摘要：病原微生物是威胁人类健康的重要因素之一,快速、准确的检测方法对于感染性疾病的诊断具有重要意义。环介导等温扩增(LAMP)是一种恒温扩增方法,具有反应时间短、操作简便、灵敏度高、特异度高、检测成本低等优点,因此被广泛应用于感染性疾病的快速诊断。基于这种情况,该文主要阐述了LAMP的原理、特点及其在临床常见病原微生物检测方面的应用与研究进展。LAMP技术现在已经被应用于病原微生物的检测,且具有较高的灵敏度及特异度,但该技术仍有易产生假阳性、引物设计复杂等不足之处。该文综述了近年来LAMP技术在病原微生物感染中的应用与进展,并对其未来的发展前景进行了展望,以期在资源有限的环境中为病原微生物感染的快速诊断提供合理的研究方向。

摘要：目的探讨针对丙肝病毒5'非编码区内源性核糖体进入位点的锁核酸核酶(LNAzyme)对病毒基因复制与表达的特异性抑制作用。方法设计合成能切割HCV-5'-NCR-IRES位点的DNAzyme、硫代DNAzyme和LNAzyme。实验设对照组和实验组。对照组包括空白对照组、脂质体对照组和无关LNAzyme对照组。实验组包括DNAzyme、硫代DNAzyme组和LNAzyme组。以阳离子脂质体介导转染hep G2.9706细胞,用荧光定量PCR和化学发光技术分别监测24、48和96 h细胞培养上清液中HCV RNA含量及荧光素酶基因表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法监测细胞活性。结果加入核酶后,LNAzyme对HCV RNA复制和荧光素酶基因表达的抑制作用最强(P<0.05),平均抑制率分别为48.02%和53.05%,且随用药时间延长,抑制率呈增高趋势,96 h后,平均抑制率分别为81.21%和84.25%。LNAzyme对细胞活性无影响。结论 LNAzyme能特异性抑制丙型肝炎病毒5'非编码区的基因调控,且优于硫代修饰的DNAzyme。

摘要：目的:探讨针对c-myc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸对肝癌细胞活力和凋亡的影响。方法:设计合成能特异性封闭c-myc基因第二外显子翻译起始区的反义寡核苷酸、硫代寡核苷酸和锁核酸,分别以阳离子脂质体介导转染HepG2细胞,采用RT-PCR检测细胞内c-Myc的mRNA表达变化;Western blot检测细胞内cMyc的蛋白表达变化;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;MTT法检测反义锁核酸的细胞毒性作用。结果:转染第5天后,反义锁核酸组c-Myc的mRNA相对表达量为0.335±0.016,明显低于对照组(P<0.05);c-Myc蛋白相对表达量为0.448±0.037,也明显低于对照组(P<0.01);凋亡细胞比例为32%±6%,显著高于对照组(P<0.05)。结论:针对c-myc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸能有效促进肝癌细胞的凋亡。

摘要：为探讨针对前C/C双靶区反义锁核酸(LNA)对转基因小鼠体内乙肝病毒复制的影响,本文采用完全随机设计分组,经尾静脉给药,实验组注射脂质体包裹的反义LNA片段,对照组分别注射5%葡萄糖液和空脂质体,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术、时间分辨免疫荧光技术、自动生化分析仪等分别检测血清乙肝病毒核酸、乙肝病毒表面抗原、清蛋白、谷丙转氨酶、尿素氮和肌酐等指标浓度;采用免疫组化法检测肝细胞内乙肝病毒核心抗原分布。结果表明,针对前C/C双靶区的反义LNA对乙肝病毒核酸复制、乙肝病毒表面抗原及核心抗原合成均有较强的抑制作用,且抑制效果明显高于单靶区。

摘要：目的探讨针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区的锁核酸体外抑制细胞内病毒复制的作用。方法针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区,利用RNA structure软件分别设计合成锁核酸、硫代寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列,以阳离子脂质体介导转染HepG2.2.15细胞,采用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)、时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)和酶联免疫法(ELISA)分别监测1、3、5和7 d细胞培养上清液中HBV DNA、HBsAg和前S1抗原的含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测锁核酸对细胞代谢的影响。结果加入锁核酸后,对HBV DNA复制、HBsAg和前S1抗原表达均显示有较强的抑制作用,且抑制率随时间呈增高趋势,7 d后抑制率分别达65.99%、67.49%和63.88%。LNA对细胞代谢无明显影响。结论针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区的反基因锁核酸,体外能有效抑制乙肝病毒的复制,既为乙肝病毒治疗提供有效靶位,也为反基因治疗提供理论和实验依据。

摘要：目的探讨针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S编码链的反基因锁核酸(anti-genelocked nucleic acid,Anti-G-LNA)在转基因小鼠体内的抗病毒效果.方法将30只HBV转基因小鼠随机分为5组(n=6),分别为空白对照组(Control)(5%GLU+脂质体)、无关序列对照组(USQ)、拉米夫定对照组(LAM)、反义锁核酸对照组(Anti-SLNA)、反基因锁核酸组(Anti-G-LNA).拉米夫定组用灌胃法;锁核酸经尾静脉注入小鼠体内.采用实时荧光定量PCR检测血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA);酶联免疫法检测血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg);逆转录PCR检测肝脏乙型肝炎病毒S基因mRNA(HBV S mRNA)水平;免疫组织化学检测肝细胞HBsAg水平.结果治疗后的第3、5、7天,反基因锁核酸对HBV DNA抑制率分别为37.18%、50.27%、61.46%,HBsAg抑制率分别为30.17%、44.00%、57.76%,与给药前比较有统计学意义(P<0.05),与各对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).HBV S基因mRNA的相对表达量为0.33、肝细胞HBsAg阳性细胞率为31%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);肝肾功能检查和组织HE染色未发现异常改变.结论针对HBV S编码链设计的反基因锁核酸在转基因小鼠体内具有较好的抗病毒效果,为HBV基因治疗提供理论依据和实验基础.

摘要：目的大多数环状RNA(circular RNA,circRNA)在肝癌中的潜在机制和特定功能仍不清楚。本研究通过生物信息学分析和临床肝癌组织与细胞系研究hsa_circ_0032664在肝癌中的差异表达,并探讨hsa_circ_0032664在肝癌中的生物学功能。方法从基因表达数据库(GEO)中下载与肝癌相关的circRNA数据集(GSE164803和GSE97332),然后利用Rstudio软件进行差异表达分析。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ_0032664在肝癌组织和肝癌细胞系的表达水平,设计干扰片段siRNA干扰hsa_circ_0032664在肝癌细胞系(HepG2、MHCC97H)的表达,通过CCK8实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验验证hsa_circ_0032664在肝癌中的生物学功能。结果生物信息学分析发现hsa_circ_0032664在肝癌中低表达,qRT-PCR结果显示hsa_circ_0032664在肝癌组织和肝癌细胞系中低表达。干扰hsa_circ_0032664在HepG2、MHCC97H细胞中的表达后可促进肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移等恶性行为。结论hsa_circ_0032664在肝癌中表达下调,hsa_circ_0032664可抑制肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移,为肝癌的临床治疗提供新的靶点。

摘要：目的探讨乙型肝炎病毒S基因反义锁核酸(LNA)片段在HepG22.2.15细胞内的抗病毒效果及有效LNA片段筛选。方法设计合成互补于HBVS基因mRNA翻译起始区同一位点的4条不同序列长度LNA片段,以阳离子脂质体介导,作用于HepG22.2.15细胞株,采用ELISA法和实时荧光定量聚合酶链技术(FQ-PCR)分别监测24、48和72 h细胞培养上清液中HBsAg和HBV DNA的含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法监测细胞代谢。结果4条不同序列长度反义LNA均显著抑制HBsAg表达和HBVDNA复制,72 h后最高抑制率分别达72.43%和34.73%。HBsAg分泌量和HBV DNA的拷贝数均明显低于对照组(P<0.01)。LNA对细胞代谢无明显影响。结论针对HBVS基因mRNA翻译起始区的反义LNA片段体外能显著抑制HBV表达,且抑制作用最强序列长度在15～25个碱基之间。

摘要：目的探讨针对增殖相关基因(C-myc)第二外显子翻译起始区的反义锁核酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成能特异性封闭C-myc基因mRNA第二外显子翻译起始区的反义寡核苷酸、硫代寡核苷酸和锁核酸,分别以阳离子半乳糖配体介导转染Hep G2细胞,采用RT-PCR法检测细胞内C-myc的mRNA表达变化;Western blot法检测细胞内C-myc的蛋白表达变化;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;MTT法检测反义锁核酸的细胞毒性作用。结果转染第5 d后,反义锁核酸组C-myc mRNA相对表达量为(0.335±0.016),明显低于对照组(1.014±0.022),差异有统计学意义(P=0.015);C-myc蛋白相对表达量为(0.448±0.037),也明显低于对照组(1.00±0.00),差异有统计学意义(P=0.008);细胞凋亡比例为(32±6)%,显著高于对照组(0),差异有统计学意义(P=0.032)。结论针对C-myc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸能有效抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡。

摘要：目的:探讨针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因翻译起始区反义锁核酸(LNA)片段在HepG22.2.15细胞内抗病毒效果及有效LNA序列筛选.方法:设计合成互补于HBVS基因mRNA翻译起始区同一位点的4条不同序列长度LNA片段及无关对照序列,以阳离子脂质体介导,作用于HepG22.2.15细胞,采用ELISA法和FQ-PCR法分别监测24、48和72h细胞培养上清液中HBsAg和HBVDNA的含量;MTT法检测LNA对细胞代谢的影响.结果:4条不同序列长度(10、15、20及25个碱基)的反义LNA对HBsAg的表达和HBVDNA的复制均有显著性抑制作用,72h后的抑制率分别为46.58%、54.38%、72.43%、69.92%及27.09%、28.77%、34.71%、32.68%,且抑制率随时间呈增高趋势.LNA对细胞代谢无明显影响.结论:针对HBVS基因mRNA翻译起始区的反义LNA短序列体外能显著抑制HBV基因的表达,且抑制作用最强的序列长度应在15-25个碱基之间.