摘要：目的　为将RNA干扰技术深入应用到血液肿瘤做铺垫 ,体外化学合成bcl 2小干扰RNA(small interferenceRNA ,siRNA)及si PORT脂质体转染siRNA至细胞HL 6 0的鉴定。方法　通过互联网从GenBank获得人bcl 2mRNA全序列 ,经扫描bcl 2mRNA的全序列记录AA及下游 19个核苷酸肽并与基因组数据库比较去除与其它基因有高度同源性的序列 ,选取距离AUG启动子约 30个核苷酸以后的靶序列作siRNA模板的设计 ,且GC含量控制在 30 %～ 6 5 %之间。选择了三条序列作为我们实验设计的靶序列并由靶序列设计合成出它们的正、反义寡核苷酸肽模板。由化学合成试剂盒体外合成双链bcl 2siRNA ,纯化并定量后用Cy3红色荧光标记 ,利用脂质siPORT转染试剂将bcl 2siRNA转染入HL 6 0细胞 ,转染 4 8h后收集并固定细胞 ,荧光显微镜下观察转染结果。结果　纯化的siRNA经 2 %琼脂糖凝胶电泳证实其长度为 2 1bp ,说明bcl 2siRNA被成功合成。转染Cy3标记的siRNA 4 8h后的细胞荧光显微镜下经绿色光激发可见较亮的深红色荧光 ,而未转染bcl 2siRNA的细胞仅有微弱的红色自发荧光。结论　体外成功化学合成bcl 2siRNA ,LipidsiPORT转染试剂能将bcl 2siRNA成功转染入白血病细胞HL 6 0中。

摘要：目的利用高保真聚合酶介导的突变敏感性分子开关联合琼脂糖凝胶电泳,建立对肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变进行快速筛查的技术平台。方法应用PCR反应扩增包含MYH7基因Ala26Val突变区域的基因序列,通过基因克隆技术与反向PCR体外定点突变技术,分别得到MYH7基因Ala26Val突变的野生模板与突变模板,并通过基因测序分析进行确证。设计与Ala26Val突变位点配对及三末端不配对的3′硫化修饰正向引物,在其下游设计一条反向引物,分别构成野生引物对与突变引物对,进行高保真DNA聚合酶介导的双向引物延伸反应,利用凝胶成像系统对其PCR结果进行分析。结果当突变引物对与突变模板配对时,引物被延伸,有PCR产物;与野生模板不配对时,引物却不能被延伸,无PCR产物。同样,野生引物对只有与野生模板匹配时得以延伸,而与突变模板不匹配时则不能延伸。结论高保真DNA聚合酶偶联硫化修饰引物构成的突变敏感性分子开关能够快速筛查肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变,达到非此即彼的二元化效果,该分子开关在肥厚性心肌病基因筛查中具有巨大的潜在应用价值。