摘要：目前我国有1亿乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)携带者,其中大多数系幼龄感染HBV,处于免疫耐受状态,而不能有效地产生免疫应答以清除病毒。我们用鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染1日龄幼鸭,获得DHBV DNA及病毒表面抗原(DHBsAg)持续阳性的动物模型,类似HBV的免疫耐受状态。为探讨逆转免疫耐受状态的途径,本文设计了改变DHBsAg的提呈方式,用固相抗体-抗原(Solid matrix antibody-antigen,SMAA)复合物给耐受动物注射,结果部分耐受鸭DHBsAg转阴,并出现了抗-DHBs。

摘要：目的为从全基因水平研究乙型肝炎病毒变异与致病性的关系，建立血清标本经聚合酶链反应（ＰＣＲ）加酶切方法扩增及克隆ＨＢＶ全基因组的新方法。方法设计了含ＳｐｅⅠ，ＳａｌⅠ及ＳａｐⅠ酶切点的引物，分别扩增１．１５ｋｂ和２．０５ｋｂ的单链及双链ＤＮＡ区。经酶切及连接后获得ＨＢＶ全基因克隆。结果用新建立的方法直接从少量血清中克隆了ＨＢＶ全基因，转染ＨｅｐＧ２细胞可表达抗原并有胞内复制。

摘要：选择鸭乙型肝炎病毒作为核酶的靶病毒，设计针对病毒前基因组Ｓ基因区第１２８８位和１４６９位“锤头状”核酶序列（ＲＺ１和ＲＺ２）。经体外转录及做核酶切割，ＲＺ１和ＲＺ２均有切割作用，以ＲＺ１作用更强。鉴于核酶在相当于鸭体温（４２℃）有切割作用，因此有可能在鸭体内研究其切割作用。

摘要：介绍了使用经绿色荧光蛋白标记的海分枝杆菌侵染巨噬细胞,再利用激光扫描共聚焦显微技术检测分枝杆菌与巨噬细胞溶酶体融合的实验教学设计。该实验对研究分枝杆菌与巨噬细胞的相互作用以及分枝杆菌的致病机制具有重要意义,同时在教学实验中使学生更深入地理解激光扫描共聚焦显微镜检测技术,并培养学生的实践能力和科研创新意识。

摘要：为比较和探讨家族性载脂蛋白Ｂ１００缺陷患者ａｐｏＢ－３５００位突变的检测方法，对４个高胆固醇血症家族的１９名成员，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合酶切法、等位基因特异寡核苷酸（ＡＳＯ）探针杂交法及ＰＣＲ产物序列分析法检测此点突变，并通过定点突变法构建一人工突变体作为阳性对照，以确保试验方法可靠。结果：４个家族１９名成员通过ＰＣＲ结合酶切及ＡＳＯ探针杂交两种方法皆没有检测到ａｐｏＢ－３５００位突变，与测序结果一致；测序结果验证人工构建突变体的１０６５８位核苷酸为Ａ。结论：比较而言，ＰＣＲ结合酶切法是检测ａｐｏＢ－３５００位突变的一种简便而可靠方法；通过设计适当引物在ＰＣＲ产物中引进酶切位点及构建人工阳性对照的方法，是检测点突变疾病的新思路；ａｐｏＢ－３５００位突变不是引起此４个家族成员胆固醇升高的原因。

摘要：目的 建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法 首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果 成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论 本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.

摘要：目的设计、合成一系列新型四氢喹啉-苄基或苯并咪唑多胺类化合物,作为潜在的靶向CXCR4辅助受体的新型抑制剂,并测定其抗HIV-1活性。方法组合HIV-1辅助受体CXCR4抑制剂三氮构效团与CCR5部分药效团,设计并合成一系列新化合物并经1H-NMR、MS表征,用HIV-1ⅢB病毒测定化合物抑制活性。结果与结论设计合成的10个目标化合物未见文献报道。活性测试结果显示,四氢喹啉-苯并咪唑多胺类化合物具有较好的抗HIV活性(IC508μmol/L)。

摘要：Ⅰ型膜融合蛋白(class I membrane fusion protein)在Ⅰ型包膜病毒入侵宿主细胞过程中发挥重要作用。基于抑制六螺旋结构形成的多肽类融合抑制剂设计的原理是模拟该蛋白融合区域的自身序列,与病毒融合蛋白结合形成异源六聚体,从而阻断病毒与靶细胞膜的融合。此类融合抑制剂的传统设计主要基于一级与二级结构,但为进一步强化其抗病毒活性,通常需依赖病毒膜融合蛋白三级结构信息,从而限制了对那些尚无病毒蛋白三级结构信息的新发病毒的多肽类融合抑制剂的快速优化和研发。本研究提出了不依赖蛋白三级结构信息,而利用I-Mutant2.0软件来辅助设计和优化多肽类病毒膜融合抑制剂的设想。根据I-Mutant2.0的预测结果,以中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)为模型,分析该病毒HR2区融合抑制剂序列中若干适合与不适合优化的位点,并设计了一系列多肽。结果发现,对适合优化的位点进行调整的多肽,其对HR1的结合能力及对病毒的抑制活性均有所提升;反之,多肽活性明显下降。结果表明,利用I-Mutant2.0辅助设计与优化病毒融合抑制多肽的方法具有一定的可行性,为进一步开发新的融合抑制剂设计方法奠定了基础。

摘要：目的基于双标记荧光探针熔解曲线分析技术，建立一种利用实时荧光PCR快速检测结核分枝杆菌耐药突变的方法。方法根据结核分枝杆菌一线药物常见耐药突变位点（包括rpoB81bp耐药决定区、inhA启动子、katG315、ahpC启动子以及embB306）设计6条荧光双标记探针和对应引物，通过PCR扩增耐药突变位点所在基因片段，在扩增完成后通过熔解曲线检测分析实现对耐药突变的快速检测。通过对2008年上海市疾控中心收集的76株临床耐多药（MDR）菌株进行检测，验证本方法的敏感度和特异度。结果本方法成功从76株MDR菌株中检测出相关耐药突变，各种突变对应△Tm值范围为1．8～14．4℃。将检测结果和测序结果对比表明该方法检测敏感度和特异度都为100％（rpoB，80／80；inhA，7／7；katG315，59／59；ahpC，8／8；embB306，27／27）。本方法可以成功从最低浓度为100拷贝／μl的结核分枝杆菌DNA样本中准确地检测耐药突变。结论双通道实时荧光PCR熔解曲线法可以快速灵敏地检测结核分枝杆菌常见耐药突变。该方法具有检测迅速准确、结果易判读、交叉污染概率低等特点，可用于快速检测临床结核耐药相关的基因突变，并对结核耐药情况进行评估。（中华检验医学杂志．2013．36：63-67）

摘要：目的 克隆唾液链球菌57.Ⅰ的尿素酶基因,并在不添加外源性镍离子的情况下表达出有活性的尿素酶,以期为进一步研究口腔细菌的尿素分解机制和牙菌斑生物膜的产碱活性提供依据.方法 将尿素酶基因分成前、中、后三段,分别设计引物,应用聚合酶链反应（PCR）法进行克隆并测序鉴定;进而采用双酶切的方法 将分段克隆的产物逐步连接为完整的尿素酶基因;将含有完整尿素酶基因的质粒转化感受态大肠杆菌TG-1,经酚红脲酶试验检测其尿素分解活性.结果 所克隆的唾液链球菌57.Ⅰ尿素酶基因序列正确;无需添加氯化镍,该克隆能够在大肠杆菌中表达出有活性的尿素酶,分解培养基中的尿素产生氨,升高环境中的pH值.结论 本研究克隆的唾液链球菌尿素酶基因无需添加外源性镍离子就能够表达出尿素分解活性,可用于今后替代疗法防龋研究中构建更适合临床应用的产碱效应菌.