摘要：目的:预测和设计蛇毒C型凝集素家族蛋白(CLPs)共同B细胞抗原表位肽。方法:利用expasy蛋白质数据库在线软件Align对CLPs进行序列比对。运用DNAstar和Antheprot软件对蛇毒CLP家族的二级结构和表面特性,如亲水性、表面可及性、免疫原性、柔韧性等,综合各结果预测其抗原表位。采用Swiss-model和SEPPA在线工具进行三维结构和空间表位预测。结果:蛇毒CLP家族存在多个潜在的抗原表位位点,其中46～58区和98～110区肽段为可能的B细胞表位区。结论:综合考虑以上2个肽段家族同源性和表面特征,确定N端附近的46KTWADAEKFCTEQ58为蛇毒CLP可能的共同抗原区。

摘要：目的构建沉默人鞘磷脂合酶1(SMS1)和鞘磷脂合酶2(SMS2)基因表达的重组干扰载体,为进一步研究人SMS1和SMS2基因与动脉粥样硬化及其他疾病发生的关系提供研究基础。方法根据基因序列数据库中报道的人SMS1和SMS2基因序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计并合成用于构建人SMS沉默载体的DNA寡核苷酸,应用基因重组技术分别和线性化pSUPER干扰载体连接,构建了pSUPER-SMS1和pSUPER-SMS2重组干扰载体,并用EcoRI和HindIII限制性内切酶同时处理重组载体pSUPER-SMS1和pSUPER-SMS2,随后测序,以鉴定重组干扰载体含有目的序列。同时为检测重组干扰载体对人SMS1和SMS2基因的干扰效率,本研究利用脂质体(Lipofectamine 2000)分别转染肝癌细胞HepG2,于48h后分别检测HepG2细胞SMS1和SMS2mRNA的转录水平与SMS酶活(薄层层析法,TLC)。结果所筛选到的重组质粒pSUPER-SMS1和pSUPER-SMS2经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后获得了281bp DNA片段,且测序结果和理论设计的DNA寡核苷酸一致;随后检测转染HepG2细胞后SMS1和SMS2的mRNA表达水平。实验结果显示SMS1和SMS2的表达分别下降了45%和67%(P<0.001,n=3),而TLC法的酶活结果检测显示,SMS1和SMS2干扰后的SMS酶活均有显著下降,分别下降了56%和63%(P<0.001,n=3)。结论成功构建了人SMS1以及SMS2基因的沉默载体即pSUPER-SMS1和pSUPER-SMS2。

摘要：目的设计华游蛇血清PLIγ模拟肽并研究其对PLA2抑制作用。方法用RT-PCR方法克隆华游蛇PLIγ基因并测序进行序列比对。基于华游蛇PLIγ序列设计一个长度为19个氨基酸的多肽。利用Auto dock分子对接分析该19肽与sPLA2相互作用,运用琼脂糖平板法验证其对sPLA2的抑制效果,并通过小鼠实验进一步检测其抗sPLA2出血毒性。利用LPS诱导小鼠Raw264.7细胞炎性反应,检测细胞花生四烯酸含量以评价19肽对细胞sPLA2酶活性抑制作用。结果设计得到的华游蛇PLIγ模拟肽序列为PGLPLSYPNGGGGSVAFRS。该19肽较好地抑制蛇毒PLA2酶活性和出血毒性,并可以显著减少LPS诱导Raw264.7炎性细胞中花生四烯酸含量,IC50为86.3μmol/L。结论本文设计的华游蛇PLIγ模拟肽,具备了天然PLIγ的活性,具有抗细胞炎性反应和蛇毒出血毒作用。

摘要：生动活泼的课堂教学是老师和学生们的共同目标。生动的教学可以减轻学习疲劳、提高效率、增加兴趣。生物化学是一门典型的枯燥学科,且抽象复杂,学生的畏学情绪较为普遍。本文从课前准备、课堂设计、讲课技巧和教学手段等方面,探讨了让生化课程生动化的方式方法,也介绍了一些经验,供同行们参考。

摘要：生物化学是一门极具应用性的医学专业基础课程。该学科理论知识较为抽象且知识点之间关联复杂,在"教"与"学"两个方面都具有一定的难度。如何有效利用常规实验教学,激发学生的好奇心,加深其对相关理论知识的理解,进而解决实际问题一直是教师关注的重点话题。本教学团队在实践中尝试建立定向探索型实验教学模式,打破既有的教学习惯,充分体现以学生为主体的教学理念。在教学中鼓励学生在既定教学内容的框架下主动提出科学问题并通过自主设计/实施相应实验进行探索。这一实验教学模式的应用可更有效地辅助学生实现生物化学理论知识的内化并培养其自主、创新思辨能力,同时也打破了教师长期养成的固化教学形式,切实体现出教学相长的魅力。

摘要：目的探讨人类巨细胞病毒(HCMV)在胶质瘤组织中的表达,为阐述HCMV感染在胶质瘤发病中的作用提供依据。方法以HCMV糖蛋白B(UL55)基因设计引物,对62例不同级别星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤组织和7例外伤脑组织DNA进行巢式PCR检测。结果 62例中58例检测出HCMV基因片段,7例正常脑组织未检测出HCMV基因片段。结论星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤患者存在HCMV感染,HCMV感染可能在胶质瘤发生、发展中起作用。

摘要：目的构建干扰表皮生长因子受体(EGFR)的pSilencerTM-EGFR表达质粒,转染入非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株,为观察对EGFR的沉默效应奠定基础。方法①根据人类EGFR的mRNA序列,设计4条干扰片段,以pSilencerTM2.1-U6-hygro质粒为载体,构建shRNA重组体,转化入DH5α大肠杆菌,提取质粒,进行酶切和测序鉴定;②采用脂质体2000分别转染人类非小细胞肺癌细胞株A549,用潮霉素(Hygromycin B)筛选阳性克隆。结果①经酶切及测序鉴定,成功构建了针对EGFR的4种重组干扰质粒,分别命名为pSilencerTM-EGFRⅠ、pSi-lencerTM-EGFRⅡ、pSilencerTM-EGFRⅢ和pSilencerTM-EGFRⅣ;②成功转染A549细胞,经筛选后得到稳定表达的细胞克隆。结论利用RNAi技术原理成功构建针对EGFR的shRNA重组质粒,并转染入A549细胞。

摘要：目的建立四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(tetra-primer amplification refractory mutation system polymerase chain reaction,T-ARMS-PCR)检测白细胞介素1A基因3'UTR插入/缺失多态性的方法。方法使用试剂盒提取100例志愿者血样的基因组DNA,设计四引物检测白细胞介素1A基因3'UTR插入/缺失多态性的引物,对PCR的反应体系和扩增条件优化后对100例样本分型。DNA测序验证四引物法的准确性。结果 100例样本中Del/Del基因型39例,Ins/Ins基因型10例,Ins/Del基因型51例。DNA测序与四引物法的分型结果完全一致。结论四引物法可以实现白细胞介素1A基因3'UTR插入/缺失多态性的快速、简便、低成本检测。