摘要：目的:以Smad4基因为靶标构建小干扰RNA(siRNA)真核表达载体。方法:根据GenBank公布的人Smad4核酸序列及SiRNA设计原则,用AmbionRNAi在线软件,筛选得到2个19bp片段为靶序列,合成两端带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆到真核表达质粒pSilencerTM3.1-H1neovector中,构建成重组质粒,酶切及测序验证。脂质体介导转染人原代增生性瘢痕成纤维细胞,经G418筛选细胞克隆,并用RT-PCR检测Smad4基因的表达。结果:成功构建了pSilencerTM3.1-H1neo-Smad4shRNA表达载体克隆,插入片段测序结果与合成的siRNA序列一致。RT-PCR结果显示转染shRNA1、shRNA2重组质粒的成纤维细胞内Smad4 mRNA水平均降低,其中以pSilencerTM3.1-H1-Smad4 shRNA1更为明显(P<0.01)。结论:构建p-Smad4 shRNA表达载体成功,为进一步研究Smad4基因的RNA干扰奠定了基础。