摘要：为了建立濒危植物黑牡丹的KASP鉴定方法,选取6种13份岩牡丹属植物样品为材料,根据磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因上的单核苷酸多态性(SNP)位点,设计黑牡丹特异性KASP引物,用于PCR扩增。结果表明,通过PEPC序列的SNP位点所设计的KASP引物可以在黑牡丹与其近似种之间形成明显的基因分型,能够将其与同属近缘种及其他仙人掌科物种准确地区分开来,可用于黑牡丹的真假鉴定及进出境口岸濒危物种的查验鉴定。

摘要：检疫性杂草糙果苋(Amaranthus tuberculatus)与同属其他种的鉴别一直是个难点。本研究建立糙果苋的KASP(Kompetitive allele-specific PCR)检测方法,可用于糙果苋快速、准确的分子鉴定。提取11种23份苋属植物的DNA后,根据长芒苋(Amaranthus palmeri)核基因组序列,设计引物AP4F和AP4R,通过序列扩增和比对,发现糙果苋有特异性SNP (Single nucleotide polymorphism)位点。利用引物设计软件Primer 5设计了用于鉴定糙果苋的KASP反应引物。结果表明,特异引物基于KASP技术扩增后,可以形成明显的基因分型,能将糙果苋与同属近缘种进行区分。该研究为进口粮谷中糙果苋的检测鉴定提供了新技术。

摘要：为探索16S rRNA基因条形码技术在濒危脊椎动物物种鉴定中的可行性,选取脊椎动物线粒体16S rRNA基因中长度为286 bp的片段设计通用引物,以哺乳纲(Mammalia)、爬行纲(Reptilia)、两栖纲(Amphibia)、软骨鱼纲(Chondrichthyes)和辐鳍鱼纲(Actinopterygii)中24科、28属、40种共71个濒危脊椎动物样本为研究对象,进行PCR扩增并对扩增产物进行纯化、测序和基因序列分析。结果显示:建立的检测方法灵敏度可以达0.001 ng/μL,其中62个(39个物种)样本扩增成功,57个样本(34个物种)测序结果与GenBank数据库中的参考序列具有较高相似度,可以鉴定到种的水平。测序所得的基因序列与参考序列的种内遗传距离为0~0.5%、种间遗传距离为1.0%~39.9%,最小种间遗传距离大于最大种内遗传距离,即存在明显的条形码间隔;另外5个样本(5个物种)测序结果在属内种间高度一致,只能鉴定到属的水平。基于16S rRNA基因片段构建的条形码可对濒危脊椎动物进行种属鉴定,可为濒危物种保护、打击非法走私等提供技术支撑。

摘要：众所周知,食品安全已经成为一个世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题,食品安全检测技术与经济的健康发展有着紧密的联系.随着我国进口食品贸易量快速增长以及消费者对进口食品安全要求日益提高,行业对食品质量安全检测技术、材料及设备提出了更高要求.为此,在江苏省科技计划项目"基于量子点印迹传感器的设计、制备及其对水环境中痕量磺胺类药物的识别性能与机理研究"(项目编号:BK20151323)、南京海关重点研究项目"用于常见生物毒素及动物用药检测的新型化学发光试剂盒的研究与应用"(项目编号:2015KJ25)等支持下,南京海关动植物与食品检测中心联合张家港海关综合技术中心、镇江海关综合技术中心,开展了"食品质量安全检测关键技术创新和新材料新设备集成应用研究".项目聚焦食品检测中最为突出的质量安全关键控制点进行系统研究,以新材料、新设备研发为保障,高通量快速筛选特异指标确证体系为依托,集成运用多谱融合技术进行系统深入的研究,为我国食品的生产、加工以及进口食品的风险控制提供新思路与技术支持.

摘要：大豆南方茎溃疡病是一种世界上危害严重的大豆病害,其病原菌(Diaporthe aspalathi)被列入我国进境植物检疫性有害生物名录。本文基于ITS序列差异设计引物和探针,建立了D. aspalathi常规PCR和荧光PCR检测方法。测试结果表明,常规PCR引物DM-F/DM-R3扩增33个供试菌株,6个D. aspalathi菌株出现394 bp的预期扩增条带,其余供试菌株均无目的条带,检测灵敏度为5 pg菌丝体DNA。探针DM-Pro仅对6个D. aspalathi菌株表现为阳性,其余供试菌株均为阴性,检测灵敏度为500 fg菌丝体DNA。同时,采用这两种方法对进境大豆种子及植株残体等样品进行了验证。以上结果表明,这两种检测方法具有快速、准确、灵敏等优点,可应用于口岸对大豆南方茎溃疡病菌的检疫鉴定及疫情监测。

摘要：母乳是婴幼儿最佳的天然食物,对于无法获得充足母乳喂养的婴幼儿来说,母乳化婴幼儿配方奶粉是替代母乳的首选食物。母乳中的活性营养成分是增强婴幼儿免疫力、促进其生长发育等需求的关键,关于其在母乳中的含量、变化趋势以及对婴幼儿生长发育产生有益效应的作用机制是近年来的研究热点,这些研究成果是开展婴幼儿配方奶粉母乳化的基础。本文综述以乳铁蛋白、唾液酸、二十二碳六烯酸、母乳低聚糖、骨桥蛋白、免疫球蛋白等为代表的活性营养成分在婴幼儿免疫系统发展和脑发育中的研究进展,拟为婴幼儿配方奶粉的配方设计提供依据。

摘要：由丁香假单胞菌豌豆致病变种引起的豌豆细菌性疫病可引起寄主植物花梗、花和豆荚等萎蔫枯死,导致植株猝倒,对产量影响较大。目前在世界各豌豆重要生产区广泛发生并严重危害,至今尚无有效防治措施。为防范该病菌随着豌豆进口传入我国,需要提高对该病菌的认识,研制更加快速、高效的检测方法。丁香假单胞菌豌豆致病变种与适合致病变种等9个致病变种组成基因型Ⅰ。根据丁香假单胞菌豌豆致病变种与不同豌豆品种致病性的不同,该变种又可分为8个生理小种。利用该病菌特异性片段设计的引物进行PCR扩增产物的不同,可将上述8个生理小种分为2个系统发育群。目前,对该病菌的鉴定主要通过常规的生理生化方法和环介导等温及多位点序列分析等分子生物学方法。上述检测方法存在检测周期长、检测效率低,且不能快速区分阳性结果是否来源于病原菌活细胞或死细胞等问题。可通过探索建立实时荧光PCR和数字PCR检测方法,来实现快速准确鉴定目标菌种,并对供试菌株的活性进行鉴定的目标。

摘要：[目的]通过设计特异性引物与荧光探针,建立马达加斯加龙树(Didierea madagascariensis)实时荧光定量PCR鉴定方法。[方法]提取26份龙树科植物基因组,并用内源基因检测DNA质量;根据GenBank中已发表的马达加斯加龙树的PEPC基因序列,设计特异性引物与荧光探针,通过检测26份供试样本,检测该方法的特异性;将样品DNA进行10倍梯度稀释,以检测实时荧光定量PCR方法的灵敏度。[结果]只有3份马达加斯加龙树样本出现典型的扩增曲线,其他23份龙树科植物无典型的扩增曲线;核酸原液与10^(-1)~10^(-4)倍稀释液样本均能够得到典型扩增曲线,标准曲线的决定系数(R^(2))为0.995,检测限量为5.2×10^(-3) ng/μL。[结论]该方法特异性强、灵敏度高,可有效地应用于马达加斯加龙树的鉴定。

摘要：微流控芯片是可以把待分析样品的前处理、反应、分离、检测和收集等基本操作集成到一体的微全分析系统。微芯片因其在微尺度下进行反应的各项过程,具有消耗样品量少,耗费时间短、效率高、成本低等优势,引起了研究者的广泛关注。本文设计了基于酶促免疫反应的微流控芯片,开发了集成化、小型化的快速检测设备,进行快速提取、反应,以神经氨酸酶作为检测靶标,可用于相关呼吸道传染病的快速检测,该设备具有设备轻巧、高度稳定、高度灵敏和特异性高等优点。

摘要：[目的]为完善我国转基因检测方法体系,建立转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,PCR)检测方法。[方法]根据MON87751的3′端邻接区序列设计特异性引物和探针,建立MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法,并测定该方法的灵敏度、特异性及可重复性。[结果]灵敏度测试显示,其定量下限为40拷贝;重复性试验显示其相对标准偏差在可接受范围内。[结论]该研究建立的MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法特异性良好,灵敏度高,有良好的可重复性,适合对转基因大豆MON87751品系进行检测鉴定。