摘要：目的:构建与鉴定靶向大鼠海马干细胞(neural stem cells,NSCs)信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription factor3,STAT3)shRNA慢病毒载体。方法:设计并合成4条靶向大鼠STAT3基因的shRNA干扰序列(shRNA1、2、3、4)及1条阴性对照序列(negative control,NC),将其分别重组于慢病毒载体,慢病毒包装后感染大鼠海马神经干细胞,荧光显微镜下通过观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达计算慢病毒感染效率;利用RT-PCR和Western Blot检测干扰后大鼠海马NSCs中STAT3的mRNA和蛋白质表达水平。结果:干扰序列测序结果正确;感染指数(multiply of index,MOI)为1∶20时感染效率最高为85.6±3.14%;感染大鼠海马NSCs 72 h后利用RT-PCR和Western Blot检测干扰效率发现shRNA1干扰效率最好,其基因水平干扰效率为81.3%±4.22%;蛋白水平干扰效率为72.3%±5.12%。结论:成功构建靶向大鼠海马干细胞STAT3慢病毒干扰载体,并通过筛选发现shRNA1能有效抑制NSCs的STAT3 mRNA和蛋白表达,为研究海马NSCs分化机制奠定了工作基础。

摘要：目的通过下调脑挫伤细胞中laminin,观察其对新生大鼠皮质神经干细胞迁移能力的影响。方法设计合成下调大鼠laminin的siRNA并转染至大鼠脑挫伤细胞,realtime PCR检测脑挫伤细胞中laminin基因水平siRNA干扰效率;westernblot检测脑挫伤细胞中laminin蛋白水平siRNA干扰效率;迁移实验检测神经干细胞迁移率。结果大鼠脑挫伤细胞转染下调laminin的siRNA后,laminin基因表达水平下降(71.35±4.26)%,laminin蛋白水平较对照组下降(50.1±3.45)%;迁移实验显示siRNA组神经干细胞迁移能力下降,P<0.05。结论下调脑挫伤细胞中laminin表达,可以抑制神经干细胞迁移能力,因此尽量保存脑外伤中挫伤组织有利于损伤区域神经再生。