摘要：背景:预输注供者凋亡细胞能够诱导受者体内产生针对供者抗原发生的特异性免疫耐受,但其具体途径尚不清楚。目的:观察供体凋亡淋巴细胞输注后受体外周血细胞因子的变化。设计、时间及地点:细胞观察性实验,于2007-11/2008-05在南方医科大学附属珠江医院移植免疫实验室完成。材料:供体C57BL雄性小鼠14只,8～10周龄,受体Balb/c雄性小鼠50只,6～8周龄。方法:分离供体小鼠脾脏细胞,放置于紫外线灯距离20cm处的摇床上照射1h,紫外线诱导C57BL小鼠脾脏细胞凋亡。将受体Balb/c小鼠随机分为凋亡细胞组和活细胞组,分别将107个供体C57小鼠脾脏凋亡细胞、活细胞经尾静脉输注于受体小鼠。主要观察指标:输注后0,1,3,6,12h经心脏采血,Luminex技术液态芯片法检测外周血白细胞介素1β、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ、肿瘤坏死因子变化。结果:只检测到白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ5种细胞因子,其他细胞因子未测出。经紫外线诱导后小鼠脾脏细胞凋亡率达到93.86%。与0h相比,外周血中干扰素γ和白细胞介素10分别在输注活细胞后6h和3,6h明显升高,其他细胞因子无明显变化。与0h相比,输注凋亡细胞1,3,6,12h后,外周血中各细胞因子无明显变化。活细胞组输注后1h白细胞介素6和输注后3,6h白细胞介素10浓度高于凋亡细胞组,其他细胞因子差异不显著。结论:同种异源供者凋亡淋巴细胞输注对外周血细胞因子浓度无变化,提示其对受体外周免疫功能可能无明显影响,其诱导产生的免疫耐受可能主要在局部发挥作用。

摘要：背景:肝细胞在体外迅速失去极性及合成代谢障碍成为肝脏组织工程研究需要克服的一个难题,在体外寻找一个有利于肝细胞生长与功能维持的细胞外基质微环境成为目前研究的焦点。目的:制备肝脏去细胞化细胞外基质生物衍生支架,并对该生物衍生支架进行初步鉴定。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02-15/05-01在广东省脑功能修复与再生研究所完成。材料:10只雄性SD大鼠用于制备去细胞肝脏细胞外基质支架。10只雄性SD大鼠用于制备原代肝细胞。方法:将SD大鼠肝脏切成10mm×5mm的组织片后,经过胰酶-乙二胺四乙酸作用24h、去垢剂曲拉通×10072h后得到肝脏去细胞化生物衍生支架。每只大鼠获取2×108个肝细胞,将所得原代细胞与肝脏去细胞化生物衍生支架放入含DMEM-F12,体积分数为10%胎牛血清,胰岛素0.5U/mL,地塞米松1×10-7mmol/L,表皮生长因子10μg/L的培养基中共培养,并与单纯原代细胞培养相比较。主要观察指标:培养14d时组织块行苏木精-伊红染色,Masson染色进行组织学分析。并行扫描电镜观察。对培养1,3,5,7,9,14d上清液进行白蛋白及尿素水平检测。结果:组织学检查未见明显细胞核残存,大量胶原纤维得到保留,扫描电镜示纤维成网状排列。支架与原代肝细胞共培养上清液白蛋白和尿素水平高于单纯原代肝细胞培养(P<0.05)。结论:利用去垢剂与胰酶-乙二胺四乙酸低渗溶液处理可以有效完整去除肝脏组织块的细胞成分,较完整地保留细胞外基质;该生物衍生支架有利于肝细胞的生长及功能维持。

摘要：目的设计一种新型混合型生物人工肝（HBAL），通过对模拟肝衰竭血清的净化作用评价其疗效，探讨其临床应用的可行性。方法选用中国人肝细胞系-1（CL-1）作为肝细胞供体。在微重力环境下，肝细胞微载体共培养5d，细胞总量约4．0×10-9个，细胞密度约为4．0×10-7／ml。然后将其在无菌环境下灌入自制生物反应器中，制成生物部分。非生物部分采用血液灌流＋胆红素吸附。生物部分和非生物部分通过两套聚乙烯胶管构成一个封闭的环路。监测模拟肝衰竭血清中未结合胆红素（UBD）、鹅去氧胆酸（CDCD）、胆酸（CA）、血氨（AA）经过混合型生物人工肝循环后浓度的变化以及生物反应器中肝细胞功能、形态及肝细胞活性的变化。结果在整个治疗过程中，循环后24h，模拟肝衰竭血清中UBD、CDCD、CA和AA的浓度分别从（335．3±6．0）μmol／L、（395．0±5．6）μmol／L、（155．7±4．5）μmol／L、（39．0±2．6）μmol／L降至（106．0±10．9）μmol／L、（131．8±28．7）μmol／L、（42．2±7．3）μmo]／L、（3．5±1．0）μmol／L，与0h比较差异有统计学意义（P〈0．05）；24h后浓度下降趋于平稳；循环48h后，CL一1细胞功能发生变化，生物反应器中模拟肝衰竭血清中的丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）分别从（25．9±4．2）IU／L、（22．0±3．6）IU／L、（0．28±0．09）μmol／L升高至（31．0±2．6）IU／L、（31．6±8．0）IU／L、（0．41±0．12）μmol／L，与0h比较差异有统计学意义（P〈0．05）。反应器中肝细胞的数量和活力在循环48h后亦显著下降（P〈0．05）。结论（1）我们构建了一种新型灌流型生物反应器。在这种生物反应器中CL-1细胞能保持较高的活性和良好的功能。（2）新型混合生物型人肝可以显著降低模拟肝衰竭血清中的UBD、CDCD、CA、AA浓度，具有清除这些毒性物质的功能，提示其具有明显的肝功能支持作用。

摘要：背景:随着生物人工肝在临床上的应用,需要有一种方便、有效、实用的保护生物反应器装载细胞活力及功能的方法,设计有自主知识产权的生物人工肝用肝细胞的低温保护液迫在眉梢。目的:验证海藻糖作为低温保护剂在4℃低温保存肝细胞的作用。方法:采用C3A人永生化肝细胞系在不同低温保存液(DMEM培养液,乳酸钠林格氏液,加有不同浓度海藻糖的乳酸钠林格氏液,UW液)4℃保存24,48,72h。复苏后行细胞活力、细胞损伤指标、氧自由基代谢相关指标等检测,并通过荧光双染法观察细胞凋亡情况。结果与结论:不同低温保存液保存不同时间C3A细胞的活力、细胞损伤及细胞凋亡表现均有所不同,其中同时间点不同浓度海藻糖组均优于单用乳酸钠林格氏液组,但不如UW液组(P0.05),提示海藻糖能有效减轻低温对肝细胞凋亡及缺血再灌注损伤的程度,可成为低温保存液中有效及重要的保护剂组分。

摘要：目的探讨根据胆囊三角解剖特点设计的经脐单孔腹腔镜胆囊切除术（ SILC）的可行性和临床疗效。方法回顾性分析2012年3月—2013年3月南方医科大学珠江医院肝胆二科采用“三点法”经脐SILC治疗的204例胆囊良性病变患者的临床资料,其中男85例、女119例,年龄23~68岁、平均47岁；胆囊结石176例,胆囊息肉21例,胆囊结石和息肉并存者3例,胆囊腺肌病4例。结果204例中,198例获得成功,术中胆囊三角均暴露良好,手术成功率为97.1%（198/204）；4例在剑突下增加1个操作孔,2例中转开腹。198例手术成功患者均随访1个月,均恢复良好,无腹痛、发热、胆漏、出血及切口感染等并发症。术后2周复查,手术切口处未见明显手术瘢痕。结论根据胆囊三角解剖特点设计的经脐SILC能够在术中良好地暴露胆囊三角,该方法操作简单、安全、可行性好,性价比高,是一种值得临床推广的单孔腹腔镜胆囊切除方法。

摘要：背景:肝细胞移植、肝脏组织工程与生物人工肝的研究为肝衰竭患者带来福音,然而截至目前仍未发现十分合适的种子细胞。课题组前期自行构建人永生化肝细胞系HepZJ作为新的种子细胞,并进行了临床前安全性评价研究。目的:对新型永生化人肝细胞系HepZJ进行急性毒性研究,为HepZJ应用于临床可能发生的毒副反应以及设计安全剂量提供参考依据。方法:在HepZJ细胞急性毒性研究中,将低、中、高(5×10~6,5×10~7,8.25×10~7)3个剂量组的HepZJ细胞悬液和空白对照溶液经尾静脉单次注射进入SD大鼠体内,观察大鼠的临床症状和体质量变化,注射结束后第1天以及第14天剖检进行血液学相关检验、大体病理和免疫组化检查,综合分析该细胞系的毒副反应和安全剂量。结果与结论:在HepZJ细胞急性毒性研究中,高剂量组大鼠注射结束时出现1只死亡,与对照组比较,血常规、凝血功能和血清生化部分指标差异有显著性意义(P 0.05)。低剂量组和中剂量组大鼠与对照组在临床症状、体质量变化、血液指标和大体病理形态上差异均无显著性意义。结果表明,永生化人肝细胞系HepZJ单次注射安全剂量为5×10~7/只,无明显毒副反应,剂量过大时可出现明显毒副反应,包括炎症应激、凝血障碍和肝功能损伤等,甚至死亡。因此,只有准确控制HepZJ的使用剂量,才能保证该细胞的临床应用安全性。

摘要：背景:通过去细胞化技术制备全肝生物支架成为缓解供体短缺的新技术,优化肝脏组织的去细胞化流程成为新的课题。目的:通过去细胞化技术建立完整保留肝脏三维结构和脉管系统的全肝生物支架,利用自主设计的循环灌注培养装置实现生物支架体外细胞再植。方法:通过门静脉路径循环灌注去垢剂TritonX-100,十二烷基硫酸钠,并用磷酸盐缓冲液洗脱残留去垢剂。通过动态循环灌注培养装置进行支架与HepG2细胞的共培养,观察植入细胞在全肝生物支架内的功能表达。结果与结论:经去垢剂灌注后,支架呈现保持肝脏三维结构的透明结构,苏木精-伊红染色以及扫描电镜结果显示细胞成分被完全移除,Masson’sTrichrome染色可见大量胶原纤维,免疫组化结果证实纤维连接蛋白和层粘连蛋白保存完整。循环灌注培养下细胞白蛋白表达量及尿素合成量较平板培养明显提高。说明去细胞化肝脏生物支架可作为体外肝脏组织重建的基础材料,动态循环灌注方法可实现支架中细胞再植。