摘要：背景:神经干细胞已被应用于治疗成人颅脑损伤及其他神经系统退行性疾病中。体外培养的神经干细胞脱离了体内正常的生理环境,所产生的反应是否与在生理条件下一致?诱导内源性的神经干细胞增殖分化可能是为实践开辟出另一条更有前程的途径。目的:探讨不同胎龄胎脑皮质额叶神经干细胞的发育规律。设计:随机实验观察。单位:南方医科大学附属珠江医院儿科。对象:收集2003-10/2004-03南方医科大学附属珠江医院妇产科胎龄16～36周的自愿水囊引产胎儿90例,取其皮质额叶脑组织作为实验材料。胎儿母亲均查体健康,水囊引产胎儿经家属及胎儿母亲签字同意、并经南方医科大学主管部门同意后进行实验。按胎龄16,20,24,28,32,36周分为6组,每组15例。方法:水囊引产胎儿娩出后在无菌条件下进行处理,打开头皮及颅骨,撕除脑表面被膜,切取皮质额叶脑组织,进行固定后切片,采用免疫组织化学及光镜技术对人胎脑皮质额叶神经干细胞的分布、形态、种类、生长方式以及数量进行检测。光学显微镜下观察细胞的形态及阳性表达情况。用替代法作阴性对照实验。在光学显微镜×400下观察,Nestin阳性细胞胞浆染成棕黄色,判定为神经干细胞,每组每个样本取2张载玻片,每张载玻片选10个视野,每组计算镜下300个视野的总细胞数和阳性细胞数。计算每组神经干细胞阳性检出率。主要观察指标:不同胎龄组人胎脑皮质额叶Nestin蛋白阳性神经干细胞的形态学及数量发育特征。结果:人胎脑皮质额叶存在神经干细胞,主要分布在锥体细胞层及内颗粒细胞层,呈小圆形及椭圆形,以前者最多,胞核相对较大,空泡状,1～3个核仁不等,大部分细胞染色质疏松,胞浆表达明显,有的圆形细胞呈僧帽状,僧帽细胞可见短突起,椭圆形细胞有2个突起,神经干细胞呈明显的区域性分布,其中有由数个细胞形成的神经干细胞集落,似体外培养形成的神经干细胞克隆球,偶见对称性分裂的神经干细胞。不同胎龄组16,20,24,28,32,36周组人胎脑皮质额叶Nestin蛋白阳性神经干细胞检出率逐渐减少(15.59%,13.48%,11.62%,10.52%,9.87%,6.68%,χ2=1265.152,P<0.01)。结论:不同胎龄人胎脑皮质额叶神经干细胞在分布、形态、种类、生长方式及数量上存在一定的差异和自身的发育特征,其数量随着胎龄的增加而减少。

摘要：目的探讨IL-18基因单核苷酸多态性rs1946519与宫颈癌的关系,为研究宫颈癌患病风险奠定基础。方法常规方法对107例原发性宫颈癌患者和80例正常人群外周血进行基因组DNA抽提;自行设计引物和探针,等位基因特异性杂交技术对我们前期筛选的IL-18基因rs1946519位点进行TaqMan探针荧光定量PCR分型,应用2检验统计分析病例组和对照组等位基因频率、等位基因型频率、单倍型频率及其患病风险。结果宫颈癌患者组与正常对照组IL-18基因rs1946519基因型AA、AC和CC及等位基因A和C频率差异有显著性(P<0.05),AC和CC基因型及C等位基因的患病风险分别2.883,2.750和1.611。结论IL-18基因rs1946519与宫颈癌的发生有密切关系,具有AC基因型和C等位基因的妇女发生宫颈癌的危险性相对较高。

摘要：目的建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的人类mdr1基因的新型实时荧光定量PCR检测新方法。方法用Primer Express 2．0引物设计软件设计引物和MGB探针,以Taq Man-MGB探针技术为基础,运用Taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1／A为阳性模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果所建立方法的最低检测限度为15个基因拷贝／反应,在待扩增DNA浓度为3．061×103 cps／ml-3．061×109cps／ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,决定系数r2为0．988243。结论应用Taq Man-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确性高等优点。

摘要：儿科临床带教引进以症状为主线、以问题为中心的教学方法，采用多种具体教学方法研究怎么教、如何学的问题。素质教育要求以学生为主体，使学生在教学过程中主动学习、善于发现问题，向未知领域研究探索。改变传统的、单一疾病的教学模式，有利于学生综合素质的提高和临床思维的培养。

摘要：目的:探讨以小分子干扰RNA技术沉默肺转化生长因子β1(TGF-β1)基因对新生小鼠晚期肺泡发育的影响。方法:75只新生KM小鼠,随机分为干扰组、空白对照组和阴性对照组各25只,构建TGF-β1 shRNA慢病毒载体,经鼻内吸入法导入干扰组生后3d新生小鼠肺内,同时设计一无关序列构建阴性表达慢病毒载体同法导入阴性对照组小鼠肺内,空白对照组不予干预。各组别按小鼠生后4、7、14、21、28d分别取肺组织观察其组织形态学变化,以RT-PCR和Western blot法检测肺组织中TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平。结果:与两对照组相比,干扰组肺TGF-β1mRNA在小鼠生后4、7、14、21、28d明显降低,生后7、14、21、28d,干扰组肺TGF-β1蛋白水平也明显降低,同时肺泡平均截距明显增大,放射状肺泡计数减少,差异均有统计学意义。阴性对照组和空白对照组各时间点各项指标无统计学差异。结论:沉默TGF-β1基因可阻滞新生小鼠晚期肺泡发育。

摘要：目的筛选从矽肺患者双肺大容量灌洗回收液(WLLF)中提取人源性肺表面活性物质(HPS)的条件。方法以提取HPS纯品的获得量为指标,采用正交实验设计分析最佳提取条件组合,凝胶色谱纯化HPS。HPS纯品组分测定采用总磷脂含量测定(孔雀绿直接显色法),磷脂组分分析采用高效液相色谱法(HPLC)。结果提取最佳的条件组合:初离心3000×g,15min;3kD孔径透析袋浓缩;再离心10000×g,15min;正丁醇萃取。纯化HPS色谱条件,层析柱:SephadexLH-20凝胶层析柱(1.5cm×40cm)。流动相:氯仿-甲醇(1∶1/v∶v),流速:1.0ml/min;收集220nm滤片以PC为主峰液体。得到HPS纯品12646.76mg。其中磷脂占95.74%。磷脂酰胆碱PC占80.43%。结论HPS中磷脂酰胆碱含量高且磷脂成分齐全。该提纯方法值得推广。

摘要：目的建立一种比现有方法敏感、特异性高、重复性好的实时荧光定量PCR检测的新方法检测人类mdr1基因。方法以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,用Primerexpress2.0引物设计软件设计引物和TaqMan-MGB探针,建立荧光定量PCR检测方法。结果当待扩增DNA浓度在3.601×103cps/ml～3.601×109cps/ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,相关系数r2大于0.98。结论应用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确度高等优点,可作为进一步研究人类mdr1基因的方法。