摘要：目的研究ADP核糖基化因子6(Arf6)对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其可能的分子作用机制。方法设计合成3条针对不同靶向区域的Arf6特异性si RNA序列,转染细胞后通过real-time PCR和蛋白质印迹法检测其对Arf6的干扰效果,筛选出干扰效果最佳的si RNA序列;通过噻唑盐(MTT)实验、划痕实验、及transwell细胞迁移和侵袭实验观察si RNA干扰Arf6表达对PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹法检测AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2和Rac1蛋白表达水平的变化。结果与空白对照组相比,转染阴性对照序列对PC-3细胞内源性Arf6的m RNA和蛋白表达水平无明显影响,3条si RNA序列均能抑制Arf6的表达,其中si RNA-3对PC-3细胞Arf6表达干扰效果最好,Arf6m RNA和蛋白抑制率分别为(91.88±3.13)%和(86.37±0.57)%。si RNA-3干扰Arf6表达抑制PC-3细胞的增殖,且PC-3细胞体外迁移距离和侵袭细胞数较空白和阴性对照组明显减少(P<0.05)。蛋白质印迹法检测发现转染si RNA-3的PC-3细胞p-ERK1/2和Rac1表达水平明显降低,而AKT、p-AKT和ERK1/2表达水平较对照组差异无统计学意义。结论 si RNA干扰Arf6表达可显著抑制PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其分子作用机制可能与p-ERK1/2和Rac1表达下调相关。

摘要：目的对美容卡环的固位力进行测量与比较,为义齿卡环设计获得最佳临床效果提供依据。方法采用离体前磨牙左右各10个,分成10组作为实验模型,制作美容卡环、RPI卡环、Y型卡环并进行固位力的测试、比较分析。结果所得数据经统计软件分析,RPI卡环>美容卡环>Y型卡环。结论美容卡环固位力的均值(7.5N)达到正常值标准,为活动义齿金属卡环外露不美观提供了最佳解决方法。

摘要：目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对肾癌细胞株786-0细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法以ezrin为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体设计和构建重组体,设计2条发夹式RNA(shRNA),合成后克隆入载体Pgenesil-1,脂质体Lipofectamine2000转染进786-0细胞,观察RNA干扰Ezrin后肾癌细胞株786-0细胞增殖及侵袭能力的改变。结果稳定转染细胞荧光定量PCR结果显示shRNA-ezrin1对ezrin mRNA的表达量抑制率66.33%,稳定转染细胞Ezrin下调率达93%,shRNA干扰后786-0细胞增殖活性减弱,GO/G1时段明显延长(P<0.01),PI缩短(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01);细胞黏附力减弱,细胞运动、穿孔能力减弱(P<0.01)。结论 RNA干扰Ezrin可有效抑制786-0细胞增殖活性、降低细胞的侵袭力,Ezrin在人肾癌细胞增殖、侵袭中发挥重要作用。

摘要：综述了PBL教学模式的提出、发展、设计理念以及实施方式,对PBL模式在医学教学中相对于传统教学模式的优势进行了详细对比和评价,认为有利于培养学生主动学习能力,有利于培养临床思维,并展望了PBL在我国医学教育中的应用前景。

摘要：背景：天然丝素蛋白膜是较为理想的尿道缺损修复材料，其修复缺损尿道是否存在着长度问题，作者未查到确切的证实性资料。目的：实验拟进一步观察丝素蛋白膜修复不同长度尿道缺损的效果。设计、时间及地点：随机分组设计的动物对照实验，于2007-06／08在南方医科大学附属南方医院动物实验室完成。材料：成年雄性比格犬14只，按随机数字表法分为3组，1．5cm尿道缺损组（n=6），3．0cm尿道缺损组（n=6），对照组（n=2）；丝素蛋白膜由浙江大学闵思佳教授惠赠，孔径150-250μm，孔隙率85％～95％。方法：1．5cm尿道缺损组和3．0cm尿道缺损组：切开犬阴茎皮肤及皮下组织，游离出尿道海绵体，将尿道海绵体分别切除1．5，3．0cm，再分别用1．5，3．0cm丝素蛋白支架修复尿道缺损。对照组犬行尿道海绵体游离后即逐层缝合海绵体包膜、皮下组织及皮肤。主要观察指标：术后6，12周逆行尿道造影，免疫组织化学染色观察尿道组织再生情况。结果：1．5cm尿道缺损组6只动物未见尿瘘及明显尿道狭窄梗阻，术后6周时修复区稍粗糙、不光滑，术后12周与对照组无明显差异；3．0cm尿道缺损组6只动物均出现尿瘘或修复区管腔狭小、部分充盈缺损，术后6周和12周无明显差异。免疫组织化学染色证实1．5cm尿道缺损组修复区腔面为尿道移行细胞覆盖；3．0cm尿道缺损组修复区尿道外观呈苍白、致密坚硬且管腔狭小，免疫组织化学染色证实修复区腔面无尿道移行细胞覆盖。结论：单纯丝素蛋白膜能修复1．5cm短距离尿道缺损，对3．0cm以上长距离缺损的修复效果不理想。

摘要：目的探讨腹腔镜膀胱憩室切除术的策略及效果。方法采用经腹腔途径腹腔镜膀胱憩室切除治疗4例5个男性膀胱憩室患者,手术操作包括先行经尿道前列腺电切术处理合并有前列腺增生症、电灼憩室颈口黏膜作标记、憩室颈口小者预先导丝引导下憩室和膀胱内分别留置尿管、憩室颈口大者术中将电切镜插入憩室内指引、游离并切除憩室、缝合颈口。结果 4例手术均获成功,手术时间分别为120、150、100和90 min,腹腔镜术中出血量40～80 ml,术中、术后无明显并发症,平均术后住院时间6 d（5～7 d）。结论通过精心的手术设计,可使腹腔镜膀胱憩室切除术更加安全、可行。

摘要：背景:作者所查目前尚未见应用灌注法制备大鼠全肾脱细胞基质的相关报道,制备的脱细胞基质是否具有良好的细胞相容性尚不确切。目的:应用灌注法制备大鼠全肾脏脱细胞基质支架,检测鼠肾脱细胞基质与L929细胞的细胞相容性,探讨灌注法制备的肾脱细胞基质作为细胞支架构建泌尿系实质性组织工程器官的可行性。设计、时间及地点:体外细胞水平观察实验,于2009-02/05在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。材料:取12周龄Wistar大鼠的肾脏,保留输尿管、肾静脉及肾动脉,沿肾动脉插入留置针建立灌注通道。灌注压强为9.81kPa,依次灌注肝素化PBS溶液,1%十二烷基磺酸钠溶液,去离子水,1%TritonX-100溶液以及含青链霉素的PBS溶液,制备全肾脱细胞基质支架。方法:①设立空白组(无细胞)、阴性对照组(培养基)和实验组(鼠肾脱细胞基质浸提液)及阳性对照组(含0.64%苯酚溶液的培养基)。取对数生长期的L929细胞,4×103/孔接种于96孔板中,每组各5孔,于接种24,72,120h,通过MTT法显色,于酶标仪490nm波长下检测吸光度值,计算相对增殖率。②设立对照组(培养基)、实验组(鼠肾脱细胞基质浸提液)及阳性对照组(含0.64%苯酚溶液的培养基),培养48h后应用流式细胞技术检测细胞凋亡情况。主要观察指标:①支架微观结构。②细胞毒性。③细胞凋亡率。结果:脱细胞基质支架扫描电镜观察仅见基膜及胶原蛋白等细胞外基质形成网状结构而无细胞残留,24,72,120h实验组吸光度值与阴性对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。脱细胞基质细胞毒性为0级和1级。实验组与阴性对照组之间细胞凋亡率差异无显著性意义(P>0.05)。结论:大鼠全肾脏脱细胞基质支架具有良好的细胞相容性。

摘要：染色质域解旋酶DNA结合蛋白5(chromodomain helicase DNA binding protein 5,CHD5)是人类肿瘤中一个重要的抑癌基因,是肿瘤抑制网络的控制开关,但是它在前列腺癌发生发展中的作用却少有研究。本研究利用CRISPR/Cas9技术敲除前列腺癌细胞PC-3中CHD5基因,探索敲除CHD5基因对PC-3细胞增殖能力的影响。研究根据CRISPR/Cas9靶点设计规则设计了3组特异性sgRNA,连接到pLenti-U6-sgRNA-SFFV-Cas9-2A-Puro质粒构建表达载体。测序鉴定后将重组表达载体转染293T细胞包装慢病毒。包装慢病毒滴度分别为CHD5-sgRNA-17.84×10^9 TU/mL,CHD5-sgRNA-25.83×10^9 TU/mL,CHD5-sgRNA-35.23×10^9 TU/mL。用CHD5-sgRNA慢病毒感染PC-3细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞,Western印迹检测CHD5蛋白的表达水平,CCK-8、克隆形成实验以及细胞周期检测对PC-3细胞增值能力的影响。Western印迹结果显示,CHD5-sgRNA-1组CHD5蛋白质水平无明显变化,CHD5-sgRNA-2组和CHD5-sgRNA-3组CHD5蛋白质表达水平显著低于空白组和阴性对照组,成功获得稳定敲除CHD5基因的PC-3细胞系,其中感染CHD5-sgRNA-2的PC-3细胞中CHD5蛋白水平最低,用于后续研究。CCK-8结果显示,敲除CHD5促进PC-3细胞的增殖能力。空白组、阴性对照组以及CHD5-gRNA-2组的克隆数分别为(32.50±1.50)、(35.33±2.02)和(50.83±4.25)。细胞周期分析结果显示,G2/M期细胞分别为(7.56±0.59)%、(8.33±0.61)%和(27.21±1.04)%,差异均有统计学意义(P<0.01)。Western印迹证实,CHD5敲除后,G2/M期周期相关蛋白质细胞周期蛋白B1、cdc25C和cdc2的表达量增加,phospho-cdc25C、phospho-cdc2以及p21的表达水平下降(P<0.05)。以上结果表明,CHD5敲除的PC-3细胞系构建成功,CHD5表达缺失通过上调细胞周期蛋白B1、去磷酸化cdc25C、cdc2以及下调p21表达促进前列腺癌PC-3细胞增殖。

摘要：目的:探讨精子线粒体MTCYB、MTATP6基因突变与弱精子症的关系。方法:提取80例成年男性弱精子症和20例活力正常者的精子mtDNA,设计PCR引物并扩增MTCYB、MTATP6基因,PCR产物纯化后进行序列测定和BLAST序列比对。结果:在80例弱精子症样本中有60例同时扩增出MTCYB、MTATP6片段,16例仅扩增出MTATP6片段,4例仅扩增出MTCYB片段。在20例精子活力正常的样本中均同时扩增出MTCYB、MTATP6片段。弱精子症样本中MTCYB和MTATP6基因的缺失率分别为20%和5%。扩增片断的序列分析发现,在弱精子症样本中,MTATP6基因出现G8887A的点突变,突变率为20%,而MTCYB基因未见有规律的突变。精子活力正常的样本中MTCYB、MTATP6基因未检测到明显的点突变。结论:精子线粒体MTCYB和MTATP6的基因缺失以及MTATP6基因的G8887A突变可能影响成年男性的精子活力。

摘要：目的基于云技术设计一个病例为中心、问题为基础、社区为导向(case-centered, problem-based, community-oriented)的教学云平台,供全科医学教师和全科医生使用,并探讨CPC教学云平台在全科医学CPC教学模式下的应用效果。方法通过全科医生CPC教学模式相关文献的查阅,分析CPC教学存在的问题和教学需求。针对发现的问题和教学需求,构建平台知识结构并设计平台内容,搭建CPC教学平台,供全科医学教师和学员在CPC模式下使用。采用随机数字表法将全科医学学员随机分成2组,教师指导研究组学员使用CPC教学云平台进行学习和考试,对照组使用CPC模式教学,学员仅使用CPC教学平台进行考试,比较2组考试成绩的差异。结果本研究基于云技术,搭建了CPC教学云平台。研究组共167名学员使用云平台学习和考试,对照组共150名学员使用云平台考试,研究组考试得分优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论所设计的全科医学CPC教学云平台可为教师和全科医生,在CPC教学模式下的教学和学习提供系统、便捷及可视化的教育培训手段,帮助全科医生提升专业理论和临床实践水平。