摘要：目的:观察抗I型幽门螺杆菌IgY、黄连、太子参体内外抗活性空泡细胞毒素+、细胞毒素相关蛋白A+幽门螺杆菌的效果及其联合应用效果,并筛选出最佳剂量组合。方法:实验于2003-09/2004-03在江西医学院免疫学教研室完成。①中药药液制备:称取样品黄连60g(购自四川省峨眉),加5倍体积的水浸泡30min。称取样品太子参100g(购自安徽省宣州市),加入5倍体积的水浸泡30min后,两者皆用文火煎煮1h,过滤。滤渣各再加5倍体积的水,文火煎煮30min,过滤,合并2次滤液,加热浓缩至含生药1和1.6g/mL2种原液。②体外实验方法:采用琼脂稀释法进行联合应用和各单一成分的体外抑菌实验。联合应用组的剂量设置采用L1837正交设计。体外联合应用实验剂量设定:IgY的1,2,3分别表示5,10,20g/L;黄连及太子参的1,2,3分别表示20,40,60g/L。③体内实验方法:选用昆明种小鼠100只,6～8周龄。联合应用组的剂量设置采用L1837正交设计。体内联合应用实验剂量设定:IgY的1,2,3分别表示5,10,20mg;黄连的1,2,3分别表示15,30,60mg;太子参的1,2,3分别表示45,90,180mg。单一成分组及对照组采用中间剂量。④动物分组:各单一成分分组和联合应用组。除健康对照组外,所有小鼠经灌胃幽门螺杆菌液0.5mL/只(浓度1×1012CFU/L),每间隔12h重复1次,共3次。建立昆明系小鼠胃黏膜幽门螺杆菌感染模型。取30只小鼠按随机区组法分为5组并编号(1～6号):IgY组、太子参组、黄连组、枸橼酸铋钾组、生理盐水组。在造模后4周给药,前4组分别灌胃10,90,30,0.9mg相应药液0.5mL/只。生理盐水组和健康对照组(未造模,n=6):灌胃0.5mL蒸馏水和无菌生理盐水。1次/d,重复5d。体内实验联合应用组(n=36)按L1837正交设计表进行实验,重复1次。并观察小鼠胃黏膜的病理变化。⑤体外实验评分标准:共分为菌苔、尿素酶、H2O2试验、涂片4项,每项5分。分数越高,感染越严重。体外单一成分各组用综合评分确定最低抑菌浓度。⑥体内实验评分标准:共包括Warthin-Starry染色、苏木精-伊红染色、尿素酶试验三大项,每项15分,共45分。分数高,感染越严重。⑦体内单一成分各组方差分析SNK法及联合应用组的体外体内实验均用正交设计的方差分析进行数据处理。结果:①昆明系小鼠胃黏膜幽门螺杆菌感染模型:实验小鼠在感染4和8周后,胃黏膜涂片镜检、尿素酶试验及组织病理学Warthin-Starry染色检查均阳性,幽门螺杆菌感染率100%。②体外抑菌实验结果:联合应用组实验结果:黄连、太子参是综合评分的主要影响因素(P0.05),其最低抑菌浓度分别为40和60g/L。各单一成分组实验结果:黄连、太子参均有明显抑菌效果,其最低抑菌浓度分别为50和80g/L。③体内实验结果:联合应用组实验结果:黄连、IgY对综合评分起主要作用(P<0.05),太子参与黄连,太子参与IgY之间均有协同作用(P<0.05)。联合应用组中17号小鼠已经完全康复(综合评分为0),即3种成分均在中间用量时(IgY10mg,黄连30mg,太子参90mg),疗效最好。单一成分组实验结果:IgY、黄连、太子参、实验阳性对照对综合评分均有影响(P<0.05)。IgY对幽门螺杆菌及炎症转归均有影响(P<0.05)。结论:①当IgY10mg、黄连30mg、太子参90mg联合应用时,黏膜损伤和炎症反应消失,幽门螺杆菌被根除。②IgY是一种较为理想的免疫治疗剂。③黄连用量为5或10mg/只小鼠时,在体外和体内都能抑制幽门螺杆菌。

摘要：目的探索“主线教学一课题设计”为基础的课堂讨论法在免疫学教学中的作用。方法选择药学系2008级和2009级2届五年制学生进行新的教学方法的试点。教学方法包括主线教学、课题设计、课堂讨论和实验操作。通过问卷调查和考试成绩比较，分析评价教学效果。结果问卷调查结果显示，73．5％以上的实验班学生认为“主线教学一课题设计”为基础的课堂讨论法有助于激发学习热情及提高综合能力；经t检验，实验班与对照班学生平均成绩比较，差异有统计学意义（P=O．0028）。结论“主线教学一课题设计”为基础的课堂讨论法是免疫学教学的有效方式，值得进一步推广应用。

摘要：目的为了获得粉尘螨铁蛋白(ferritin)蛋白,并对该蛋白特征进行分析。方法根据铁蛋白基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白基因,PCR产物克隆入pET32a载体,构建的重组质粒pET32a-ferritin,经酶切和测序鉴定后,再转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化其重组蛋白。用生物信息学方法对粉尘螨铁蛋白的特征进行分析。结果成功克隆粉尘螨铁蛋白基因并构建了pET32a-ferritin重组质粒;粉尘螨铁蛋白基因开放阅读框为543bp,编码179个氨基酸,PI 5.35;SDS-PAGE结果表明铁蛋白基因在大肠杆菌Bl21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,表达产物分子质量约为20kD。经生物信息学分析,粉尘螨铁蛋白含有8个丝氨酸激酶、7个苏氨酸激酶、7个酪氨酸激酶、0组氨酸激酶磷酸化位点,亲水区域大于疏水区域,属不稳定蛋白。结论克隆、表达了尘螨铁蛋白,经纯化后获得较高纯度的重组蛋白,并对其三级结构进行分析,为进一步研究尘螨过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。

摘要：目的探讨左氧氟沙星与奈替米星联合应用的抗生素后效应(PAE)。方法采用微量稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),采用棋盘设计、菌落计数法测定其PAE。结果奈替米星与左氧氟沙星对大肠杆菌的PAE最长,金黄色葡萄球菌次之,铜绿假单孢菌最小,两者合用后对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌PAE表现出明显的协同作用,对铜绿假单孢菌表现出协同或相加作用,单用与合用后PAE均呈浓度依赖性。结论两者联用可明显延长其PAE,联合应用优于单独使用。

摘要：目的获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原(Der f16)的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中。扩增后,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切将目的基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌(*** BL21)中经IPTG诱导表达。表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性。结果以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物。重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE反应,而不与健康者血清中的IgE反应。结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白。