摘要：目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对肾癌细胞株786-0细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法以ezrin为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体设计和构建重组体,设计2条发夹式RNA(shRNA),合成后克隆入载体Pgenesil-1,脂质体Lipofectamine2000转染进786-0细胞,观察RNA干扰Ezrin后肾癌细胞株786-0细胞增殖及侵袭能力的改变。结果稳定转染细胞荧光定量PCR结果显示shRNA-ezrin1对ezrin mRNA的表达量抑制率66.33%,稳定转染细胞Ezrin下调率达93%,shRNA干扰后786-0细胞增殖活性减弱,GO/G1时段明显延长(P<0.01),PI缩短(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01);细胞黏附力减弱,细胞运动、穿孔能力减弱(P<0.01)。结论 RNA干扰Ezrin可有效抑制786-0细胞增殖活性、降低细胞的侵袭力,Ezrin在人肾癌细胞增殖、侵袭中发挥重要作用。

摘要：目的通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)挖掘并验证前列腺癌转移的关键枢纽基因。方法对前列腺癌全基因组芯片GSE6919进行主成分分析(PCA),通过R语言分析差异表达基因(DEGs);利用WGCNA构建基因共表达网络并筛选关键基因;在TCGA公共数据中分析基因表达量及其与患者预后的关系;设计和验证针对转移相关的关键基因HNRNPA2B1的小分子干扰片段,通过MTT、流式细胞术、克隆形成、Transwell等实验验证其对前列腺癌细胞系生长、凋亡、克隆形成、迁移和侵袭的影响。结果PCA分析显示癌转移组和原位及癌旁组明显分开聚类,基因表达差异显著。WGCNA分析得到与癌转移组密切相关的模块,与干细胞分化、氨基酸代谢及免疫反应密切相关。进一步筛选得到与前列腺癌发生相关的(BDH1、PAK4、EXTL3)和转移相关的(NKTR、CTBP2、HNRNPA2B1)6个枢纽基因,在TCGA数据库中有表达差异,且与患者的总生存期相关。Western blotting结果显示HNRNPA2B1小分子干扰成功;干扰片段转染PC3及LNCap细胞,MTT实验结果显示沉默HNRNPA2B1可抑制前列腺癌细胞的生长,流式细胞术结果显示沉默HNRNPA2B1可诱导细胞凋亡,克隆形成实验显示沉默HNRNPA2B1可抑制其克隆形成,Transwell实验显示沉默HNRNPA2B1显著抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。结论发现前列腺癌发生相关的BDH1、PAK4、EXTL3和转移相关的NKTR、CTBP2、HNRNPA2B16个枢纽基因,为前列腺癌调控机制的研究提供了新思路。

摘要：目的 观察靶向抑制跨膜丝氨酸蛋白酶2（TMPRSS2）：ERG融合基因后对前列腺癌细胞生长的影响.方法 设计特异性作用于TMPRSS2∶ ERG融合基因的短发卡RNA （shRNA）,并进行慢病毒包装后感染前列腺癌细胞,进一步通过噻唑蓝（MTT）实验,以及流式细胞术研究ERG基因沉默后前列腺癌细胞增殖的变化.结果 成功构建并筛选到高效特异性的shRNA1序列,在mRNA水平的靶向抑制效率为79％,蛋白水平的靶向抑制率为93％;靶向抑制TMPRSS2∶ ERG融合基因表达96 h后,前列腺细胞生长速度降低了33.34％;细胞周期分析发现ERG基因沉默后的VCaP细胞S期和G2/M期细胞比例分别由10.0％降至6.6％,29.1％下降到17.25％,而G0/G1期细胞比例由51.7％升高到71.2％.结论 靶向抑制TMPRSS2∶ ERG融合基因的表达可以显著抑制前列腺癌细胞的生长.

摘要：【摘要】目的总结机器人辅助腹腔镜小儿上尿路手术的体位、操作通道设计和机械臂安装应用体会。方法回顾性分析2017年3—12月解放军陆军总医院附属八一儿童医院140例行机器人辅助腹腔镜上尿路手术患儿的临床资料。男103例，女37例；年龄1个月至18岁，中位年龄2岁。肾盂输尿管连接处梗阻110例，重复肾输尿管畸形15例，多囊性肾囊肿8例，肾萎缩4例，肾上腺肿瘤3例。采用助手与器械护士相邻的手术布局方式，患侧垫高60。～80。足低健侧卧位，操作通道的建立采用分散式的半隐藏切口法：即经脐置人镜头孔操作通道，其余两器械臂操作通道分别置于剑突下和耻骨联合上腹横纹处，两操作通道距镜头孔的距离基本相等，辅助孔操作通道置于健侧腹横纹线上距正中线约3cm处。结果本组140例中，肾盂成形术110例，重复肾输尿管全长切除术15例，单纯肾切除术12例，肾上腺切除术3例。手术从切皮到机器人器械臂对接完成时间为（11．5±3．2）min（10．5～16．5min），手术时间（146．9±48．7）min（78—259min）。所有手术均顺利完成，无中转开放手术，1例外院行开放肾盂成形术后再次梗阻者术中粘连严重，于健侧上腹部增加1个辅助通道后完成手术。无胃肠道及其他脏器损伤等并发症发生。140例术后住院时间（5．7±1．4）d（4—10d）。术后6周体表基本无可视瘢痕，所有家长均对术后外观满意。术后随访1—9个月，中位时间6个月。110例行肾盂成形术患者术后积水明显减轻，15例重复肾输尿管切除和12例肾切除患者术后症状均消失，3例肾上腺肿物切除患者术后未见复发。结论良好的手术布局与体位摆放有利于手术团队术中协作、交流与配合，半隐藏切口法操作通道的设计充分发挥了机器人手术优势，有利于主刀医生灵活操作及其与助手有效配合，使手术更加安全、有效，有利于患者术后快速康复。

摘要：目的评价实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小干扰RNA(siRNA)表达载体抑制人肾癌786-0细胞G250 mRNA表达的可靠性,以建立稳定的RNAi技术。方法体外合成四条针对G250基因的siRNA,并设计阴性对照和空白对照,转染肾癌786-0细胞株;根据G250 mRNA的序列设计特异性引物,荧光染料SYBR Green Ⅰ法定量RT-PCR测定G250 mRNA的表达情况。结果四条siRNA分别使G250 mRNA表达量降低了35.56%、49.27%、45.88%、65.13%,阴性对照和空白对照组无明显变化。结论实时荧光定量RT-PCR技术可以准确地检测mRNA的表达,可以用来评价siRNA的有效性。

摘要：目的探讨侧卧位输尿管软镜下钬激光碎石术治疗上尿路结石的疗效。方法对35例上尿路结石采用自行设计的侧卧位,输尿管硬镜镜体扩张后留置输尿管扩张鞘,再置入输尿管软镜,寻及结石以钬激光击碎结石。结果侧卧位输尿管软镜下钬激光碎石治疗上尿路结石35例,单次碎石成功率97.1%（34/35）,手术时间平均35 m in（20-50 m in）,住院时间平均5 d（3-7 d）,无脓肾、输尿管穿孔等并发症。结论侧卧位输尿管软镜下钬激光碎石术治疗上尿路结石安全、有效、并发症少,尤其适用于结石体积较小,肾盂肾盏无明显积水,以及因解剖特点预期ESWL效果欠佳的患者。女性患者成功率更高。

摘要：目的:探讨精子线粒体MTCYB、MTATP6基因突变与弱精子症的关系。方法:提取80例成年男性弱精子症和20例活力正常者的精子mtDNA,设计PCR引物并扩增MTCYB、MTATP6基因,PCR产物纯化后进行序列测定和BLAST序列比对。结果:在80例弱精子症样本中有60例同时扩增出MTCYB、MTATP6片段,16例仅扩增出MTATP6片段,4例仅扩增出MTCYB片段。在20例精子活力正常的样本中均同时扩增出MTCYB、MTATP6片段。弱精子症样本中MTCYB和MTATP6基因的缺失率分别为20%和5%。扩增片断的序列分析发现,在弱精子症样本中,MTATP6基因出现G8887A的点突变,突变率为20%,而MTCYB基因未见有规律的突变。精子活力正常的样本中MTCYB、MTATP6基因未检测到明显的点突变。结论:精子线粒体MTCYB和MTATP6的基因缺失以及MTATP6基因的G8887A突变可能影响成年男性的精子活力。

摘要：目的观察两种目前已发现的化学溶石剂对兔膀胱的损伤情况。方法选取24只新西兰兔,采用自行设计的手术,建立膀胱造瘘及导尿通路,经过通路分别灌注生理盐水、EDTA-2Na、S1,48h后处死动物立即取出动物膀胱于相同部位取材两处行常规病理切片,观察黏膜病理损伤情况,统计分析比较各组间结果。结果灌注48h后,对照组无明显损伤,溶液S1组可见轻微损伤现象,较生理盐水严重(P<0.05),EDTA-2Na对黏膜损伤较为明显,与前两组比较差异有统计学意义。结论溶液S1膀胱灌注对动物黏膜损伤较为轻微,可望成为临床应用的泌尿系统化学溶石剂。