摘要：为了准确评价盐胁迫下杜梨(Pyrus betulaefolia Bunge.)目标基因表达量,筛选q RT-PCR适用内参基因。利用杜梨的全基因组注释信息和转录组测序数据,选择Actin2(Chr15.g01351)、EF1α-1(Chr3.g19898)、EF1α-2(Chr4.g38173)、EF2(Chr5.g06899)、GAPDH-1(Chr16.g30426)、GAPDH-2(Chr13.g23532)、TUBB(Chr5.g06472)、UBQ(Chr4.g40121)等8个候选基因,设计Actin2、EF1α-1、EF1α-2A、EF1α-2B、EF2、GAPDH-1、GAPDH-2、TUBB-A、TUBB-B、UBQE等10对qRT-PCR引物。首先对10对引物的扩增效率进行了测定,再以200 mmol·L^(-1)的NaCl溶液对两个杜梨家系(盐城和连云港)幼苗进行0、24、48、72 h盐胁迫处理。提取叶片的总RNA,反转录合成cDNA,使用10对引物进行q RT-PCR扩增,根据扩增产物使用delta Ct、BestKeeper、geNorm和NormFinder等4种评价内参基因稳定性的方法,对10对引物扩增产物的稳定性进行分析,并使用RefFinder软件对4种评价方法进行综合分析,以确定最稳定内参基因及其引物。利用筛选出的2对最优内参基因引物对(TUBB-A和GAPDH-1)对1个可能参与杜梨盐胁迫响应的HKT基因(Chr16.g29024)的表达情况进行分析,8个候选内参基因的FPKM值(Fragments PerKilobase Million)都大于30,不同盐处理时间下的FPKM变异系数为0.087~0.260;10对荧光定量PCR引物的扩增效率在91.82%~112.99%之间,其中引物对TUBB-A和GAPDH-1的扩增效率最接近于100%;稳定性分析显示10对引物扩增产物的稳定性排序为GΑPDH-1、TUBB-Α、EF1α-1、TUBB-B、EF1α-2Α、EF2、UBQE、GΑPDH-2、Αctin2、EF1α-2B;不同引物对(TUBB-Α、TUBB-B和EF1α-2Α、EF1α-2B)对同一基因的扩增产物的稳定性存在明显差异;利用TUBB-A和GAPDH-1分析HKT基因的表达趋势没有差别。说明基因GΑPDH和TUBB适于作为杜梨盐胁迫下进行荧光定量PCR的内参基因,对应的GAPDH-1、TUBB-A引物对的扩增效果最好。

摘要：【目的】探究氮磷钾复合施肥对增温促花后的优质盆栽观赏海棠品种‘长寿冠’(Chaenomeles speciosa‘Changshouguan’)生长和光合特性的影响,为‘长寿冠’增温促花后的复壮栽培提供理论依据。【方法】采用正交设计进行根部施肥试验,设置对照组(CK)和9个处理组(处理1—9)。研究其对生长、叶绿素相对含量、光合气体交换参数和叶绿素荧光参数的影响。【结果】①处理1—9均对‘长寿冠’单株叶片数和叶面积有显著影响。以处理8(N_(3)P_(2)K_(1))效果最好,分别比对照增加了10.74%、11.13%,均差异显著(P<0.05)。②各处理组能显著提高叶片相对叶绿素量、净光合速率(P_(n))、气孔导度(G_(s))和蒸腾速率(T_(r)),胞间CO_(2)浓度(C_(i))变化不明显,说明‘长寿冠’叶片净光合能力的提升是由气孔和非气孔两方面因素导致的。③处理1—9均提高了‘长寿冠’PSⅡ光化学淬灭系数(qP)、实际光化学效率(Φ_(PSⅡ))和电子传递速率(ETR),以处理8效果最好。各施肥处理组的非光化学淬灭系数(NPQ)均低于对照,表明施肥处理促进了叶片对光能的转化和利用效率,降低了光化学反应过程中的热耗散。④相关性分析表明,P_(n)与相对叶绿素含量、G_(s)、qP、叶面积、ETR、Φ_(PSⅡ)呈显著正相关,与NPQ呈负相关。相对叶绿素含量与叶面积、单株叶片数呈显著正相关,表明施肥处理通过提升‘长寿冠’的光合性能促进叶片的生长,叶片光合性能的改善与光能吸收及其转化利用效率的提高有关;叶绿素相对含量可以作为考量促花后施肥复壮效果的有效生理指标。【结论】适当配比的氮磷钾复合肥能有效促进增温促花后盆栽海棠‘长寿冠’叶片的生长,提升光合性能,最佳的氮磷钾肥配施方案为每株1.2 g氮肥、0.2 g磷肥、0.2 g钾肥。

摘要：【目的】探究增温促花后,施用氮磷钾复合肥对观赏海棠‘长寿冠’(Chaenomeles speciosa‘Changshouguan’)生理特性的影响,为观赏海棠增温促花后的复壮栽培提供理论依据。【方法】以‘长寿冠’海棠5年生嫁接苗为材料,采用氮、磷、钾3因素的二次回归正交施肥试验设计,在‘长寿冠’海棠当年开花后2个月进行根部施肥试验,测定叶片可溶性糖、可溶性蛋白、内源激素含量及保护酶活性。【结果】(1)与对照相比,各氮磷钾复合肥处理下‘长寿冠’叶片可溶性糖和蛋白质含量均显著提高(P<0.05),以处理3(N_(3)P_(3)K_(2))效果最佳,其叶片可溶性糖和蛋白质含量比对照分别增加40.60%和25.89%;(2)各配比氮磷钾复合施肥处理下,叶片过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性有不同程度的增加,丙二醛(MDA)含量降低,其中处理2(N_(3)P_(2)K_(1))和处理3(N_(3)P_(3)K_(2))效果较好,均与对照差异显著(P<0.05);(3)各配比氮磷钾复合施肥处理对‘长寿冠’内源激素脱落酸、生长素、赤霉素、玉米素(ABA、IAA、GA_(3)、ZR)含量均影响显著;适当的施肥处理提高了叶片IAA、GA_(3)、ZR含量,降低了ABA含量,处理组IAA、GA_(3)及ZR的总含量与ABA含量的比值均不同程度地提高。相关性分析表明,IAA、GA_(3)、ZR含量与叶片可溶性糖、蛋白质含量以及POD、SOD活性之间极显著正相关,而与MDA含量极显著负相关。ABA与叶片生理特性的相关性与其他激素相反;(4)方差分析表明,氮是肥料3因素中影响‘长寿冠’叶片生理特性的首要因素;多重比对分析表明,氮素水平对‘长寿冠’各项生理指标均产生显著影响,磷和钾对各指标显著性影响有所不同;隶属函数综合分析表明,改善‘长寿冠’叶片生理功能的最佳氮磷钾肥配施方案为N_(3)P_(3)K_(2)处理,即每株施氮肥1.2 g、磷肥0.3 g、钾肥0.4 g。【结论】施用适宜的氮磷钾复合肥能有效改善增温促花后‘长寿冠’海棠叶片的营养功能,增强其抗氧化能力;配方施肥的调节作用或与植株内源激素的调控有关。

摘要：【目的】研究不同温度制备的生物质炭对杨树人工林土壤微生物群落结构和酶活性影响的差异,探究土壤pH、微生物群落结构及其酶活性之间的关系,为深入研究生物质炭对土壤碳循环的影响提供参考。【方法】以江苏省东台林场的杨树人工林土壤为研究对象,开展了60 d的室内培养实验,设计不添加生物质炭的对照(CK)、添加以水稻为原料在300℃和500℃制备的生物质炭(B300和B500)共3个处理,分别在培养0、1、7、30和60 d时破坏性采集土壤样品,利用磷脂脂肪酸法(PLFAs)测定土壤微生物群落结构,通过比色法测定土壤β-D-葡萄糖苷酶、纤维二糖糖苷酶、多酚氧化酶和漆酶活性,利用电极法测定土壤pH。【结果】生物质炭对土壤微生物群落结构的影响呈现出明显的阶段性。与CK相比,培养7 d时,B300和B500处理的细菌相对丰度分别提高了5.87%和11.8%(P=0.016,F=8.85,df=8),而革兰氏阴性(G^-)菌/革兰氏阳性(G^+)菌分别降低了7.47%和21.4%(P=0.093,F=4.55,df=8)。与此同时,放线菌的相对丰度分别降低了15.2%和17.5%(P=0.005,F=14.00,df=8);培养30 d时,生物质炭对土壤微生物群落结构的影响恰好与培养7 d时相反,并且同样是B500比B300处理的影响程度大;培养60 d时,生物质炭没有对土壤微生物群落结构产生明显影响。平均而言,与CK相比,B500处理的β-D-葡萄糖苷酶活性和纤维二糖糖苷酶活性分别提高了21.2%(P=0.031,F=6.53,df=8)和34.7%(P=0.011,F=10.31,df=8),而B300处理的2个水解酶活性没有明显变化,B300和B500处理的多酚氧化酶活性分别提高了33.8%和40.1%(P=0.021,F=7.80,df=8)。相关分析表明,土壤pH不是影响土壤微生物群落结构和酶活性的关键因子,并且微生物群落结构改变不是引起酶活性变化的主要原因。【结论】300℃和500℃制备的生物质炭对杨树人工林土壤微生物群落结构和酶活性影响的方向一致,但500℃比300℃制备的生物质炭对土壤徽生物群落的影响程度更大,这可能是由于500℃制备的生物质炭含有更多难分解碳而引起。

摘要：以苏北沿海地区杨树人工林为研究对象,探讨沼液不同施用水平对土壤活性有机碳的影响。试验采用随机区组设计,设置了4种沼液施用水平,分别为CK(0 m3·hm-2)、L(125 m3·hm-2)、M(250 m3·hm-2)和H(375 m3·hm-2)。结果表明,施用沼液显著增加了土壤DOC含量,其中土壤DOC含量在中浓度沼液处理下达到最高,为228.97 mg·kg-1;施用沼液显著降低了土壤MBC;同时,施用沼液显著降低了土壤p H值,并显著增加了土壤NO3--N含量。相关分析表明,土壤p H与NO3--N呈显著负相关,而沼液中N以NH4+-N为主,表明沼液对土壤p H的影响可能与大量铵态氮的输入有关。沼液也显著增加了土壤MBN以及降低了土壤MBC/MBN,表明施用沼液也可能改变土壤的微生物群落的组成结构。

摘要：【目的】揭示接种蚯蚓和施用凋落物对杨树人工林土壤主要酶活性的影响,正确评价蚯蚓和凋落物在杨树人工林生态系统土壤养分循环中的作用,以促进其生产力长期维持及生态服务功能提升,为优化杨树人工林经营管理提供依据。【方法】以江苏省东台林场20年生杨树人工林为试验对象,采用随机区组试验设计,共设置杨树凋落叶表施(T1)、杨树凋落叶混施(T2)、接种蚯蚓(T3)、杨树凋落叶表施+接种蚯蚓(T4)、杨树凋落叶混施+接种蚯蚓(T5)共5种不同试验处理及不做处理为对照(CK),测定分析不同处理下土壤蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶及纤维素酶活性的变化,及土壤微生物生物量碳、微生物生物量氮含量、容重、pH、总有机碳含量、全氮含量等重要土壤环境因子的变化。【结果】(1)与CK相比,T3、T4、T5处理显著提升了土壤蔗糖酶、脲酶活性,土壤蔗糖酶活性平均增幅分别为30.85%、34.58%、50.90%,土壤脲酶活性平均增幅分别为27.57%、33.67%、66.64%。(2)与CK相比,5种处理均显著提升了土壤纤维素酶活性,平均增幅分别为38.39%、51.79%、79.91%、129.33%、149.52%。(3)与CK相比,T1、T2处理显著降低了土壤过氧化氢酶活性,平均降幅分别为13.23%、17.56%,T3、T4、T5处理与CK相比没有显著性差异。(4)季节动态分析表明,土壤蔗糖酶活性9月最高,为0.77 mg/(g·d);3月最低,为0.40 mg/(g·d)。土壤脲酶活性夏秋季较高,为10.57 mg/(g·d);冬春季较低,为5.61 mg/(g·d)。土壤过氧化氢酶活性6月最高,为4.20 mg/(g·h);其他季节较低,为2.22 mg/(g·h)。土壤纤维素酶活性夏秋季较高,为6.93 mg/(g·d);冬春季较低,为2.36 mg/(g·d)。与CK相比,接种蚯蚓及添加凋落物处理没有改变4种土壤酶活性的季节性变化规律。(5)重复测量方差分析表明,季节变化和试验处理均显著影响了土壤蔗糖酶、脲酶、纤维素酶和过氧化氢酶活性,其中季节变化和试验处理对土壤过氧化氢酶活性的影响具有显著性交互作用,而对土壤蔗糖酶、脲酶和纤维素酶活性的影响没有显著性交互作用。(6)相关分析表明,土壤蔗糖酶、脲酶及纤维素酶活性与土壤容重、pH呈显著负相关,与土壤全氮、总有机碳、微生物生物量碳、微生物生物量氮含量、微生物生物量碳氮比呈显著正相关;土壤过氧化氢酶活性则与上述各环境因子相关性不显著。【结论】接种蚯蚓能够显著提高杨树人工林土壤蔗糖酶、脲酶和纤维素酶活性,凋落物混施比表施更有利于促进接种蚯蚓对杨树人工林土壤蔗糖酶、脲酶和纤维素酶活性的影响;凋落物混施和接种蚯蚓处理均显著提升了土壤酶评价指数,凋落物混施+接种蚯蚓处理进一步提升了土壤酶指数。因此,在农林业生产中可考虑将凋落物混施与接种蚯蚓经营措施结合应用。

摘要：本研究采用L9(23)正交试验设计确定短丝木犀的SSR-PCR最佳反应体系,同时设置12个不同的温度梯度优化引物退火温度;利用优化后的体系以50对候选SSR引物为对象,对6个短丝木犀基因组DNA样品等量混合,进行PCR扩增筛选引物。结果表明,第一,短丝木犀SSR-PCR最优反应体系为:1.0μL50ng/μL模板DNA,1.0μL 100μmol/L引物,12.5μL 2×Taq PCR Master Mix,补ddH2O至25μL;第二,DNA混合池方法比常规的筛选方法具有效率高,实验资源消耗低的优点,可用于短丝木犀SSR引物的大量筛选;第三,最终筛选出10对具有高多态性、高稳定性且重复性好的SSR引物。本研究旨在建立适合短丝木犀的SSR-PCR最佳反应体系,并以DNA混合池为模板进行引物筛选,为短丝木犀引物的大量开发提供了一种新的途径。

摘要：【目的】探究硼钼铜微肥配施对药用植物太子参光合作用的调控作用及其机制,为太子参高效栽培提供理论依据。【方法】采用二次回归D-最优设计进行田间叶面喷施试验,研究硼钼铜微肥配施对光合气体交换参数和叶绿素荧光参数的影响。【结果】(1)各微肥配施处理下太子参叶片光合色素含量、净光合速率(P_(n))、气孔导度(G_(s))、蒸腾速率(T_(r))较对照均有不同程度的提高,而胞间CO_(2)浓度(C_(i))则显著降低(P<0.05),说明太子参叶片光合能力的提升主要缘于非气孔限制因素的改善。(2)试验期间,与对照相比,适宜微肥配比处理不同程度地提高了太子参叶片PSⅡ最大光化学效率(F_(v)/F_(m))、PSⅡ有效光化学效率(F_(v)′/F_(m)′)、电子传递速率(ETR)和光化学淬灭系数(qP),降低非光化学淬灭系数(NPQ),表明微肥处理能够增强太子参光合系统对光能的吸收、转换与利用效率,缓解过剩激发能所导致的热耗散的增强。(3)极差分析和单因素方差分析表明,微肥3因素中硼是影响叶片光合性能各参数的主要因素,其次为铜。(4)通过隶属函数综合分析表明,提高太子参光合性能的最优施肥配方为B_(3)Mo_(2)Cu_(1),即硼肥1.5 g/L+钼肥0.08 g/L+铜肥0.1 g/L。【结论】适宜的硼钼铜配施能有效提升太子参叶片的光合性能,增强其对光能的吸收、转化和利用效率,降低热耗散并缓解光抑制。

摘要：【目的】探究缓释肥用量对薄壳山核桃容器苗生长和养分状况的影响,确定培育薄壳山核桃容器苗合理的缓释肥用量。【方法】采用单因素完全随机区组设计,设置不同处理T0、T1、T2、T3(缓释肥用量对应为0、3、6、9 kg/m^3),测定和比较薄壳山核桃苗木生长及植株N、P、K养分含量。【结果】与对照(T0)相比,不同缓释肥处理均显著促进薄壳山核桃苗木苗高、地径、单株生物量、根系总长、根系总表面积、根系总体积、根系平均直径和各器官N、P、K含量,改善了根冠比且以T1处理效果最佳;随着处理浓度增加,促进效应下降。动态测定表明,缓释肥处理能保持试验期苗高与地径的持续快速生长,其中地径的持续时间更长,生长后期(8月中旬后)与苗高呈现非同步性。【结论】适量的缓释肥用量能促进薄壳山核桃容器苗的生长、生物量积累和根系发育,促进效应与改善植株N、P、K养分含量有关;缓释肥施用量以3 kg/m^3较佳。

摘要：樟疫霉(Phytophthora cinnamomi)可以侵染植物,导致根腐病。前期研究发现,阿劳琼链霉菌(Streptomyces araujoniae) S-03对根腐病病原菌樟疫霉有较好的抑制作用,但该菌的发酵条件、发酵液的稳定性和化学性质还不清楚。本研究采用单因素和正交试验设计对S-03菌株的发酵条件进行优化,并对发酵产物的稳定性及化学性质进行研究。结果显示:优化后的培养基抑制率提高了89.72%;配方为可溶性淀粉45g/L、黄豆饼粉20g/L、(NH;);SO;1 g/L、KCl 1 g/L;发酵条件为起始pH 8、接种量2%、装液量75 mL/250 mL、发酵时间7 d、发酵温度28℃、转速160 r/min。抑菌活性物质能耐受酸性条件但对碱性环境敏感,不能耐受60℃以上高温,对紫外光照有很好的稳定性。经正丁醇萃取可获得较大量的抑菌活性物质,表明活性产物的化学极性较低。菌株S-03发酵液能有效抑制疫霉菌丝生长,使其皱缩干瘪,对离体植物叶片也有较强的防治效果,防效达到80.00%。研究结果表明,菌株S-03发酵液能有效抑制樟疫霉生长,活性物质有较好的稳定性及离体叶片防治效果,具有良好的应用前景。