某些点突变能导致FPR不能和它的配体fMLP充分结合,表明FPR的跨膜结构域也参与对配体的结合。这些结果有助于设计新的FPR颉抗剂。

摘要：目的:在大肠杆菌中克隆和表达人源胸腺肽(thymosinβ4,TB4)基因并进行分离纯化及促血管生成生物活性鉴定。方法:人工设计TB4基因片段,其密码子为大肠杆菌所偏爱,将合成的寡核苷酸片段经分子克隆拼接成TB4基因片段,与pET28a(+)载体连接成重组表达质粒pET28a-TB4,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达带His6-Tag的融合蛋白His6-TB4,通过镍柱亲和层析纯化,采用SDS-PAGE分析鉴定,由CAM试验进行重组蛋白活性的生物活性鉴定。结果:经DNA序列分析鉴定,重组质粒pET28a-TB4构建成功,IPTG诱导后的融合蛋白His6-TB4在大肠杆菌中得到高效表达,并经一步镍柱亲和层析即获得纯化。CAM试验证明其有促进毛细血管生成的活性。结论:获得高效表达的、高纯度的His6-TB4融合蛋白,为TB4的进一步的功能分析和促血管生成生物活性研究奠定了基础。

摘要：以中性溶液(pH=7.0)为对照,研究了模拟酸雨(pH为2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0)胁迫对黑麦草(Lolium perenne)、高羊茅(Festuca arundinacea)、匍匐翦股颖(Agrostis palustris)和狗牙根(Cynodon dactylon)4种多年生草坪草种子萌发的影响。结果表明:酸雨胁迫对4种草坪草种子萌发的影响不同,pH=2.0的酸雨完全抑制了4种草坪草种子的萌发,表现为发芽率、发芽势、活力指数均为零。黑麦草、高羊茅种子能在pH≥2.5的酸雨胁迫下正常萌发,匍匐翦股颖种子能在pH≥3.0的酸雨胁迫下正常萌发,狗牙根种子在不同程度酸雨胁迫下均萌发不良。此外,酸雨胁迫还延缓了4种草坪草种子的萌发进程。应用主成分分析和隶属函数分析法对4种草坪草种子抗酸雨胁迫能力进行综合评定,得出4种草坪草种子抗酸雨胁迫能力由强到弱的顺序依次为高羊茅、黑麦草、匍匐翦股颖、狗牙根。

摘要：应用新的融合方法制备抗菌肽ＣＭＩＶ变体；了解重组型抗菌肽变体对几株临床耐药菌的抗性。通过基因工程的手段，将合成的抗菌肽ＣＭＩＶ的ｃＤＮＡ与根据金黄色葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）的ＩｇＧ结合结构域设计并合成的ＺＺ结构域基因融合，在大肠杆菌细胞中表达；用制备的ＣＭＩＶ变体进行抑菌圈试验和液相试验。结果表明５ｕｌ（１０ｕｍｏｌ／Ｌ）抗菌肽可在大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１平板上产生直径１５ｍｍ的抑菌圈；抑制５０％大肠杆菌生长的抗菌肽浓度约０．２ｕｍｏｌ／Ｌ。６种青霉素抗性的革蓝氏阴性菌的抑菌圈直径在６～１３ｍｍ之间；而同样的条件下，对革蓝氏阳性菌——金黄色葡萄球菌的作用很弱。用新的融合方法可通过大肠杆菌体系制备有活性的抗菌肽变体。

摘要：目的研究并明确肿瘤细胞膜纳米粒载药系统的体外应用价值。方法本实验设计并成功构建了一种新型肿瘤细胞膜纳米粒载药系统。该系统以肿瘤细胞膜为载体,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为内核,负载香豆素-6(Coumarin-6)作为荧光探针。在体外通过流式细胞仪及激光共聚焦成像分析并评价肿瘤细胞膜纳米粒(CNPs)及红细胞膜纳米粒(RNPs)、脂质体纳米粒(LNPs)在肿瘤细胞中的摄取差异。结果 CNPs可粘附到肿瘤细胞表面,且肿瘤细胞对CNPs摄取最多。结论肿瘤细胞膜纳米粒载药系统在肿瘤靶向递药领域具有应用前景。

摘要：测定R-hap在健康Wistar大鼠体内的组织分布,排泄及药动学参数。R-hap采用IODO-GEN标记,测定单次推注给药后^(125)I-R-hap的组织分布,尿、粪及胆汁的排泄情况。^(125)I-R-hap药动学参数也是在单次推注给药后测定。R-hap在体内广泛分布,在大部分器官中快速消除。其中肾的含量最高,脂肪的含量最低。累计排泄率为71.81%±2.15%(48小时)及94.71%±1.50%(120小时)。经尿排泄为主要的排泄途径,给药后120小时,尿及粪的累计排泄率分别为80.64%±1.47%,14.07%±0.95%。平均给药时曲线下面积为(8818.4±576.1)Bq/h/mL。R-hap的组织分布,排泄及药动学参数的结果为未来的临床试验设计提供了参考依据。