摘要：目的为了研制Daxx-C抗体并观察其在宫颈癌细胞中的应用效果,构建原核表达载体pET28a/DM626-740,将其在大肠杆菌中进行诱导表达,纯化表达产物,鉴定其抗原性。方法用PRIMER5.0软件设计Daxx-C基因片段(氨基酸626-740)特异性引物,引入BamHI和SalI酶切位点,PCR扩增目的基因。将PCR产物连入载体pMD18-T,构建pMD18-T/DM626-740;然后,将BamHI和SalI酶切产物连入载体pET28a,经酶切鉴定及DNA序列分析后,构建原核表达载体pET28a/DM626-740。将其转化*** BL21,IPTG诱导表达,利用Ni琼脂糖凝胶层析柱纯化表达产物,Western-blot检测表达物与纯产物。结果双酶切和DNA测序结果显示,PCR正确扩增了Daxx-C基因片段并成功连入载体pET28a,构建了原核表达载体pET28a/DM626-740;该质粒在***中诱导表达分子量约19kDa目的蛋白,且该蛋白能被抗Daxx抗体检出。结论构建的原核表达载体pET28a/DM626-740能在***中表达目的的蛋白6His-DM626-740,并具有良好的抗原性。

摘要：优抚医院作为一类特殊的医疗机构,在改革过程中存在着改革任务艰巨、缺乏经验基础的问题。基于国企医院和优抚医院二者的改革共性,梳理分析国企医院转制为大学附属医院这一改革路径下所采取的有益发展措施,开展新时期优抚医院改革的理论研究及实践探索。从顶层设计、学科建设、综合管理等方面提出针对性策略,以期为其他优抚医院平稳渡过改革过渡期提供参考。

摘要：目的 构建耐辐射奇球菌prM基因缺失回补菌株,为进一步研究PprM蛋白的功能奠定实验基础.方法 设计并合成HA-pprM基因（HA为流感病毒血凝素）全长的引物,以无突变的pGEX-6p-1-pprM载体为模板,PCR扩增出携带NdeⅠ酶切位点的HA-pprM基因全长,经NdeⅠ酶切后,与pRADK载体连接并转化大肠杆菌,经培养、提取质粒及纯化后,采用酶切鉴定以及基因测序方法确认插入序列的正确性;采用CaC12法将构建好的重组质粒pRADK-HA-pprM转化到耐辐射奇球菌pprM基因缺失的菌株中,通过Western blot验证HA-PprM融合蛋白的表达.结果 构建的重组质粒pRADK-HA-pprM经NdeⅠ酶切鉴定结果符合目的条带大小（438 bp）,测序结果显示插入的寡核苷酸序列及方向与预期的一致,Western blot结果显示HA-PprM融合蛋白的相对分子质量约为13 000.结论 笔者成功构建了重组质粒pRADK-HA-pprM,为进一步研究与PprM蛋白相互作用的靶DNA的筛选奠定了良好的基础.

摘要：人力资源配置一直是公立医院运营管理的难点所在,如何在顺应医改要求的同时,建立符合医改要求的"优质、高效、低耗"型医院人力资源管理体系,岗位编制管理是基础。笔者从邵阳市中心医院创新岗位编制管理实践入手,阐述了依据组织结构的不同,建立相应的岗位编制测算模型,其中临床科室建立"基于编制床位数配比模型"、"基于医护一体化配比模型";在门诊医技科室建立"基于工作量的医技人员配比模型";在行政后勤部门建立"基于岗位工作量的行政后勤人员配比模型",以及这些模型运行后取得的实际效果。

摘要：目的通过饲喂高脂饲料建立高血脂小鼠模型,并给予血清鸢尾素(Irisin)处理,探索Irisin对小鼠血脂水平的影响,为Irisin的临床应用提供依据。方法 24只8周龄雄性昆明小鼠,采用完全随机设计,根据随机数表法分为三组,每组8只:普通膳食对照组[普通饲料+磷酸盐缓冲液(PBS)]、高脂膳食模型组(高脂饲料+PBS)和Irisin干预组(高脂饲料+0.125 ng/kg Irisin,用等量PBS溶解)。饲养2周,记录体质量,同时Irisin干预组每周给予2次尾静脉注射Irisin处理,最后一次处理后隔夜取血,用甘油三酯(TG)试剂盒、总胆固醇(T-CHO)试剂盒和高密度脂蛋白(HDL-C)试剂盒检测小鼠的血脂变化水平。结果实验结束后,高脂膳食模型组中小鼠体质量达(42.28±1.27)g、血清TG含量为(0.86±0.21)mmol/L、T-CHO含量为(6.79±0.86)mmol/L,HDL-C含量为(6.18±0.85)mmol/L,分别与普通膳食对照组的(40.65±1.26)g、(0.69±0.10)mmol/L、(3.25±0.54)mmol/L和(8.49±1.69)mmol/L比较差异均有统计学意义(P<0.05);Irisin干预组小鼠的体质量为(40.54±1.34)g,而血清中TG和HDL-C含量分别为(0.59±0.10)mmol/L和(8.03±1.54)mmol/L,与高脂膳食模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清Irisin对小鼠血脂代谢水平有显著改善。

摘要：目的:探讨p38MAPK基因对PM_(2.5)染毒人肾上皮细胞(HK-2)部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法:根据GenBank提供的p38MAPK mRNA序列,设计合成干扰序列,将重组慢病毒载体转染HK-2细胞,构建p38MAPK基因沉默细胞株。分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法检测p38MAPK mRNA和蛋白的表达水平鉴定沉默效果。用50μg/mL的PM_(2.5)混悬液分别染毒正常HK-2细胞和p38MAPK基因沉默细胞24 h,利用荧光定量PCR和Western blot检测癌基因c-myc,c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平。结果:qPCR和Western blot检测结果显示,与正常HK2细胞比较,p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK mRNA的表达下降了58.50%,p38MAPK蛋白表达水平下降了51.33%(P<0.01)。PM_(2.5)混悬液对HK-2细胞和p38MAPK基因沉默HK-2细胞染毒后,qPCR检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_(2.5)染毒组中c-myc、c-fos、Caspase-8和Casepase-9基因表达分别升高39.89%、15.12%、19.47%和15.45%,p53和Bcl-2基因表达分别下降21.54%和31.77%,差异均具有统计学意义(P<0.05);与正常HK-2细胞PM_(2.5)染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_(2.5)染毒组中c-myc、c-fos、p53、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达分别下降了84.55%、63.55%、34.49%、37.19%和54.97%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_(2.5)染毒组中的c-myc和Caspase-8蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;与正常HK-2细胞PM_(2.5)染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_(2.5)染毒组中的c-myc、Caspase-8和Bcl-2蛋白表达减少(均为P<0.05)。结论:成功构建了p38MAPK基因沉默细胞株,PM_(2.5)可引起HK-2细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平升高,p38MAPK基因可能参与PM_(2.5)对HK-2细胞的毒性作用过程。

摘要：目的:探讨沉默c-fos基因对PM2.5染毒人支气管上皮细胞(HBE细胞)癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法:采用RNA干扰技术,根据GenBank提供的c-fos mRNA序列,设计合成shRNA干扰序列,将重组慢病毒载体转染HBE细胞,构建c-fos基因沉默细胞株。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot对c-fos基因沉默效果进行鉴定。以HBE细胞、c-fos基因沉默细胞为实验对象,用浓度为50μg/mL的PM2.5混悬液染毒24 h,同时设立阴性对照组,qPCR和Western blot分别检测部分癌基因c-myc、k-ras、c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8在mRNA及蛋白质表达水平的变化。结果:转染c-fos-shRNA慢病毒的HBE细胞中,经qPCR和Western blot检测发现,与对照组HBE细胞相比,c-fos m RNA表达水平下降70.1%,c-fos蛋白表达水平下降53.7%。PM2.5染毒HBE细胞后,与未染毒的对照组比较,c-myc和k-ras mRNA表达水平分别升高30.46%、27.17%,差异均有统计学意义(P<0.05),c-fos、Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别升高50.78%、71.91%、74.16%,p53 mRNA表达水平下降12.27%,差异均有统计学意义(P<0.01)。PM2.5染毒c-fos基因沉默细胞后,与未染毒组比较,c-myc、k-ras mRNA表达水平分别下降13.08%、5.39%,Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别下降25.03%、21.37%(P<0.05),p53 mRNA下降53.39%(P<0.01)。此外,c-fos基因沉默细胞染毒后,与HBE正常细胞染毒后比较,c-myc、k-ras、p53、c-fos、Caspase-3和Caspase-8的mRNA表达水平均有所下降(P<0.05);仅c-myc蛋白表达下降(P<0.01)。结论:成功构建c-fos基因沉默细胞株;PM2.5可引起HBE细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平明显升高,c-fos基因沉默在一定程度上能抑制PM2.5对癌基因和凋亡相关基因的激活作用。

摘要：学校突发公共卫生事件(School public health emergency,SPHE)一直是导致学校安全危机的重要因素。但以往其策略研究与实施,注重或凸出外部干预,至今缺乏对学校突发公共事件宿主的自我干预策略系统研究,以致仍不能系统构建学校突发公共卫生事件有效防控体系。

摘要：目的了解富藻水源在二氧化氯(Cl O2)及氯(Cl2)消毒时的副产物及其肝损伤风险,为藻污染的饮用水源健康危害防控提供依据。方法在不同藻密度下进行Cl O2及Cl2联合消毒,参照GB/T 5750.10-2006《生活饮用水标准检验方法》检测CHCl3及Cl O-2、Cl O-3的含量。对ICR小鼠进行随机对照分组,综合参照常规药理实验方法及霍恩氏法进行剂量设计,分别灌胃进行短期重复剂量毒性实验,以生理盐水对照组、藻毒粗提物(染毒剂量3 g/d,其他组藻剂量相同)、藻液+Cl O2(Cl O2为21.5 g/kg,其他组Cl2与Cl O2总剂量相同)、藻液+Cl O2+Cl2(Cl O2:Cl2=1:1)、藻液+Cl O2+Cl2(Cl O2:Cl2=4:1)进行连续染毒7 d,计算肝脏器系数;利用试剂盒检测肝脏丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD含量。结果当藻密度在109个/L,有机及无机副产物含量均提高。藻单独染毒组引起肝脏系数及组织MDA增加(P0.05),藻液+Cl O2+Cl2(Cl O2:Cl2=1:1)联合染毒组肝脏系数增加。结论 Cl O2消毒时采用联合消毒工艺具有较好的安全性,但藻密度过高时,二氧化氯-氯联合消毒的工艺依然需要合理使用。

摘要：目的:克隆耐辐射球菌ddrO基因,并对其进行生物信息学分析,预测其功能。方法:根据耐辐射球菌ddrO基因序列,由Primer Premier 5设计一对引物,以提取的耐辐射球菌基因组为模板,PCR扩增获得耐辐射球菌ddrO基因,序列测定并利用生物信息学软件对ddrO基因的理化性质、高级结构及生物学功能等进行分析与预测。结果:成功获得了ddrO基因。生物信息学分析发现,ddrO基因核苷酸序列长度为396bp,编码一个131aa组成的相对分子质量为14.993kD的预测的DdrO转录因子。核酸同源性搜索及比较分析仅在与耐辐射球菌同属的Deinococcus geothermalis和Deinococcus deserti中发现高度相似的序列;蛋白同源性搜索发现一些与DdrO显著同源的蛋白,如Deide_20570(95%),Dgeo_0336(90%),Deide_3p02170(82%)等;结构域分析发现DdrO含有HTH(helix-turn-helix)DNA结合结构域。结论:根据生物信息学结果预测DdrO蛋白可能具有转录调控作用,参与DNA修复和复制,在耐辐射球菌的DNA损伤修复过程中发挥一定作用。