摘要：目的应用siRNA干扰技术抑制人肝细胞癌系HepG2细胞MTH1基因表达,并研究MTH1基因干扰后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响。方法设计并化学合成3对特异性MTH1-siRNA,采用阳离子脂质体法瞬间转染肝癌HepG2细胞,离体培养肝癌HepG2细胞,并设正常对照组、阴性对照组及MTH1-siRNA1、MTH1-siRNA2、MTH1-siRNA3转染组。采用蛋白印迹(Western blot)法检测转染MTH1-siRNA后HepG2细胞MTH1蛋白水平表达的变化,并筛选干扰效果最佳序列。运用流式细胞技术和划痕实验检测转染siRNA-MTH1后HepG2细胞凋亡、体外迁移能力的变化。结果 MTH1-siRNA3转染组干扰效果与正常组和阴性对照组相比效果具有统计学意义(P=0.002,P=0.005)。MTH1-siRNA3转染组细胞凋亡率高于正常组及阴性对照组,差异有统计学意义(P=0.012,P=0.013);MTH1-siRNA3转染组细胞的划痕24、36 h愈合率均低于正常组和阴性对照组,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.000)。结论 MTH1在肝癌细胞的凋亡及迁移中起重要作用,干扰MTH1的表达能促进肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力。

摘要：目的设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2(BMP-2)的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响。方法阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测转染BMP-2-siRNA后细胞BMP-2mRNA水平和蛋白水平的变化,MTT法和流式细胞术检测转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞增殖、细胞周期和凋亡的变化。结果 3对特异性BMP-2-siRNA均有效地抑制了BMP-2基因的表达,以siRNA-B抑制效果最好。转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05)且明显促进了SMMC7721细胞的凋亡。结论靶向BMP-2基因的siRNA分子片段可以有效地抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖并促进其凋亡。

摘要：目的:研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)小干扰RNA(siRNA)是否通过NF-κB信号途径下调Bcl-2而抑制宫颈癌细胞的增殖。方法:设计并合成针对TLR4基因的3条特异性siRNA)及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体LipofectamineTM2000转染细胞。通过半定量RT-PCR和Western印迹法分别检测转染前后He La细胞中TLR4 mRNA和蛋白表达水平,Western印迹法检测p65及Bcl-2蛋白表达水平,MTT法和平板克隆检测细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期。结果:3条针对TLR4基因的siRNA均能抑制TLR4的mRNA和蛋白表达,其中TLR4-siRNA-003的沉默效率最高。转染TLR4-siRNA-003 48 h后细胞中TLR4的mRNA和蛋白表达水平分别下调62%和89%,p65及Bcl-2蛋白水平明显下调,同时细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率显著升高,细胞周期被阻滞于G1期。结论:TLR4特异性siRNA能够有效沉默TLR4基因表达,并通过NF-κB信号通路下调Bcl-2而显著抑制宫颈癌He La细胞的增殖。TLR4可能成为治疗宫颈癌的一个新靶点。

摘要：背景与目的:原发性肝细胞癌是我国常见的恶性肿瘤之一,近期研究发现骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)信号通路在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。本研究采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制骨形态发生蛋白受体Ⅱ(bone morphogenetic protein receptor,BMPR-Ⅱ)表达,观察抑制效果及抑制BMPR-Ⅱ表达后对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响。方法:设计并化学合成针对BMPR-Ⅱ的3对小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),阳离子脂质体法瞬间转染HepG2细胞。采用离体培养肝癌HepG2细胞,并设正常对照组、空白对照组、阴性siRNA组及siRNA-BMPR-Ⅱ-a、siRNA-BMPR-Ⅱ-b、siRNA-BMPR-Ⅱ-c转染组。各组培养48 h后,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测HepG2细胞中BMPR-Ⅱ在mRNA和蛋白水平表达的变化,MTT比色法及Transwell侵袭实验检测转染后细胞增殖及侵袭的变化。结果:RT-PCR、Western blot显示,3个特异性siRNA-BMPR-Ⅱ转染组转染48 h后,其BMPR-Ⅱ的mRNA和蛋白表达与另外3组比较受到明显抑制,以siRNA-BMPR-Ⅱ-a转染组抑制效果最明显(0.70±0.06、0.45±0.10,P<0.05)。MTT比色法及Transwell侵袭实验显示,转染48 h后,siRNA-BMPR-Ⅱ-a转染组HepG2细胞的生长及穿膜数(48.27%±0.76%、25.20±1.60,P<0.05)明显低于正常对照组(82.64%±0.67%、60.40±1.39)及阴性对照组(81.21%±0.80%、59.50±1.85)。结论:siRNA干扰介导BMPR-Ⅱ基因沉默可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和侵袭,BMPR-Ⅱ可作为肝癌抗肿瘤治疗的新靶点。

摘要：目的设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic proteins,BMP-2)的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的影响。方法设计并化学合成针对BMP-2的3个siRNA分子序列,阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测细胞中BMP-2在mRNA水平和蛋白水平的变化,体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的变化。实验共分6组,①正常对照组;②空白对照组;③阴性对照组;④～⑥分别为BMP-2-siRNA-A、BMP-2-siRNA-B、BMP-2-siRNA-C转染组。结果RT-PCR和Western blot显示3对特异性BMP-2-siRNA转染肝癌细胞SMMC7721之后,其BMP-2的基因和蛋白表达均受到抑制,以siRNA-B抑制效果最明显[(0.32±0.07)vs(0.92±0.14),(0.37±0.10)vs(0.89±0.17),P<0.01]。体外侵袭实验显示转染后肝癌细胞数明显低于未转染组和阴性对照组[分别为(6.48±3.62)、(23.72±3.24)、(22.38±3.84),P<0.05]。结论BMP-2与肝癌的侵袭转移潜能相关,siRNA-BMP-2能明显抑制肝癌细胞SMMC7721的BMP-2表达,从而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。

摘要：目的:采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)的表达,观察BMP7基因沉默对人肝癌Hep G_2细胞增殖和迁移的影响.方法:设计并化学合成针对BMP7的3对小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),使用Trans Lipid&#174;HL Transfection Reagent瞬时转染人肝癌Hep G_2细胞,并设正常对照组、Negative-si RNA组及BMP7-si RNA-1、BMP7-siRNA-2、BMP7-siRN A-3转染组.运用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)和Western blot法分别从m RNA和蛋白水平检测Hep G_2细胞中BMP7的表达变化,选取沉默效果最明显的si RNA片段进行后续实验.采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3)表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.结果:RT-PCR和Western blot结果显示,BMP7-s i R N A-3转染组B M P 7抑制效果最明显(P<0.01),选取BMP7-si RNA-3转染组进行后续实验.MTT比色法显示,转染后48,72 h细胞生长增殖均受到抑制(P<0.01).Transwell迁移实验显示,转染24 h后,BMP7-si RNA-3转染组Hep G_2细胞穿膜数均明显低于正常组和Negative-si RNA组(P<0.01).Western blot检测发现BMP7-si RNA-3组比对照组的细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达增加(P<0.01),Bcl-2表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测发现转染后48 h,BMP7-si RNA-3组Hep G_2细胞被阻滞在G_2期(P<0.01).结论:si RNA介导BMP7基因沉默对人肝癌H e p G 2细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G_2期.

摘要：目的对比分析鼻咽癌采用的三维适型放疗(3D-CRT)和常规放疗在照射靶区和周围正常组织及危及器官的剂量分布。方法选择36例首治鼻咽癌,首程常规面颈联合野,在放疗后程全组病例进行CT模拟定位,用三维计划系统(3D-TPS)为每位病例设计3D-CRT方案,同时再设计双耳前野及双耳前野+鼻前野方案。通过3种方案剂量体积直方图(DHV)和剂量截面分布图所显示的数据,评价靶区最小剂量(Dmin)、平均剂量(MTD)、适形度(TVR),危及脑干、颈髓2%体积最大剂量(Dmax)、50%体积受量(D50),重要器官咬肌、腮腺、颞颌关节平均剂量(MD)、50%体积受量(D50)。结果 3D-CRT方案与常规双耳前野放疗方案比较,除危及器官D50差异无统计学意义(P>0.05)外,其余指标差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);3D-CRT方案与常规双耳前野+鼻前野方案比较,各指标差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论在鼻咽癌放疗后程,采用3D-CRT方案比2种常规放疗方案能有效地保护脑干、颈髓,同时提高靶区适形度和靶区最小剂量及平均剂量,并能减少腮腺、颞颌关节和咬肌的平均剂量和50%体积受量,使其得到尽可能少照射。

摘要：目的验证鼻咽癌患者采用调强放射治疗时摆位的精确度和重复性,分析摆位误差的分布情况,为治疗计划设计设置计划靶体积时提供依据。方法根据治疗计划靶区中心,通过设置机架270°和90°两个方向的摆位验证野,重建出的射线影像(DRR)图与电子射野验证图像进行比对,计算摆位误差。结果 X、Y、Z方向:系统误差分别为2.1、2.0、2.1mm,随机误差分别为1.0、1.1、1.1mm,总的摆位误差分别为2.6、2.4、2.6mm。X方向系统误差、随机误差、总的摆位误差与Y、Z方向比较差异均无统计学意义(均P>0.05),Y方向系统误差、随机误差、总的摆位误差与Z方向比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。应用频数分析三维方向上摆位误差>5mm为3.2%,5～3mm为15.2%,<3mm为81.6%。临床靶区体积与计划靶体积间外扩边界距离计算的结果为:X左右4.90mm,Y腹背4.77mm,Z头脚4.97mm。结论采用体位固定方法及摆位技术对鼻咽癌患者行调强放射治疗,临床靶区体积确定外扩间距5mm至计划靶体积是适宜的。

摘要：目的探讨胃冠状静脉栓塞术联合部分脾脏栓塞术治疗（双介入治疗）肝癌合并门脉高压胃食管曲张静脉破裂大出血的可行性和疗效。方法对11例肝癌合并门脉高压胃食管曲张静脉破裂大出血病人行经皮穿肝胃冠状静脉栓塞术联合部分脾脏栓塞术治疗。结果所有病人手术成功，胃食管曲张静脉得到了有效闭塞。随访3～12个月．其中3个月内再出血仅1例，死亡3例，死亡原因均为肝功能衰竭。结论该治疗方法设计合理，操作方便，并发症少．既降低门静脉压力，又闭塞了曲张的胃冠状静脉及其属支，是治疗肝癌合并门静脉高压胃底食管曲张静脉破裂出血的安全有效方法。

摘要：目的：探讨同步整合加量调强放射治疗颈及胸上段食管癌的近期疗效与安全性。方法对30例颈及胸上段食管癌患者行调强放射治疗：采用5野或7野同步整合加量调强技术进行逆向计划设计，处方剂量：计划靶区1（PTV1）给予66 Gy（2．2 Gy＆#215;30次）的剂量照射；PTV2给予54 Gy（l．8 Gy＆#215;30次）的剂量照射。评价其近期疗效及急性放射反应情况。结果30例患者均顺利完成治疗，中位随访期为30个月（20～38个月），随访率为100％。30例患者完全缓解26例（86．7％），部分缓解4例（13．3％），有效率为100％；1、2、3年生存率分别为65．0％、42．4％和33．5％。多数病例出现放射性食道炎，放射性气管炎，均为1-2级，无须特殊处理；无骨髓抑制及急性心脏损伤。结论同步整合加量调强放射治疗颈及胸上段食管癌有较高的局控率，近期疗效满意，急性放射反应可耐受。