摘要：目的研究甲基化结合蛋白MeCP2对肺癌细胞A549增殖的影响。方法针对GeneBank中MeCP2基因的不同靶点,设计并合成两条DNA干扰序列,克隆到真核表达载体pSilencer-2.1-U6,构建能够转录形成MeCP2-shRNA的重组质粒pSilencer-MeCP2,经PCR、测序鉴定正确后,稳定转染A549细胞,在mRNA和蛋白水平观察两重组质粒对MeCP2的干扰作用,MTT法检测对细胞增殖能力的影响。结果成功构建两个针对MeCP2不同靶序列的shRNA真核表达质粒,两质粒在mRNA和蛋白水平可以使MeCP2表达明显下调,稳定转染两质粒的A549细胞增殖能力明显减弱。结论甲基化结合蛋白MeCP2参与了肺癌细胞的恶性增殖。

摘要：目的利用RNA干扰（RNAi）技术，将携带表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌细胞株A549细胞，观察其对A549细胞生长抑制作用及对顺铂敏感性的变化。方法根据RNAi原理，体外设计并合成靶向EGFR特异性干扰片段，即h-EGFR，以pGensil-1为载体，构建重组质粒pGensil-1-EGFR，以Lipofectamine 2000介导转染肺腺癌细胞株A549细胞，经G418筛选后挑选出稳定转染的单克隆细胞。将所挑选出的单克隆细胞大量培养后加入不同浓度顺铂（40mg／L、10mg／L、2．5mg／L），采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞活力，绘制生长曲线，流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡的变化，观察RNAi对A549细胞抑制作用及是否与顺铂有协同作用。结果与对照组、阴性对照组相比，从第2天起实验组生长缓慢，吸光度有统计学差异（P〈0．05）；顺铂或联合dsRNA-EGFR对A549细胞有抑制作用，且随着浓度的增加和时间的延长抑制作用增强，dsRNA—EGFR联合顺铂与等浓度顺铂吸光度有统计学差异（P〈0．05），顺铂作用24h后40mg／L、10mg／L、2．5mg／L顺铂抑制率分别提高了7．8％、30．70％、34．42％。实验组G0／G1细胞百分比较对照组增加了13．84％，较阴性对照组增加了14．65％，进入S期的细胞百分比较对照组减少了19．10％，较阴性对照组减少了18．68％；40mg／L、10mg／L、2．5mg／L顺铂处理细胞24h后，与对照组相比，凋亡率明显增高（P〈0．05），且浓度越高，凋亡率越高；同一浓度顺铂作用下转染pGensil-1-EGFR的A549细胞凋亡率较A549细胞增高（P〈0．05）。结论dsRNA-EGFR可有效抑制A549细胞生长，使细胞阻滞在G0-G1期，顺铂可有效诱导细胞凋亡，RNAi与顺铂具有协同效应，提高细胞对顺铂的敏感性，RNAi技术为非小细胞肺癌基因治疗提供了新策略。

摘要：目的构建针对人甲基化结合蛋白MeCP2的shRNA真核表达质粒,稳定转染肺腺癌细胞A-549观察其对MeCP2表达的影响。方法根据MeCP2的mRNA序列,利用Ambion网上设计软件设计两条针对该基因不同靶点的shRNA干扰序列,克隆到线性化的质粒载体上,PCR、测序鉴定插入成功,且插入方向正确。转染A-549细胞,观察其在mRNA和蛋白水平对MeCP2的影响。结果成功构建两个MeCP2的shRNA真核表达质粒,并稳定转染到肺癌细胞A-549中,两个真核表达质粒在mRNA水平和蛋白水平对MeCP2有明显的抑制作用。结论人MeCP2的shRNA真核表达质粒成功构建及鉴定为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

摘要：目的 了解我国因支气管哮喘（哮喘）急性发作住院患者的临床特征及住院费用情况.方法 回顾性调查并分析全国29个省、自治区、直辖市的29家三级甲等医院2013-2014年因哮喘急性发作入院的患者.通过事先设计的病例报告表搜集患者的一般资料、入院前情况、治疗转归、并发症、住院费用及其构成等信息,并对住院费用的影响因素进行了分析.结果 共纳入3 240例患者,男性1 369例（42.3％）,女性1 871例（57.7％）.41.5％（1 346/3 240）的患者在入院前1年之内曾因哮喘急性发作住院治疗或急诊就诊,仅28.0％ （907/3 240）的患者在入院前规律应用哮喘治疗药物.共有73例（2.3％）入住重症监护室（ICU）,并应用机械通气.8例患者死亡,哮喘急性发作住院患者病死率为0.25％.所有患者住院费用中位数为9045（6 431,13 035）元,其中药品费占52.1％,辅助检查费占27.6％,治疗费占9.6％.药品费中,哮喘治疗药物费用仅占22.7％,而抗菌药物占44.0％.住院费用随着哮喘急性发作严重程度的增加而增加,入住ICU、应用机械通气、合并肺炎及入院前1年内有因哮喘急性发作住院或急诊就诊史患者的平均住院费用更高.结论 我国因哮喘急性发作住院的患者中女性占多数,不规律用药的患者比例高.我国哮喘急性发作患者的住院病死率低于国外文献报道.哮喘急性发作患者的单次住院费用显著高于哮喘患者全年维持治疗费用.药品费用占住院费用的大部分,而在药品费用中,抗菌药物所占比重最高.

摘要：目的了解孕妇对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)的认知情况及打鼾者接受多导睡眠图监测的依从性。方法2016年4月至2017年4月,在中国人民解放军联勤保障部队第九〇八医院及江西省妇幼保健院就诊或住院且自愿接受调查的孕妇589例纳入研究。采用自行设计的调查问卷调查孕妇对OSAS的认知情况(0分表示完全缺乏OSAS相关知识;1~4分表示对OSAS有部分认知;5分表示可以正确认知OSAS)及相关知识的获取途径。分析孕周、文化程度、打鼾情况及是否高危孕妇等对OSAS的认知情况的影响;分析打鼾孕妇对多导睡眠图监测的依从情况。采用χ2检验进行统计学分析。结果589例孕妇对OSAS疾病认知率普遍偏低,正确认知OSAS者(得5分)仅11例,占1.9%(11/589)。低学历孕妇完全缺乏OSAS相关知识者(得0分)的比例较高学历孕妇高[61.9%(78/126)与52.0%(241/463),χ^2=3.873,P=0.049]。不知是否打鼾孕妇缺乏OSAS相关知识者(得0分)的比例较知晓有、无打鼾孕妇高[67.0%(209/312)与35.6%(21/59)和40.8%(89/218),χ^2值分别为20.755和35.687,P值均0.05)。共59例孕妇打鼾,其中接受多导睡眠图监测者仅15例,占25.4%;8例孕妇确诊为妊娠合并OSAS,占1.4%(8/589)。结论孕妇对OSAS疾病认知率低,尤其是低学历者以及不知晓自己是否打鼾的孕妇。认知不足导致打鼾孕妇接受多导睡眠图监测依从性差,故妊娠合并OSAS患者诊断率低。