摘要：【目的】研制一种给药途径方便、皮肤透过效果较好的利福昔明透皮剂用于畜禽肠道疾病治疗,并对其进行制剂学和药效学初步评价。【方法】采用紫外分光光度计法检测利福昔明浓度,采用正交设计法进行透皮剂制备试验,通过离体猪皮考察制剂体外透皮能力,以12 h单位面积累积渗透量(Q)为指标筛选处方组分,并测定制剂在40和60℃的存储稳定性。建立小鼠感染鼠伤寒沙门菌模型,通过对比所制透皮剂与灌胃制剂对感染模型的小鼠存活率、脏器载菌量和组织病理变化的影响,对制剂治疗效果进行评价。【结果】利福昔明透皮剂处方组成为:体系含利福昔明2%、氮酮4%、薄荷醇2%、丙酮缩甘油20%、二甲基亚砜30%、无水乙醇补至100%,该透皮剂配方的单位面积累积渗透量平均值在12 h达132.82μg/cm^(2)。制剂在60和40℃放置10 d后,药物含量分别为初始的89.78%和93.53%,较为稳定。与感染不用药组相比,透皮治疗组和灌胃治疗组的各脏器载菌量均显著降低(P<0.05)。利福昔明透皮治疗组小鼠给药后3 d的存活率(91.67%)高于灌胃治疗组(83.33%)。治疗前后鼠盲肠病理切片变化明显,与感染不用药组相比,2个治疗组的肠道黏膜下层水肿减轻,黏膜下层、肠隐窝及肠上皮层处炎性细胞浸润减少,肠绒毛杯状细胞数量增加,肠上皮完整性恢复明显,病变减轻。【结论】利福昔明透皮剂制备工艺简单、稳定性好,能透过皮肤起到较好治疗效果。

摘要：目的通过多种评价指标,利用综合加权评分法以及Box-Behnken设计-响应面法(Box-Behnken design-response surface method,BBD-RSM)全面优化蒲公英Taraxacum mongolicum产地加工关键技术。方法蒲公英根的产地加工主要与切制前不同含水量、不同干燥方式及烘干温度、不同切制厚度3个因素密切相关。比较了蒲公英根在10种不同干燥方法、5种不同切制厚度下各类化学成分的变化。结果优选了蒲公英根产地初加工工艺最优参数为含水量70%,烘干温度50℃,切制厚度(13±2)mm。结论优化出的蒲公英根产地最佳工艺切实可行,工艺简便,可操作性强,进一步丰富蒲公英根质量评价标准,为蒲公英根产地初加工提供参考依据。

摘要：玉米胚性愈伤组织作为受体材料被广泛应用在转基因技术中。利用玉米自交系GS08-Ⅱ幼胚进行诱导培养,通过单因素试验和正交试验设计L_(16)(4^(5))研究蔗糖浓度、2,4-D浓度、脯氨酸浓度及水解酪蛋白浓度4个因素对胚性愈伤组织生长的影响。试验结果表明:各因素对胚性愈伤组织诱导率的影响表现出蔗糖浓度>脯氨酸浓度>水解酪蛋白浓度>2,4-D浓度,蔗糖浓度是影响玉米GS08-Ⅱ胚性愈伤组织产生的最主要因素。诱导产生胚性愈伤组织的最优组合:蔗糖浓度35 g/L,水解酪蛋白浓度0.4 g/L,脯氨酸浓度0.9 g/L,2,4-D浓度2.0 mg/L,此结果与单因素试验最适浓度一致。

摘要：目的以卡拉胶、变性淀粉为主要原料,结合辅料制备植物软胶囊囊皮并进行性能测试。方法采用D-最优混料设计,通过改变各因素的质量制备植物软胶囊囊皮,使用响应面法对囊皮进行力学性能和水蒸气透过系数分析,并优化囊皮的最适配方。结果甘油与水保持一定量时,当κ-卡拉胶0.9 g,ι-卡拉胶10.5g,氧化淀粉1.636g,热处理淀粉16.964g时,由此制得囊皮的抗拉强度达到最大,杨氏模量、水蒸气透过系数达到最小,囊皮的性能最优。结论本实验为植物软胶囊代替动物明胶软胶囊奠定理论基础。

摘要：目的利用统计学方法对重组大肠杆菌发酵培养基进行优化,提高胶原蛋白产量。方法应用Plackett-Burman试验设计法和响应面法,对发酵培养基6种组分配比和2个初始发酵条件进行优化;用Design-Expert软件对实验数据进行多元回归分析,并建立3种主要因素(葡萄糖、混合氮源和K2HPO4)与胶原蛋白产量之间的函数关系。用最终优化的配方进行5次验证试验。结果培养基3个最佳浓度为:葡萄糖为14.69 g/L、混合氮源为15.04 g/L、K2HPO4为11.91 g/L,胶原蛋白表达率可达33.95%。5次验证试验所测得的胶原蛋白平均表达率为34.02%,与预测结果基本一致。结论优化的重组大肠杆菌发酵培养基可显著提高胶原蛋白产量。

摘要：采用多种化学计量学方法优化并建立细脚拟青霉RCEF4339最优原生质体制备工艺。首先,采用单因素优化策略筛选得到细脚拟青霉原生质体制备的最适酶为溶壁酶、其浓度为2 mg/mL、酶解温度32℃、酶解时间3 h、pH 7.0、渗透压稳定剂0.9 mol/L KCl。其次,应用Plackett-Burman设计试验筛选得到影响原生质体生成量的关键因素(酶解时间、pH值和酶解温度)。最后,通过Box-Behnken设计试验对3个关键因素进一步优化。建立多元二次回归模型拟合Box-Behnken设计试验结果,并采用响应面法考察各因素间的交互作用。与此同时,进一步建立神经网络模型,并通过遗传算法寻优,经过上述优化过程获得了细脚拟青霉的最适原生质体制备工艺:渗透压稳定剂为0.9 mol/L的KCl缓冲液,溶壁酶酶解浓度2 mg/mL,酶解时间为3.4 h,酶解温度为28.0℃,pH值为6.0。按照该最优条件制备细脚拟青霉原生质体,其原生质体生成量为4.398 2×10~7个/mL,而原生质体再生率为31.25%,表明采用化学计量学方法优化细脚拟青霉原生质体制备工艺是可行的。

摘要：为探讨人参大片段DNA转化灵芝的可能性,通过电击法将双元细菌人工染色体(BIBAC)载体上的100kb人参大片段DNA转化到灵芝原生质体内。研究发现,在电极间距为4mm,电压强度为240V时,将5μL的人参大片段DNA转化到75μL的灵芝原生质体,在选择培养基上获得了具有再生能力的转化子。根据克隆载体两侧的序列设计两对引物,对转化子进行PCR分析。试验结果表明人参大片段DNA已经转化到灵芝的基因组中。

摘要：【目的】克隆梅花鹿(Cervus nippon)胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)的成熟肽基因,并对其进行原核表达及纯化,以获得具有生物学活性的蛋白,为研究IGF-1在梅花鹿鹿茸生长发育中的调控作用及机理提供参考。【方法】以GenBank中的梅花鹿IGF-1基因序列(登录号:HQ890468)设计1对引物,以构建的梅花鹿pMD-18T-IGF-1重组质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽的基因序列,构建重组质粒pMD-IGF-1,将其插入pET-32a表达载体后,构建pET-32a-IGF-1质粒,鉴定后,将pET-32a-IGF-1转入Rosetta大肠杆菌进行诱导表达(0.6mmol/L IPTG,37℃,4h)后,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测。用Ni-Agarose柱亲和层析试剂盒分离、羟胺裂解纯化目标蛋白,并利用四唑盐比色法(MTT法)和流式细胞仪检测目标蛋白对NIH3T3细胞增殖及不同细胞周期下NIH3T3细胞比例的影响。【结果】获得了梅花鹿IGF-1成熟肽基因序列(234bp);经鉴定,原核表达载体pET-32a-IGF-1构建成功;SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,在Rosetta中成功诱导表达了融合蛋白,且羟胺裂解纯化后的目的蛋白纯度较高;MTT法和细胞周期检测结果表明,复性后的IGF-1重组蛋白能促进细胞增殖。【结论】成功克隆了梅花鹿IGF-1成熟肽基因序列,获得了具有生物学活性的IGF-1蛋白。

摘要：【目的】构建靶向梅花鹿胰岛素样生长因子1基因(IGF1)的microRNA真核表达载体,研究microRNA介导的IGF1基因沉默对鹿茸软骨细胞增殖的影响。【方法】根据IGF1mRNA序列设计并合成4对premicroRNA前体片段,定向克隆于pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体中,构建重组质粒pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR-1、pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR-2、pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR-3和pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR-4;测序分析插入序列的完整性,将重组质粒转染鹿茸软骨细胞,利用相对荧光定量PCR技术检测IGF1mRNA的表达量;在此基础上选择表达量最低的pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR重组质粒转染鹿茸软骨细胞,Western blotting分析IGF1蛋白的表达水平,MTT法和流式细胞仪检测重组质粒对鹿茸软骨细胞体外增殖和细胞周期的影响。【结果】测序结果显示,构建的4组重组质粒插入片段的碱基序列完全正确。转染pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR重组质粒后,鹿茸软骨细胞中IGF1mRNA的表达水平均有所下降,其中转染重组质粒pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR-2组的表达水平最低,因而筛选重组质粒pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR-2为最佳干扰质粒。与对照组相比,IGF1蛋白的表达水平降低;重组质粒pcDNA6.2-Gw/EmGFP-IGF1-miR-2转染组鹿茸软骨细胞的增殖受到抑制,细胞周期S期细胞百分比减少,表明鹿茸软骨细胞停滞在G0/G1期。【结论】梅花鹿IGF1的表达水平受miRNA的调控,表明在鹿茸快速生长过程中,miRNA具有重要的调控作用。

摘要：为了筛选紫萼玉簪根多糖的最佳提取条件,并研究紫萼玉簪根多糖抑菌活性,试验采用超声辅助法提取多糖,用硫酸苯酚法测定多糖含量,在料液比、超声次数、超声功率单因素试验的基础上,采用Box-Behnken响应面设计法建立数学模型,以确定最佳提取工艺;并测定紫萼玉簪根多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果表明：紫萼玉簪根多糖在超声辅助提取中最佳提取工艺为超声功率390 W（52%）,料液比1∶93,超声次数128次（6 min 40 s）,多糖得率为23.6%,与理论值相差0.2百分点;紫萼玉簪根多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的MIC分别为18.75 mg/mL、37.5 mg/mL、75 mg/mL。