摘要：制备重组蛋白pET28a-LHRH-PTD-GFP,利用绿色荧光蛋白GFP,研究LHRH的介导和PTD蛋白的转膜作用。以重组质粒pET28a-PTD-GFP为模板,设计含有LHRH基因序列的PCR引物,经过PCR扩增后双酶切,克隆到原核表达载体p ET28(a)中,构建重组表达质粒pET28a-LHRH-PTD-GFP,并在大肠杆菌中诱导表达,纯化目的蛋白。通过GFP的荧光特性,检测LHRH介导的PTD蛋白的转膜作用。成功构建LHRH-PTD-GFP原核表达载体,融合蛋白相对分子质量约为30 k,纯化得到蛋白浓度为1.62 mg/m L的LHRH-PTD-GFP重组蛋白。荧光显微镜检测结果显示,He La细胞内显现明显的绿色荧光,证明LHRH介导的PTD蛋白具有很好的跨膜特性。该研究结果为下一步构建以LHRH为靶向,以PTD为转膜作用的肿瘤治疗药物提供了理论基础和技术支撑。

摘要：实践教学是培养高素质应用型生物技术专业人才的重要途径,在整个教学体系中占有重要地位。通过分析生物技术专业特征以及生物技术专业实践教学现状,根据农业院校生物技术专业人才培养模式,提出了以课程实验教学为基础,以设计为核心,以毕业实习、专业实习、科研训练为依托,以社会实践为补充等主要环节的实践教学体系等方面加强生物技术专业实践教学改革。

摘要：以猪源偶发分枝杆菌菌株染色体DNA为模版,以recA基因设计引物进行PCR扩增,获得约1000bp的DNA片段,将扩增产物片段克隆至pGM-T载体中,通过蓝白班筛选、质粒PCR鉴定以及序列分析鉴定,成功构建pGM-T-recA重组质粒,为进一步研究偶发分枝杆菌katGI基因及其在偶发分枝杆菌疾病的检验、免疫和预防治疗提供了一定的基础。

摘要：保加利亚乳杆菌凭借其微生物特性和效能优异等特点成为当下产乳酸最重要的微生物菌株之一。乙酸是保加利亚乳杆菌代谢乳酸最主要的副产物,它的大量生成降低葡萄糖的代谢利用率,并且消耗了能量。乙酸激酶是控制乙酸生成的关键酶,敲除乙酸激酶基因,理论上可以阻断戊糖磷酸途径中乙酸的生成,从而优化代谢途径提高葡萄糖代谢乳酸的利用率。研究以Lactobacillus delbrueckii *** ATCC 11842公布的乙酸激酶基因ack序列设计引物,以保加利亚乳杆菌基因组DNA为模板,PCR克隆出ack上下游片段,利用重叠PCR技术将上下游片段拼接在一起,并连入具有温敏性的p Ghost4载体。

摘要：以西瓜汁为原料,通过响应面法优化西瓜汁保健果酒发酵工艺条件,以酒精度为响应值,采用Box-behnken中心组合试验设计建立数学模型,进行响应面分析。结果表明,西瓜汁保健果酒最优发酵工艺条件为:总糖含量26.32%,p H3.54,接种量3.92%,发酵温度25.21℃。在此条件下,酒精度理论值为15.67%(v/v),验证值为15.58%(v/v),与模型预测值基本相符。

摘要：为优选黑皮油松挥发油的最佳提取条件,为黑皮油松松针的进一步综合开发利用提供科学依据,采用水蒸气蒸馏法提取马尾松松针挥发油,通过正交试验,研究颗粒大小、液料比、浸泡时间以及提取时间对黑皮油松松针挥发油提取得率的影响进行研究,并用气相色谱-质谱联用技术对其挥发油中化学成分进行分析。结果表明:黑皮油松最佳提取条件为颗粒大小100目,料液比1∶16,浸泡时间16h,提取时间8h;气相色谱-质谱联用技术从黑皮油松松针挥发油中鉴定出23种化合物,占挥发油总量的57.84%,其中烯烃类占25.13%,芳香烃占12.2%,脂类占9.54%,以及少量的醇、酯类化合物。

摘要：根据TBEV NS5基因序列设计特异性引物,构建标准品,优化荧光定量PCR的反条件和反应体系,将标准品按10^8~10^1拷贝/μL梯度稀释,建立标准曲线。同时分析其敏感性和特异性,并对155份牛血清样品进行检测验证。结果显示,建立了TBEV基于SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR的检测方法。标准曲线在8个浓度梯度间呈现良好的线性关系,扩增效率为97%,组间和组内变异系数均低于2%且无非特异杂峰。敏感性检测显示,荧光定量检测下限为10^1拷贝/μL,灵敏度比半巢式PCR高10倍。该方法对LCMV、SFTSV及TBEV毒株进行检测,仅TBEV出现特异性扩增。临床样品检测结果显示,荧光定量PCR检出TBEV阳性率为14.2%,比半巢式PCR检测阳性率提高了5.2%,两者检测一致率为63.6%。结果表明,成功建立TBEV基于SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR的检测方法,为蜱传病防控奠定基础。

摘要：为建立快速、敏感的蜱源淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)检测方法,根据GenBank中已登录的蜱源LCMV NP基因序列设计半巢式PCR引物,通过优化反应条件建立半巢式PCR检测方法。结果显示,用该方法能扩增出248 bp的目的片段,与LCMV序列(MG554174)的同源性为100%。特异性试验结果显示,该方法对蜱传脑炎病毒、发热板血小板减少综合征病毒、阿龙山病毒的基因扩增无条带。敏感性试验结果显示,该方法最低可以检出0.45×10^(2)copies/μL的蜱源LCMV NP蛋白基因,是普通PCR的1 000倍。对总数为150只森林革蜱、草原革蜱和全沟硬蜱样品的检测发现,半巢式PCR、普通PCR的检出率分别是18%和0。蜱源LCMV半巢式PCR方法的建立为蜱源淋巴细胞脉络丛脑膜炎的防控提供了技术支持。

摘要：目的:为生物活性成分含量较高的黄果人参品种建立快速、准确的分子鉴定方法,提高黄果人参的产量及质量稳定性。方法:扩增可能含有种内多态性的人参叶绿体基因片段,通过直接测序比对分析,发掘黄果人参的单核苷酸多态性位点。根据特异性位点设计黄果人参的品种特异性引物,并利用多重及荧光定量PCR对黄果人参与其他人参品种进行区分和鉴定。结果:在ccsA基因的第772个碱基处发现了黄果人参的非同义突变位点(G/A),通过在3′末端引入错配碱基的方式设计了黄果人参的品种特异性引物。在多重PCR体系下只有黄果人参扩增出了217 bp的品种特异性条带,在荧光定量PCR中只有黄果人参有荧光信号产生,等位基因分型分析可实现黄果人参的快速高通量鉴定。结论:研究建立的多重及位点特异性荧光定量PCR体系可以有效实现黄果人参的快速、准确鉴定,为黄果人参的品种鉴定及田间快速筛选提供了一种有效的DNA分子标记技术手段。

摘要：二化螟虫的泛滥严重影响水稻的产量,cry1Ac基因是目前世界上应用最广泛和最高效的抗虫基因之一,但二化螟虫通过进化会逐渐对其产生抗性。通过改变蛋白结构来构建新的Cry蛋白是解决这一问题的有效途径之一。为分析改造Cry1Ac蛋白C端能否对转基因作物抗虫性产生影响,本研究采用Cry1Ja蛋白的C端替换Cry1Ac蛋白的C端,重组获得CryFLAc蛋白。将cry1Ac基因和编码CryFLAc蛋白的cryFLAc基因分别构建到pTF101.1-ubi植物表达载体上,利用农杆菌介导方法转化到吉林省水稻品种吉粳88中;采用PCR、RT-PCR、免疫检测试纸条检测的方法确定cry1Ac、cryFLAc基因整合和表达情况;通过室内和田间抗虫性测试评价CryFLAc和Cry1Ac蛋白对T1代转基因水稻抗虫性的影响。研究发现:cry1Ac、cryFLAc基因均成功整合到水稻基因组中,并稳定表达;转cryFLAc基因水稻抗二化螟水平达到抗性级别,转cry1Ac基因水稻达到高抗级别;转cry1Ac基因水稻二化螟抗性高于转cryFLAc基因水稻。结果表明:Cry1Ja蛋白的C端替换Cry1Ac蛋白的C端不会提高转基因水稻的抗虫性。上述研究为人工设计合理化改造Cry蛋白提供了新的理论依据。