摘要：我们自行设计了一种无需运用近端吻合装置和侧壁钳，便可行近端吻合的方法，操作方便、经济实用、容易掌握、易于推广，可常规用于各种冠状动脉旁路移植术（CABG）的近端吻合，临床应用效果良好。

摘要：背景:为将鼠抗人cTnI单克隆抗体应用人体进行体内诊断或作为治疗心肌损伤的药物载体,必须降低鼠源性抗体的免疫源性,克服其人抗鼠抗体反应,需要对其进行人源化改造。目的:克隆鼠抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因并进行序列分析。设计:单一样本研究。单位:一所医科大学附属医院的心血管病研究所。材料:本实验于2003-01/2004-05在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。分泌鼠抗人cTnI单克隆抗体的杂交瘤细胞株(JS200202)由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI单抗的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析。主要观察指标:重链Fd段和κ轻链基因序列及其所属亚型。结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800bpDNA片段。经序列分析,与已发表的鼠IgG基因序列对比,其核苷酸及其所推导的氨基酸序列符合鼠IgG1Fab段特征。在GenBank登录,登录号为AY484430(重链),AY484431(轻链);氨基酸序列登录号为AAR83243(重链),AAR83244(轻链)。结论:本实验室获得了完整的鼠源性抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因,为鼠抗人cTnI单克隆抗体的人源化改造奠定了基础。

摘要：目的:回顾分析联合冠状动脉搭桥及其相关心脏手术的临床效果。方法:134例患者中,75.4％有Ⅲ-Ⅳ级心绞痛(CCSS),冠状动脉造影示梗阻性病变在左主干(LM)34例次、左前降支(LAD)130例次、对角支91例次、回旋支84例次、右冠状动脉80例次。伴有冠状动脉弥漫性病变41例。左室射血分数(LVEF)18%-69%,其中45％-30％ 50例,<30％ 13例,伴左心室壁瘤56例,同时伴瓣膜功能不全42例。全部患者均在体外循环下行冠状动脉搭桥手术,对36例伴有冠状动脉弥漫性病变者同期激光心肌打孔(TMR),同期左心室壁瘤切除三明治式缝合11例,巨大室壁瘤心内补片左室成形45例;同期心脏瓣膜手术42例。结果:人均旁路2.46支,6例患者需主动脉内球囊反搏(IABP)辅助11-54 h;二次开胸止血6例;室上速/房颤28例,室性心律失常10例,2例电转复,余均药物控制;全组手术死亡3例,死亡原因分别为严重低心排综合征(2例)和多脏器功能衰竭。其余病人手术后心绞痛等症状均缓解,心脏功能明显改善。随访4-60个月(平均12.7月),随访率89％,65例已恢复全日制工作。结论:与单纯冠状动脉搭桥相比,联合冠状动脉搭桥及其相关心脏手术时间长,操作复杂,但只要设计良好的手术方案,仍能取得满意的效果。

摘要：目的:等位基因特异性寡核苷酸杂交是基于分子杂交原理而建立的经典的突变检测方法,也是DNA芯片技术的重要组成部分,常用于突变筛查。实验拟建立一种适合快速大规模检测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T)的方法。方法:实验于2002-07/2004-06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所临床生物学诊断与治疗实验室完成。直接测序研究证实的具有cTnⅠ基因Arg145Trp突变的肥厚型心肌病患者2例,正常对照1名,受试者对实验均知情同意。自外周血白细胞抽提DNA,聚合酶链反应扩增心肌肌钙蛋白Ⅰ基因含有突变位点的外显子,点于硝纤膜上,分别在不同的温度条件(48,52,56℃)下再与生物素标记的突变及野生探针杂交,摸索最佳杂交条件。根据最佳杂交条件,分别在100倍浓度无关探针条件下行非特异性竞争杂交,在100倍浓度未标记的特异寡核苷酸探针条件下行特异性竞争杂交。结果:采用碱性磷酸酶标记的链霉亲和素和NBT/BCIP观察杂交结果:①突变及野生探针在48℃杂交时,除阴性对照外,2个患者及正常对照样本均见明显阳性信号。②在52℃及56℃条件下突变探针正确检出两个突变样本,但以56℃结果最佳。③100倍浓度无关探针杂交存在时,对生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果没有影响,2个患者样本均见明显阳性信号。100倍浓度未标记的突变寡核苷酸探针存在时杂交,完全抑制生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果。结论:所设计的寡核苷酸探针能够检测出肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T),适合该突变的快速大规模筛选。

摘要：背景:超声辐射微泡已被大量应用于临床心肌微循环诊断,其安全性已得到证实。研究显示超声靶向破坏微泡可以使骨骼肌毛细血管破坏和局部红细胞渗出,可以促进细胞穿过内皮生理屏障。目的:探讨超声辐射微泡是否可以增加骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的效果。设计、时间及地点:随机对照动物观察,于2006-10/2008-05在东南大学医学院完成。材料:2月龄中国家猪20只,随机分为超声微泡组12只,细胞对照组8只。超声微泡对比剂SonoVue,国药准字J20030117,为上海博莱信谊药业有限责任公司产品。方法:无菌条件下抽取猪骨髓液,密度梯度离心法分离纯化骨髓间充质干细胞。两组动物均建立急性心肌梗死模型,造模后14d,超声微泡组通过OTW球囊导管先把2.4mL超声微泡对比剂SonoVue经冠状动脉注入左前降支中段,同时在体表给予1MHz,2W/cm2超声辐射心肌梗死区,连续辐射90s后,再注入超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞5×106个;细胞对照组同法仅单纯输注骨髓间充质干细胞。主要观察指标:采用64层螺旋CT检查心功能变化,光镜观察心肌组织学检测结果,电镜观察血管内皮细胞超微结构。结果:与移植前1d比较,移植后6周两组左心室射血分数均明显增加,且超声微泡组增加幅度高于细胞对照组(P<0.01)。与细胞对照组比较,超声微泡组普鲁士蓝阳性细胞数明显增多(P<0.01),且多数分布于心肌梗死周边区,有2例标本可见普鲁士蓝阳性细胞分化为新生血管内皮细胞;梗死周边区毛细血管密度明显升高(P<0.05)。两组心肌血管内皮细胞超微结构无差异,但移植后0h超声微泡组可见血管内皮间隙增宽。结论:超声辐射微泡可促进梗死心肌内猪自体骨髓间充质干细胞的移植,促进心肌血管新生,从而改善因心肌梗死而受损的心功能。

摘要：目的:利用聚合酶链反应定点突变技术构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体。方法:实验于2005-03/06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。选择南京医科大学第一附属医院体检中心健康体检者血标本提取人基因组DNA,设计、合成两对引物,将突变位点设计在引物内,突变位点包含限制性内切酶BseNI酶切位点,采用聚合酶链式反应定点突变技术,应用高保真TaqDNA聚合酶,通过三轮聚合酶链扩增反应对血小板反应素1基因的第13外显子进行扩增,将第13外显子碱基8831A置换为G,对最终扩增产物进行酶切鉴定和测序。结果:获得人血小板反应素1第13外显子编码钙结合域突变体,经酶切鉴定和测序分析,除引入突变点产生预期A8831→G突变外,其余碱基序列无改变。结论:采用聚合酶链反应体外定点突变技术,成功构建人血小板反应素1基因第13外显子编码钙结合域突变体,为研究血小板反应素1基因该位点突变导致血小板反应素1蛋白的结构、功能变化奠定了基础。

摘要：背景:在多种移植细胞中,成体自身骨髓单个核细胞以其取材简便、无排异反应、无伦理学争议等优势成为具有临床应用价值的细胞来源。干细胞移植后,如何从受体辨别供体细胞,并观察其在受体中的生存状况,一直是让人困扰的问题。目的:应用超顺磁性氧化铁颗粒标记小型家猪骨髓单个核细胞,观察磁共振成像示踪磁探针标记细胞的可行性。设计:对照观察实验。单位:东南大学附属中大医院心血管病研究所。材料:实验于2006-04/2006-08在东南大学心血管病研究所完成。健康中国小型雄性家猪,三四月龄,体质量20～30kg,由东南大学实验动物中心提供(SYXK(苏)2002-0012)。方法:分离培养小型家猪自体骨髓单个核细胞,采用超顺磁氧化铁颗粒对骨髓单个核细胞分离当日细胞悬液中进行标记,普鲁士蓝染色显示细胞内铁,台盼蓝拒染法评估细胞活力。将11只用于心肌梗死模型制备的猪分为实验组9只和对照组2只。选择经皮行左或右颈动脉或股动脉穿刺途径,以1.5～2.0mm球囊封堵左前降支下1/3,304～405kPa,持续封堵60min后,术前反复予缺血预适应三四次。由猪体表心电图证实心肌梗死模型成功后,经皮冠脉内骨髓单个核细胞输注:梗死模型建立24h后,经皮股动脉穿刺行冠脉造影,应用OTW导管冠脉内输注骨髓单个核细胞细胞悬液,然后将盛放细胞的注射器及OTW导管以肝素生理盐水冲洗注入残余细胞,注射时间10min,对照组2只猪经同样方法注入未标记细胞。术后磁共振活体示踪骨髓单个核细胞并与心肌组织切片普鲁士蓝染色对照。结果:实验组7只和对照组1只小型家猪进入结果分析,两组各1只死于心肌梗死模型制备,实验组1只死于磁共振检查前麻醉意外。①骨髓单个核细胞的超顺磁氧化铁颗粒标记率近100%,在含Fe2O3-多聚左旋赖氨酸的培养基中骨髓单个核细胞可继续增殖,细胞形态无明显变化。②8只心肌梗死模型中,5只标记细胞移植后T2*WI序列心肌梗死周边见模糊的低信号区,4周后低回声信号均消失,离体T2*WI序列示梗死区周边一个呈点状分布的低信号区。③组织学检查发现5只(细胞数106以上)普鲁士蓝细胞阳性,分布部位与磁共振信号减低区一致。结论:超顺磁氧化铁颗粒标记骨髓单个核细胞安全、有效;T2*WI对磁标记骨髓单个核细胞的示踪最敏感;磁共振可对经冠脉途径植入的磁标记的干细胞进行活体示踪,磁共振信号改变与干细胞数目及分裂增殖状态相关。