摘要：目的解析重组人白细胞介素13的二硫键连接方式。方法本研究根据氨基酸序列的特点,设计了胰酶(Trypsin)和胰凝乳蛋白酶(α-Chymotrypsin)的复合的酶切方式,液相分离结合MALDI质谱鉴定分析了重组人白细胞介素13的二硫键定位。结果实验样品中的主要二硫键连接方式为Cys28/Cys56,Cys44/Cys70,与文献报道的白细胞介素13的理论连接方式一致。结论本研究为白细胞介素13的二硫键连接方式的质量控制提供了有效的方法,也为其它多肽/蛋白的二硫键定位研究提供思路。

摘要：目的对表达人ω干扰素(in terferon,ωIFN-ω)的巴斯德毕赤酵母的发酵条件进行优化,确定最佳的发酵控制条件以获得ω干扰素的最高表达量。方法设计三因素三水平正交实验方案,用直观分析法分析来确定出最佳的发酵条件。结果用FBS培养基发酵的最佳条件是:温度28℃,溶氧50%,甲醇浓度1%,pH 7.0。结论通过发酵条件优化后,ω干扰素表达量达到了90m g.L-1。

摘要：目的采用DOE试验方法对重组人干扰素α2a纯化工艺参数进行优化,并寻找各参数的操作空间,为实际的产品生产提供指导。方法利用DOE中的中心符合表面设计(CCF)模型,设置两个响应值目标蛋白纯度和得率,对重组人干扰素α2a纯化工艺的疏水层析精纯进行优化并找出操作空间。选取两个工艺参数,即洗脱液B的(NH4)2SO4浓度(0.60M·L-1~0.70M·L-1)和洗脱液C的(NH4)2SO4浓度(0.30M·L-1~0.40M·L-1)。结果从模型的线性、正确性、有效性和重复性判断,所建立的模型拟合度高,可较为准确的预测实验结果。其中,洗脱液B的(NH4)2SO4浓度、洗脱液C的(NH4)2SO4浓度以及各自的平方对响应值有显著影响。同时,利用sweet spot找出关键层析步骤的操作空间。