摘要：目的:构建成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)真核表达载体MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/purofgfr3-DN,并检测FGFR3蛋白在人白血病细胞系K562中的表达。方法:通过PCR法获得FGFR3全长基因(fgfr3-WT)和截短失活型的FGFR3(fgfr3-DN),经双酶切后与真核表达载体MSCV/puro连接,构建MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN重组表达质粒。经PCR、双酶切及测序鉴定正确后,脂质体介导转染至人白血病细胞系K562中,经puromycin抗性筛选后,Western blotting法和流式细胞术检测细胞中FGFR3蛋白的表达。结果:PCR法鉴定MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN重组质粒,2个质粒分别扩增出2 400bp的fgfr3-WT全长基因片段和1 200bp的fgfr3-DN截短型片段,表明成功扩增fgfr3-WT全长基因和1 200bp的fgfr3-DN基因;双酶切MSCV/puro-fgfr3-WT重组质粒,获得2 400bp的目的基因片段;测序显示,fgfr3-WT片段大小为2 400bp,Blast对比分析表明测序结果与GenBank中的FGFR3序列完全一致。fgfr3-DN片段大小与预先设计的序列完全一致,表明成功构建野生型FGFR3和突变失活型FGFR3真核表达载体;Western blotting检测,与对照组(K562-MSCV)比较,MSCV/puro-fgfr3-WT转染组(K562-WT)FGFR3蛋白表达水平增加,表达水平是对照组的10倍以上;MSCV/puro-fgfr3-DN转染组(K562-DN)的截短型的FGFR3(K562-DN)高表达,而对照组和K562-WT转染组则无此片段;流式细胞术检测,K562-WT组有57.5%的细胞高表达FGFR3,K562-DN组有41.5%的细胞高表达FGFR3-DN。结论:成功构建高表达野生型和突变型FGFR3的人白血病细胞系K562。

摘要：从实验内容、实验方案,操作环节、实验技术及老师的知识水平5方面总结了生物化学检验自主设计实验的实践经验,分析了存在的主要问题及解决思路。提出了综合性实验对自主设计实验顺利实施具有重要作用;自主设计实验的定位应以培养学生的兴趣为基本原则;操作的顺利实施需要实验室的合力布置和师生的相互配合,实验室应注意仪器的介绍和更新;老师应注意不断更新知识提高自身素质。

摘要：各医学高等院校医学检验专业实验教学模式均有不同的改革措施,但范围有限,自主设计实验作为实验教学一种创新形式,其重要作用已经得到普遍认同。我们对临床生物化学检验课程的自主设计实验教学进行实践,以探索激发学生创新思维,培养适应现代社会高素质、高质量医学检验人员的实验教学模式。

摘要：立体化实验教学是以能力培养为核心,以教学资源为平台,动用所有教学要素,形成全方位、多层次和网络化的教学模式。为适应临床实践的需要,生物化学检验实验课在基础验证性实验前提下,开设综合性实验、设计性实验和开放性实验,培养学生的动手能力,知识综合运用能力和创新能力。并且,立体化实验采用立体化考核方法,有利于培养学生团队意识,提高学生学习热情和科研能力。