摘要：目的:探讨单精子测序技术在植入前遗传学检测中的应用价值。方法:针对1例PKD1基因c.3815T>G新发变异导致的常染色体显性多囊肾患者,应用单精子分离结合单精子测序技术完成单倍型的构建,用机械制动法分离50份单精子样本并进行全基因组扩增,设计变异位点及其上下游共187个单核苷酸多态性(SNP)位点的扩增引物,对扩增产物进行检测,确定未携带以及携带致病变异的染色体单倍型,将7份胚胎滋养层细胞活检样本作为对象,在完成全基因组扩增后,通过高通量测序进行检测,判断胚胎携带致病变异的情况,选取可用囊胚进行移植,于孕18周抽取羊水样本,确认胎儿是否携带致病变异。结果:通过单精子测序共筛选出47个SNP位点,成功构建单体型,植入前单体型分析提示5枚胚胎携带致病变异,2枚未携带,妊娠中期羊水基因检测证实胎儿未携带PKD1基因c.3815T>G变异。结论:对于携带新发致病变异的男性,可通过单精子测序筛选SNP位点,通过连锁分析构建单体型,准确有效的进行胚胎植入前遗传学检测。

摘要：目的:探讨微小RNA(miR)-222及特异性miR-222抑制剂对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)c-kit基因的mRNA和蛋白表达、内皮微粒的影响。方法:设计miR-222-3p mimic和miR-222-3p inhibitor及相应的阴性对照(mimic control和inhibitor control),分别转染HUVEC,通过实时荧光定量聚合酶链式反应技术(qRT-PCR)验证转染效率。利用qRT-PCR检测c-kit基因mRNA表达水平;免疫印迹技术分析c-kit蛋白表达水平;CD144标记内皮微粒,流式细胞仪检测miR-222转染对内皮微粒分泌的影响。结果:与mimic control转染组相比,转染miR-222-3pmimic均显著降低c-kit基因mRNA和蛋白表达水平。与inhibitor control转染组相比,转染miR-222-3p inhibitor均显著提高c-kit基因mRNA和蛋白表达水平。流式细胞仪检测显示miR-222-3p表达上调导致内皮微粒分泌增加,miR-222-3p表达下调导致内皮微粒分泌减少。结论:miR-222表达上调抑制c-kit基因mRNA的表达,进而抑制蛋白的表达,miR-222表达上调可能通过引起HUVEC株细胞活化而致内皮微粒分泌增加,进而介导了内皮细胞功能的紊乱。