摘要：目的构建基于miR-155结构的shRNAmir慢病毒表达载体,在鼻咽癌细胞中沉默COX-2基因的表达,探索全新的COX-2抑制方法。方法转染小干扰RNA(siRNA),筛选出沉默COX-2表达的RNA干扰序列,以该序列替换miR-155前体序列中的双链部分作为anti-COX-2 shRNAmir转录模板,构建pLVTHM/shRNAmir慢病毒质粒表达载体,利用293FT细胞包装pLVTHM/anti-COX-2shRNAmir慢病毒。感染鼻咽癌C666-1细胞后,通过流式分选,建立anti-COX-2 shRNAmir稳定表达,COX-2基因沉默的亚系。结果设计合成的anti-COX-2a siRNA能够使COX-2 mRNA表达下降90%以上,根据其序列构建的pLVTHM/shRNAmir质粒载体测序无误,pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir慢病毒感染C666-1细胞后,分选出亚系C666-1经反复传代仍可保持COX-2基因沉默的表型。结论pLVTHM/shRNAmir慢病毒载体能够转录出基于miR-155结构的shRNAmir,沉默鼻咽癌细胞COX-2的表达,为探索更加高效安全的COX-2抑制剂奠定基础,也为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新手段。

摘要：背景:研究证明神经干细胞在体外能自然分泌一定量的神经生长因子,因此若将神经干细胞移植入内耳,可作为神经生长因子源源不断的供体。目的:比较神经干细胞内耳移植和神经生长因子肌肉注射两种方式对豚鼠损伤内耳的保护效果。设计:随机对照动物实验。材料:新生24h豚鼠5只,用于脑海马神经干细胞的制备。方法:①动物实验:健康豚鼠40只,随机分为6组:正常对照组4只,不施加任何处理因素;单纯耳蜗打孔组8只,仅施以耳蜗底转骨壁打孔术;单纯神经干细胞移植组8只,经耳蜗底转骨壁打孔后,向内耳注入Brdu标记的神经干细胞;致聋模型组4只,按4mg/kg体质量连续3d腹腔注射顺铂建立耳聋模型;致聋后神经干细胞移植组8只,先造成耳聋模型,而后经耳蜗底转骨壁打孔向内耳注入Brdu标记的神经干细胞;致聋后神经生长因子移植组8只,先造成耳聋模型,然后肌肉注射神经生长因子。移植后14,28d测定纯音听阈值,各处死4只用于耳蜗基底膜四唑氮蓝铺片、苏木精-伊红染色、Brdu免疫组化染色、神经生长因子免疫组化染色。②RT-PCR检测实验:健康豚鼠30只,随机分为4组:正常对照组8只、致聋模型组8只、致聋后神经干细胞移植组5只、致聋后神经生长因子移植组9只,干预措施同上。移植后28dRT-PCR检测各组动物耳蜗组织神经生长因子mRNA的表达。结果:与正常对照组比较,移植后14,28d致聋模型组、致聋后神经干细胞移植组、致聋后神经生长因子移植组的纯音听阈值均显著升高(P<0.05),但后2组升高幅度明显低于致聋模型组(P<0.05),且毛细胞排列整齐,无缺失、核溶解、碎裂等现象,螺旋神经节细胞的结构及形态基本接近正常对照组。移植后7d,耳蜗底转的移植位点、鼓阶蜗轴侧周围及基底膜下方均可见大量BrdU阳性细胞,血管纹、鼓唇和蜗神经纤维神经生长因子免疫组化染色均呈阳性表达,28d时致聋后神经干细胞移植组染色程度强于致聋后神经生长因子移植组。RT-PCR检测耳蜗神经生长因子mRNA的表达与免疫组化染色结果基本一致。结论:内耳移植神经干细胞和肌肉注射神经生长因子对豚鼠损伤内耳的毛细胞、螺旋神经节以及听力保护作用基本相似,但免疫组化及RT-PCR结果表明前者耳蜗内分布的神经生长因子较后者更为密集。

摘要：香港护理深造学院举办的专科护理证书课程是香港医院管理局培养专科护士的重要途径,该培训课程具有课程设计合理、师资安排得当、培训内容实时更新、培训方式灵活、考核方法多样等特点。笔者认为可借鉴香港专科护士培训模式,改进现有护理在校教育及继续教育教学方式,制定统一的专科护士工作标准,规范专科护士培训内容和考核标准,有计划地对护士进行系统的、标准化的专科护理教育,并促进专科护士向临床护理专家方向发展,推进我国护理事业专业化、护理人才专科化的发展进程,满足社会的需求。

摘要：目的探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对于鼻咽癌细胞在体内增殖及转移能力的影响。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA(shRNA)干扰序列,构建2种重组腺相关病毒(rAAV)载体:(增强型绿色荧光蛋白,EGFP)rAAV-EGFP和rAAV-shRNA-LMP-1,以不同滴度rAAV-EGFP转染鼻咽癌C666-1细胞确定最佳转染复数(MOI),rAAV-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1,RT-PCR鉴定抑制效率,将体外转染RNA干扰后的C666-1细胞注入裸鼠肝脏包膜下制作鼻咽癌异位肝种植的肝肺转移模型,观察肝脏成瘤及肝内、肺转移情况,分析LMP-1基因沉默在动物水平对鼻咽癌细胞成瘤及转移能力的影响。结果rAAV-EGFP以5×104v.g(virus genome,病毒基因组数)/细胞转染C666-1细胞,转染效率大于95%,RT-PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×104v.g/细胞转染C666-1后目的基因抑制效率大于90%,动物试验结果显示rAAV-shRNA-LMP-1组肝脏成瘤体积与对照组rAAV-EGFP无显著差异,但显著减少了种植肿瘤的肝内及肺转移率。结论通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达,可在动物水平抑制鼻咽癌细胞转移,但对鼻咽癌细胞生长无显著影响。

摘要：根据临床对输液监测的需求,本文提出的无线输液监测系统由主机和分机组成,其通讯由无线数据传输模块完成。本文详细介绍了其分机的电路设计及软件设计。

摘要：目的调查中国多地区各专业医务人员对阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)的认识和态度,了解睡眠中心的设置对医务人员认识OSA的影响。方法借鉴美国OSAKA问卷自行设计一份问卷。调查国内多地区不同级别的7家医院的医务人员共计630人。根据调查对象所在医院是否有睡眠中心(包括睡眠监测室)将其分为有睡眠中心(Y)组和无睡眠中心(N)组两组。统一整理调查数据并进行统计分析。结果一共发出630份问卷,最终有效问卷590份,有效回复率为93.65%。约有一半的调查对象(312人,52.89%)所工作的医院有睡眠中心。三个态度问题,两组间均无显著性差异(P>0.05)。对于减肥、戒烟酒、避免过度劳累以及药物,N组更倾向于选择减肥(估计参数=0.513,P=0.046),戒烟酒(估计参数=0.472,P=0.040),避免过度劳累(估计参数=0.933,P=0.000)和药物(估计参数=0.802,P=0.000)。对于持续气道正压通气和手术治疗的选择,两组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。关于OSA知识的平均总正确率为45.59%±20.68%。对于治疗措施回答正确率最高,其他知识点正确率都差。其中Y组的平均总正确率、症状以及靶器官损害平均正确率更高,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.012,P=0.000)。所有调查对象对于OSA知识的了解与他们对于OSA的认识、治疗和深入了解意愿三方面态度之间存在正向相关性(r=0.247,P=0.000)。结论 OSA尚需加强宣教,睡眠中心的设置更有利于医务人员更多地认识OSA,更有利于睡眠医学的发展。