摘要：目的建立HPA-1-28w基因分型检测技术体系并用以研究广西瑶族和汉族人群的血小板抗原(HPA)-1-28w基因多态性。方法通过设计序列特异性引物和优化PCR反应条件,摸索HPA-1-28w基因分型检测技术体系,其组成包括前期已建立的HPA-1-17w多重PCR-SSP技术和新研发的HPA-18-28w PCR-SSP方法 2部分组成。使用10例已预先测序确定HPA-18-28w基因型和20例已预先使用商品试剂盒检测HPA-18-21w基因型的本研究广西瑶族标本,对新研发的HPA-18-28w PCR-SSP方法做验证。应用所建立的HPA-1-28w基因检测技术对广西地区无血缘关系的1424名健康瑶族人和908名健康汉族人做HPA-1-28w基因分型和多态性分析。结果所建立的HPA-1-28w基因分型技术系统,不仅对HPA-18-28w基因的分型结果与对验证用标本的测序分型结果完全一致,而且对HPA-18-21w基因的分型检测结果与商品试剂盒的分型结果完全一致。广西瑶族人群的HPA各等位基因频率分别为:HPA-1a 0.998 2、1b 0.001 8,2a 0.874 6、2b 0.125 4,3a 0.661 5、3b 0.338 5,5a 0.996 8、5b 0.003 2,6a 0.9786、6bw 0.021 4,15a 0.407 7、15b 0.592 3;汉族人群HPA各等位基因频率分别为:HPA-1a 0.998 3、1b 0.001 7,2a0.957 6、2b 0.042 4,3a 0.532 5、3b 0.467 5,4a 0.999 4、4b 0.000 6,5a 0.984 0、5b 0.016 0,6a 0.989 0、6bw 0.011 0,15a 0.534 1、15b 0.465 9;广西瑶族和汉族人群的HPA-7-14w、HPA-16-28w基因均以aa纯合子形式存在。在本组广西瑶族人群中发现2例罕见的HPA-6bb纯合子基因型个体,而在汉族人群中发现了1例中国人群中罕见的HPA-4ab基因型个体。结论建立了完善的HPA-1-28w PCR-SSP基因分型检测技术体系,并成功应用于广西瑶族和汉族人群的HPA-1-28w基因筛查和分型研究;广西瑶族、汉族人群HPA基因频率分布在HPA-2,-3,-5,-15系统和HPA-6w等均不同(P<0.05),藉此有助于了解广西瑶族和汉族人群HPA的免疫学特点。

摘要：目的建立应用于HPA-1—17bw基因分型的多重聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术，对广西壮族人群HPA名态性分布进行调查。方法设计多种HPA序列特异性引物的组合，在1个PCR反应体系中用时扩增多个HPA基因，根据扩增片断的有无和大小，指定相应的HPA基因型，并以17例国际合作研究项目提供的HPA对比DNA配组标本，以及100例已知HPA型的血小板供者的DNA标本作验证。使用验证后的技术对2659例无血缘关系的广西牡成人群展开HPA-1—17bw的基因分型和抗原多态性研究。结果建立了由16种PCR引物混合物，其中有6种多重PCR多重PER引物混合液组成的PCR—SSP反应体系，可用于HPA-1～17bw等位基因的检测。以HPA参比DNA配组标本，以及已知HPA型的供者的DNA标本的检测作验证，HPA分型结果完全一致；在2659名广西壮族人群中各HPA等位基因频率分布为：HPA—1α和-16为0．9915和0．0085，HPA．2a和．26为0．9569和0．0431，HPA-3α和-3b为0．5122和0．4878，HPA-5α和-56为0．9850和0．0150。HPA．6a和-66为0．9851和0．0149，HPA-15α和-15b为0．5256和0．4744；HPA-4、HPA-7-14bw、HPA-16—17bw只有a／a的纯合子；HPA-2—3、HPA，6船以及HPA．15均存在a／a和b／b纯合子基因型个体。结论多重PCR-SSP技术应用于HPA基因分型减少了PCR扩增反应数量，节省了人力、物力，HPA分型系统性强，可用于大量标本的HPA-1—17bw基因分型等研究和筛查工作；应用该方法研究证明广西壮族人群HPA多态性分布具有民族特征，有助于对壮族人群血小板免疫学特点的了解。

摘要：目的设计和建立适合南宁地区人群的HLA、HPA已知基因型血小板供者资料库,为免疫性PTR和血小板减少症患者的治疗提供保障。方法以4 243名无血缘关系的南宁地区健康供者为对象,研究和分析南宁地区人群HPA基因多态性,以7 001名南宁地区骨髓库供者的HLA基因分型检测数据,分析这些供者的HLA-A,-B基因多态性,并以此为数据基础,预测所建立血小板供者资料库的库容。以预测的最佳库容为设计目标,建立南宁地区HLA、HPA已知型血小板供者资料库。供者的HPA-1—17w,HLA-A,-B基因分别使用PCR-SSP、PCR-SSO等基因分型方法。结果根据对南宁地区人群HPA-1—17w(n=4 243)和HLA-A,-B(n=7 001)基因多态性研究分析,计算推导得到当血小板供者资料库库容为283人时,约有95%的患者能在该库中找到≥1名HPA-1—17w基因型全匹配的供者;当血小板供者资料库库容为819人时,约有80%的患者能在该库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者;当血小板供者资料库库容为1 781人时,约有90%的患者能在该库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者,如果需要考虑ABO同型血小板输注时,则按人群的ABO血型分布频率将该库容量做相应测算和列出各自库容量的变化。目前所建立的南宁地区HLA、HPA已知基因型血小板供者资料库,包含1 072名献血者数据,按本研究设计的最佳库容量预测方案评估,在不考虑ABO同型的情况下,约98. 58%患者能在该资料库中找到≥1名HPA基因型全匹配的供者,约83. 49%患者能在该血小板供者资料库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者。结论本研究为血小板抗原和/或抗原基因已知型血小板供者资料库的建立提供了设计思路,并已建立了适合南宁地区人群的含1 072名HLA和HPA献血者已知基因型的血小板供者资料库。