摘要：为快速检测水貂圆环病毒(MiCV),本试验根据MiCV Cap基因序列设计合成特异性引物,建立了水貂圆环病毒SYBR Green II实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法在模板浓度为1.0×10^(6)~1.0×10^(1) copies/μL范围内呈良好线性关系,相关系数为0.9983。本试验建立的检测方法对水貂阿留申病毒、猪圆环病毒2型、水貂肠炎病毒、犬瘟热病毒和猪伪狂犬病毒进行检测均无特异性扩增,批内和批间CV均小于2%,对重组阳性质粒的检测下限为1.0×10^(1) copies/μL,比普通PCR的敏感度高100倍,对阳性样品DNA的检测下限为2.38×10^(-2) pg/μL,比普通PCR的敏感度高1000倍。应用该方法对吉林省部分毛皮动物养殖场的水貂、狐狸、貉和环境样品进行检测,结果其阳性率分别为57.23%、48.42%、39.71%和68.48%。上述结果表明,本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,为MiCV的诊断及流行病学调查提供技术支持。

摘要：针对猪圆环病毒-Ⅱ型(porcine circovirus typeⅡ,PCV-Ⅱ)、猪瘟病毒(swine fever virus,CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的保守区域设计用于构建荧光定量PCR体系的引物和探针。以构建的重组质粒标准品为模板建立三重荧光定量PCR体系,并对三重荧光定量PCR体系进行优化和特异性检测、灵敏性检测、重复性试验、标准曲线制作。最后利用构建的三重荧光定量PCR体系和普通PCR体系同时进行临床检测,并对两者的检测结果进行对比。结果显示,3种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中均无非特异性扩增;3种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中的灵敏度均可达到10拷贝/μL;单重和三重荧光定量PCR体系组内和组间重复性变异系数均在5%以内;单重和三重荧光定量PCR在稀释度范围内呈现良好的线性关系。应用本研究构建的三重荧光定量PCR体系对106份临床组织样品进行检测,其中PCV-Ⅱ阳性检出率为74.5%,CSFV阳性检出率为34.9%,PRRSV阳性检出率为18.9%,普通PCR检测中PCV-Ⅱ阳性检出率为37.7%,CSFV阳性检出率为16.9%,PRRSV阳性检出率为7.5%。

摘要：试验旨在研究不同种类树叶饲料对林麝营养物质表观消化率和氮平衡的影响。选取12头年龄相同、体况良好的雄性林麝[体重(8.0±0.5)kg],随机分为6组。试验采用6×6拉丁方设计,整个试验期为84 d,共分为6期,每期14 d(预试期11 d,正试期3 d),按照树叶饲料种类分为青皮藤组、桑树叶组、三角枫叶组、榆树叶组、苦楝树叶组及以上树叶等比混合的混合叶组,共6组。结果表明:①桑树叶组基础饲粮和树叶采食量与其他组差异不显著(P>0.05);桑树叶组日粮采食总量显著低于混合树叶组(P0.05)。②日粮粗蛋白(CP)、粗灰分(Ash)、钙(Ca)、碳水化合物(CHO)、总能(GE)、中性洗涤纤维(NDF)表观消化率以桑树叶组较高(P<0.05)。③桑树叶组沉积氮和氮利用率较高(P<0.05)。由此可见,林麝以桑树叶为粗饲料时日粮表观消化率和氮利用率较高。

摘要：为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。

摘要：根据GenBank中鸡BMP4基因序列设计1对特异性引物,从12胚龄皖西白鹅背部皮肤中提取总RNA作为模板,采用RT-PCR技术首次扩增出鹅BMP4基因的部分cDNA序列。将其克隆进pGEM-T easy vector中,经限制酶酶切鉴定后进行测序。将测序结果与鸡、大鼠、小鼠、人和黑猩猩的BMP4核苷酸序列进行比对,发现多处突变。转换成氨基酸序列后发现鹅BMP4的氨基酸序列与其他物种也有多处不同。分析这些突变可能是导致禽类羽毛和哺乳动物毛发之间形态学差异的原因之一。

摘要：为建立一种灵敏且快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的分子检测方法,本研究采用纳米颗粒与普通PCR技术相结合,通过使用Oligo 7设计FPV的特异性引物,建立FPV Nano-PCR分子检测方法,并与普通PCR方法进行对比分析。结果显示,所建立的Nano-PCR的敏感度是普通PCR的10倍(10 fg/μL);特异性试验表明,Nano-PCR只检测猫泛白细胞减少症病毒时呈阳性反应,而检测猫杯状病毒(FCV)、猫疱疹病毒(FHV)以及F81细胞cDNA/DNA时呈阴性反应。利用两种方法对采集的26份临床病料进行平行检测,发现Nano-PCR与普通PCR阳性率分别为53.84%和42.31%。上述结果表明,所建方法具有敏感性好、特异强、简捷快速等优点,可应用于临床样品的快速检测和鉴定,为猫泛白细胞减少症的早期诊断和防控提供了一定技术保障。

摘要：通过对3株沙门氏菌在不同条件下的诱导,确定沙门氏菌进入VBNC状态的条件,为进一步研究VBNC状态的发生机制奠定基础。以改变沙门氏菌培养环境为主,设计11种条件对3株沙门氏菌进行诱导培养,同时观察其可培养菌数的变化及荧光图像的变化。确定标准株S1在LB液体培养基4℃需氧培养到55d时可培养菌数降为零,同时菌体变为球杆菌,可认为其进入VBNC状态。

摘要：以建鲤鱼种为研究对象,采用3×3双因子试验设计,在基础饲料中分别添加0,0.5%,1.5%的二十二碳六烯酸(DHA),每种DHA水平分别添加62.5,125.0,250.0mg/kg维生素E(VE),共配制9种试验饲料,每种饲料饲喂2个养殖密度(15g/L和60g/L)的建鲤,饲养8周。探讨饲料中添加不同水平VE和DHA对不同养殖密度的建鲤生产性能、饲料利用和大小分化的影响。结果表明:养殖密度对建鲤的生长、摄食率和体质量变异系数均有显著影响(P0.05),同一养殖密度下,饲料中添加DHA对低密度各组的生长有显著影响(P0.05)。在本试验条件下,饲料中添加VE和DHA可提高建鲤的生产性能和饲料利用,进而促进生长、降低个体分化,适宜在集约化养殖中作为抗拥挤胁迫的免疫增强剂适量添加。

摘要：配合饲料学是一门交叉学科,汇集了多学科的专业知识。该课程的教学目的是使学生掌握如何合理利用饲料原料,如何根据不同动物的营养需要,设计、配制并且加工各种高品质饲料产品,属于动物科学专业应用性较强的一门课程。笔者分析了"配合饲料学"课程不同章节在教学中出现的问题,并针对教学现状和存在的问题,提出了相应的教学改革方法。

摘要：论述了生态畜牧业研究的理论和实践，对生态畜牧业技术的应用、生态畜牧业模式设计应遵循的生态学原理和原则也做了阐述。