摘要：人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起5岁以下儿童急性下呼吸道感染的主要病原体之一,至今尚无安全有效的预防RSV感染的疫苗。融合(F)蛋白是目前RSV疫苗研发的主要抗原靶标,存在prefusion(pre⁃F)构象和postfusion(post⁃F)构象,而pre⁃F构象蛋白上含有诱导机体产生高效中和抗体的中和表位。因此,在靶向pre⁃F蛋白疫苗研发前期工作中,对于F蛋白两种构象形式相对含量的评估可以进一步指导RSV疫苗免疫原再设计。目前已报道的F蛋白抗体大多识别pre构象,本研究拟开发出一种特异性识别post⁃F蛋白的工具抗体,希望能够评估post⁃F蛋白的相对含量。通过RSV A2 post⁃F重组蛋白免疫小鼠获得了特异性识别post⁃F蛋白的鼠源抗体12A12,结果显示12A12对于post⁃F蛋白具有良好的广谱结合活性,并且对不同来源的post⁃F蛋白在不同方法学应用上都有一定的检测能力,表现出成为特异性检测post⁃F蛋白工具抗体的潜力。

摘要：呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起5周岁以下儿童下呼吸道感染的主要病原体.目前常用的试剂盒是美国Diagnostic Hybrids公司研发的7项呼吸道病毒检测试剂盒,但其价格昂贵,且需荧光显微镜辅助诊断,不利于在基层医疗机构中推广,国内尚无上市的快速诊断试剂用于临床检测.为此建立用于RSV抗原检测的早期快速诊断试剂,并以反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测为参比,同时使用酶联免疫吸附分析(ELISA)双抗夹心法和免疫荧光法对112份临床鼻咽抽吸物(NPA)样本进行检测.ELISA双抗夹心法和免疫荧光法的灵敏度分别为79.31%和74.14%,特异度分别为100%和96.30%,Kappa值分别为0.787 1和0.689 5,两者均与RT-PCR检测结果具有高度一致性.此外,将ELISA双抗夹心法与免疫荧光法比较,两者无显著差异(p>0.05).综上,ELISA双抗夹心法操作简便,特异性高,有望代替进口检测试剂盒完成RSV感染的早期快速诊断.

摘要：本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性linker、三聚体折叠序列等方法优化设计。通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEK293T细胞进行gp140蛋白表达,采用镍柱纯化。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70%,每升培养基可获得0.5mg gp140蛋白,并且具有良好的抗原活性,电镜下呈现三聚体结构。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,检测小鼠免疫血清显示gp140蛋白能有效刺激机体产生免疫应答。本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1NL4-3gp140蛋白,为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础。

摘要：假病毒是一种人工制造的嵌合重组病毒颗粒。根据研究需要,可基于不同病毒载体包装系统,使病毒颗粒表面携带其它病毒的包膜蛋白/衣壳蛋白。重组假病毒颗粒具有与活病毒相似的结构及功能,可作为活病毒的替代品用于病毒学研究。本文综述了基于不同病毒载体包装系统的常用假病毒构建策略、影响假病毒构建/滴度的因素及假病毒的新兴应用,以期为高致病性、高传染性病毒的安全研究提供参考思路。

摘要：人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA病毒,主要感染人皮肤上皮细胞和黏膜,持续感染HPV会引起良性和恶性肿瘤,如尖锐湿疣和宫颈癌等多种疾病。HPV早期蛋白E6是引起宿主细胞发生恶性转化的关键致癌蛋白,其参与调节宿主细胞内多个关键的生理生化过程,如促使抑癌蛋白p53的降解、激活端粒酶和降解细胞凋亡相关蛋白Bak(Bcl-2 homologous antagonist/killer)等,进而干扰宿主细胞的生长因子依赖性、细胞凋亡、细胞转录、DNA损伤反应、细胞周期和宿主细胞分化等一系列生命活动。因此,分析阐述HPV致癌蛋白E6的结构与功能,有助于阐明HPV诱发宫颈癌等恶性肿瘤的分子机理,为今后设计治疗性HPV疫苗奠定理论基础。本文就HPV致癌蛋白E6的结构及其生物学功能进行综述。

摘要：人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,持续感染HPV将引起宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病。HPV衣壳蛋白L1和L2中分布着大量中和表位,并具有较强的免疫原性,HPV疫苗可诱导机体产生高滴度的中和抗体并阻碍病毒感染,进而预防宫颈癌等疾病的发生。分析阐述HPV衣壳蛋白中和表位及抗体的中和作用机理,有助于阐明HPV疫苗预防病毒感染的作用机制,为今后设计新一代保护范围更广的HPV疫苗奠定良好的基础。本文就HPV衣壳蛋白中和表位及抗体的中和作用机制进行综述。

摘要：目的了解厦门市在校男性大学生对人乳头瘤病毒(HPV)疫苗的认知和接种意愿及其影响因素,为HPV疫苗的免疫策略提供基础数据。方法采用方便抽样的方法抽取厦门市5所高校1 209名学生,采用自行设计问卷调查研究对象的基本信息、行为习惯、HPV疫苗认知和HPV疫苗接种意愿,并采用Logistic回归分析HPV疫苗接种意愿的影响因素。结果男生中有221名(18.28%)听说过HPV疫苗。465名(38.46%)愿意接种HPV疫苗,城市户籍(OR=1.45,95%CI=1.13~1.86)、医学专业(OR=1.56,95%CI=1.01~2.41)、本科学校(OR=2.43,95%CI=1.69~3.49)、性取向中包括男性(OR=2.29,95%CI=1.27~4.11)、过去12个月有固定性伴侣(OR=2.20,95%CI=1.48~3.28)、听说过HPV疫苗(OR=2.24,95%CI=1.10~4.54)、知道男性可以接种HPV疫苗(OR=3.65,95%CI=1.78~7.46)、知道HPV疫苗接种最佳时期是初次性行为开始前(OR=2.67,95%CI=1.48~4.83)的在校男大学生有更高的HPV疫苗接种意愿。担心疫苗的安全性是男性大学生不愿接种的首要原因(46.12%)。结论厦门市男性在校大学生对HPV疫苗认识比较缺乏,接种意愿较低。有必要开展各种健康教育,以提高男性大学生对HPV疫苗的认知。

摘要：人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌的主要致病因素,多年来人们努力通过研发HPV疫苗来控制HPV相关疾病。虽然预防性HPV疫苗的接种代表了重大的公共卫生突破,但它仅能预防HPV部分型别的感染,并不具有治疗效果,无法防止预先存在的HPV感染进展为恶性肿瘤。而以致癌蛋白E6、E7等为靶点,诱导特异性细胞毒性T细胞的HPV治疗性疫苗可以减轻甚至消除HPV相关高度病变和癌症,因此其研究具有重要意义。本文旨在阐述近年来HPV治疗性疫苗的研究进展,并为以后的治疗性疫苗研究提供指导。

摘要：目的制备新城疫病毒(NDV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(单抗),并用于建立一种可定量检测NDV病毒含量的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测方法(NDV NP ELISA)。方法基于NDV病毒株F48E9获得NP基因,经原核表达方式制备出重组抗原rNP;免疫小鼠制备NDV NP特异性单抗;单抗经HRP标记和配对筛选,建立NDV NP ELISA,分析其特异性、灵敏度、精密度、准确度和检测线性,并分析本方法定量检测的NP含量与PFU病毒滴度的定量相关性。结果建立基于单抗3C10和4E7的NDV NP ELISA,其定量检测NDV rNP的最佳线性范围为0.015~0.250μg/ml(R2=0.9974),回收率在88.4%~106.01%,变异系数小于3.4%;该方法具有良好特异性;该方法定量检测NDV抗原含量与PFU病毒感染滴度有较好的相关性(R2=0.9209)。结论建立NDV NP ELISA,可准确定量检测NDV病毒中的NP抗原含量,为NDV病毒含量的测定提供一种可靠简便的分析方法。

摘要：建立一种通用的检测不同物种来源A组轮状病毒的逆转录实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)。根据轮状病毒保守的NSP5基因的保守序列设计引物和探针,建立并优化RT-qPCR检测体系;同时通过9份轮状病毒毒株和96份临床标本的检测对该方法和目前常用的基于NSP3基因的2种RT-qPCR方法进行灵敏度和检出率的比较。新建立的RT-qPCR方法特异性高,重复性好;与基于NSP3基因的方法相比:(1)在临床标本检测中,检出率无差异;(2)9株培养病毒检测中,NSP5体系可全部检出,两个NSP3对照体系NSP3-1和NSP3-2的检出率分别为78.78%(7/9)和88.89%(8/9);(3)NSP5体系与对照NSP3-1体系灵敏度相当,检测下限比NSP3-2体系低100倍。本研究建立的基于NSP5的荧光定量PCR体系灵敏度高,可检测毒株范围广,为检测不同物种来源的A组轮状病毒提供一种新的选择。